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龟板提取物上调维生素 D 受体表达促骨髓间充质干细胞向成骨分化
侯秋科1 ,吴 　静1 ,易香华1 ,陈东风1 ,2 3 ,周健洪1 ,李伊为1 3 ①
(11 广州中医药大学 解剖学教研室 ,广东 广州 　510405 ; 21 南京大学 医药生物技术国家重点实验室 ,江苏 南京 　210093)
摘　要 :目的 　探讨龟板提取物诱导大鼠骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cells , MSCs) 向成骨分化和对维
生素 D 受体 (VDR) 表达的影响。方法 　从大鼠骨髓中分离 MSCs ,体外培养 ,利用流式细胞术检测 MSCs 表面抗
原 CD44 细胞标志 ,体外培养 MSCs 分成不同的组观察其向成骨分化 ,在培养基中不加任何处理的作为对照组 ,培
养基中加成骨诱导液诱导 MSCs 向成骨分化作为阳性对照组 ,龟板提取物组在培养基中加龟板提取物 ,诱导 7 d
后 ,通过免疫化学染色、Western blotting、原位杂交、RT2PCR 等方法观察龟板提取物对原代培养的 MSCs 向成骨
分化的成骨分化标记分子碱性磷酸酶 (AL P) 、骨桥蛋白 (OPN) 及 VDR 阳性表达及 VDR mRNA 的表达情况。
结果 　免疫组化染色显示 ,龟板提取物组成骨分化标记分子 AL P、OPN 和 VDR 的阳性百分比明显高于对照组 ,
Western blotting 结果也显示龟板提取物组的 AL P、OPN 和 VDR 的蛋白表达水平高于对照组 ;同时原位杂交、RT2
PCR 结果表明 ,龟板提取物诱导 MSCs 向成骨分化过程可明显促进 VDR mRNA 的表达。结论 　龟板提取物可促
MSCs 向成骨分化 ,其机制可能与 VDR 的上调有关。
关键词 :龟板提取物 ; 骨髓间充质干细胞 ; 成骨分化 ; 维生素 D 受体
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0420607206
Induction of Plast rum testudinis extract to mesenchymal stem cells differentiation into osteoblast
through up2regulating expression of vitamin D receptor
HOU Qiu2ke1 , WU Jing1 , YI Xiang2hua1 , CH EN Dong2feng1 ,2 , ZHOU Jian2hong1 , L I Yi2wei1
(11Department of Anatomy , Guangzhou University of Tradional Chinese Medicine , Guangzhou 510405 , China ;
2. The State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology , Nanjing University , Nanjing 210093 , China)
Abstract : Objective 　To investigate vitamin D receptor (VDR) mechanism implicated in the o steoblast
differentiation of mesenchymal stem cells ( MSCs) induced by Pl ast rum test u di nis ext ract s ( P TE) .
Methods 　MSCs were dissociated f rom rat bone marrow and were marked using t he exp ression of CD44 by
t he flow cytomet ry ( FCM) . MSCs Cult ured i n vi t ro were divided into different group s for t he effect s of
MSCs differentiation into o steoblast , MSCs seeded in culture medium wit hout t reat ment served as con2
t rols , MSCs seeded in cult ure medium wit h o steo2induction t reat ment served as po sitive cont rols , P TE was
added and t he cells were incubated for 7 d. Then immunohistochemist ry , Western2blot ting , i n si t u hybrid2
ization , and R T2PCR were applied to observing t he expression of t he osteoblast differentiation specific
marker (AL P , O PN) as well as t he VDR and VDR mRNA expression. Results 　Immunohistorchemist ry
·706·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
①收稿日期 :2009207226　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30472272 , 30772861)
作者简介 :侯秋科 (1983 —) ,女 (壮族) ,广西柳州人 ,研究生在读 ,研究方向为中医药调控神经干细胞防治重大神经疾病。
Tel : (020) 36585448 　E2mail : houqiuke @126. com3 通讯作者　陈东风　Tel : (020) 36588581 　E2mail : cdf27212 @21cn. com
result s demonst rated t hat t he percentages of AL P , O PN , and VDR positive cells in t he P TE group were
markedly higher t han t ho se in t he cont rol group . The Western2blotting also illust rated t hat t he expressing
of AL P , OPN , and VDR in t he P TE group was higher t han t hat in the cont rol group . In parallel , i n si t u
hybridization and R T2PCR result s showed t hat the expression of VDR mRAN was significantly increased
during t he osteoblast differentiation of MSCs induced by P TE. Conclusion 　The P TE could promote MSCs
differentiation into osteoblast , which might be associated wit h t he up2regulation of VDR.
Key words : Pl ast rum test u di nis ext ract ( P TE) ; mesenchymal stem cells ( MSCs) ; osteoblastic dif2
ferentaition ; vitamin D receptor (VDR)
　　骨组织缺损的修复中所采用的方法大都存在供
骨区严重创伤及植骨区骨吸收等问题 ,而近年来骨
组织工程为修复各类型骨组织缺损开拓了更广阔的
前景。种子细胞是骨组织工程的三要素之一 ,选择
合适的种子细胞是骨组织工程至关重要的环节。骨
髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cells , MSCs)
是指存在于骨髓基质中的非造血干细胞 ,具有向多
个方向分化的潜能[1～4 ] ,已成为当前研究的热点 ,经
适当的诱导可以分化为有成骨潜能的细胞。大量的
研究表明多种中药对干细胞的定向分化有调控作
用[5 ,6 ] ,前期研究表明 :龟板提取物及含药血清可促
进体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖[ 7 ,8 ] ,这
可能与龟板促 MSCs 增殖有关[8 ,9 ] ,经长时间龟板
含药血清诱导后也可以有效诱导 MSCs 向成骨分
化[10 ] ,龟板提取物还能够修复氧化损伤的骨髓间充
质干细胞[11 ] 。但是龟板诱导 MSCs 向成骨分化的
活性成分、物质基础不清楚。前期研究结果表明龟
板提取物的化学成分含有脂肪酸类、脂肪酸酯类、甾
体等 3 大类[12 ] 。本实验进一步探讨龟板提取物诱
导 MSCs 向成骨分化的潜能及与维生素 D 受体
(VDR) 的关系 ,为阐明龟板的物质基础及药理效应
提供实验依据。
1 　材料与方法
111 　实验动物 :清洁级 SD 大鼠 10 只 ,220～250
g ,雄性 ,月龄 1～4 个月 ,由广州中医药大学实验动
物中心提供 (粤检证字 2003A010 号) 。
112 　试剂与仪器 :低糖 DMEM 培养基 (low glucose
dulbecco′s modified eagle′s medium , L2DMEM) 、
Percoll 贮存液和胎牛血清 ( FBS) 为 Gibcol 公司产
品 ;CO2孵箱 ,德国 Heraeus 公司产品 ;倒置相差显
微镜 , 日本 Olymp us 公司产品 ; 碱性磷酸 酶
(AL P) 、骨桥蛋白 (O PN) 和 VDR 免疫组织化学
ABC 试剂盒由武汉博士德公司提供 ;一抗 AL P、
OPN、VDR 由武汉博士德公司提供 ;二抗羊抗兔
Ig G2HRP 由武汉博士德公司提供 ;超敏发光液由北
京普利莱公司提供 ;VDR mRNA 原位杂交试剂盒、
原位杂交专用盖玻片、DAB 染色试剂盒均购自武汉
博士德公司 ; 成骨诱导培养液 : 含地塞米松 011
μmol/ L 、维生素 C 50μg/ mL 、10 mmol/ Lβ2甘油磷
酸钠。Trizol ( Invit rogen 公司) ;德国 Q IA GEN 公
司 R T2PCR 试剂盒。CD44 细胞流式试剂盒 :展晨
公司产品。
113 　龟板提取物的制备[12 ] :将龟板 (购于广州市
药材中心) 低温粉碎成粗粉 , 95 % 乙醇渗漉法提
取 ,回收溶剂得到乙醇提取物 ,应用石油醚、醋酸乙
酯递增极性溶剂洗脱 ,得到龟板提取物。龟板提取
物的化学成分含有十六酸甲酯 12135 %、十六酸
15185 %、十 六 酸 乙 酯 12144 %、十 八 酸 甲 酯
12177 %、十八酸 15156 %、十八酸乙酯 20164 %、甾
醇 3135 %、十四酸甾醇脂 3175 %、甾酮 3138 %。龟
板提取物不溶于水 ,二甲基亚砜溶解后配制成不同
浓度的溶液。
114 　MSCs 分离、体外扩增与鉴定[13 ] :将大鼠股
骨、胫骨骨髓用 DM EM 冲出 ,充分混匀 ,转入离心
管 ,300 ×g 离心 10 min ,去上清 ,L2DM EM 重悬 ,离
心去上清后 ,加 4 mL L2DM EM 混匀。Percoll 贮存
液按 0156 ∶0144 混合 ,取 4 mL 放入 10 mL 离心
管内 ,吸骨髓液在离液面 2 cm 处贴管壁缓缓加入。
水平离心机 900 ×g 离心 30 min ,收集单核细胞
层 ,用 DM EM 洗涤两次。然后计数细胞 ,调整密
度 ,按 1 ×102 / cm2密度接种 ,37 ℃、5 % 饱和湿度的
CO2孵箱培养 ,培养液为含 10 % FBS 的 L2DM EM ,
5 d 后更换培养液 ,弃去未贴壁细胞 ,3～4 d 换液 1
次 ,接近融合的 MSCs 用含 0125 % 胰酶室温消化
2～3 min ,按 1 ×104 / cm2 传代。培养 3 代后 ,取出
进行流式细胞技术检测。
115 　MSCs 的诱导分化培养 :传 3 代的 MSCs 以
1 ×105 / cm2 细胞密度接种于 24 孔培养板及 6 孔
板 ,阳性对照组加成骨诱导培养液 ,龟板提取物高剂
量组加入 30μg/ mL [10 ] 提取物 ,龟板提取物低剂量
组加入 3μg/ mL 提取物 ,对照组不加任何处理因
素 ,每 3 天换液 1 次 ,诱导 7 d。
·806· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
116 　免疫组织化学检测 :参照试剂盒操作方法 ,7 d
后 ,用免疫组化方法检测 MSCs 的 AL P、OPN 和
VDR 的阳性表达。将 24 孔板中的细胞用 4 % 多
聚甲醛固定 30 min ;用 0101 mol/ L PBS 液洗 3 次 ,
每次 5 min ;新鲜配制 3 % H2 O2 ,室温浸泡 5～10
min ;用 0101 mol/ L PBS 液洗 ;滴加正常山羊血清 ,
封闭 30 min ; 将血清甩净 ,分别滴加一抗 OPN、
AL P 和 VDR ,恒温下 (37 ℃) 孵育 2 h ;用 0101
mol/ L PBS 液洗 3 次 ,每次 5 min ;滴加生物素化羊
抗兔 Ig G 室温下 30 min ; 用 PBS 液洗 ; 滴加
SABC ,室温 30 min ;用 0101 mol/ L PBS 液洗 ;DAB
显色 ,室温下 20 min ;用 0101 mol/ L PBS 液洗 ;脱
水、透明 ,中性树胶封片。对照组分别用正常山羊血
清和 PBS 代替一抗进行孵育 ,其余步骤同其他组。
117 　原位杂交 :24 孔板培养 7 d 后细胞爬片 ,4 %
多聚甲醛 (含 DEPC) 固定 30 min ,新鲜配制 3 %
过氧化氢2甲醇溶液避光 10 min , 3 % 枸橼酸
1 mL + 胃蛋白酶 2 滴消化 10 min ,预杂交液 38 ℃
于 20 % 的甘油湿盒内孵育 3 h ,杂交液 38 ℃孵育
过夜 ;生物素化羊抗地高辛 37 ℃孵育 1 h ,SABC2
POD 37 ℃孵育 30 min , 生物素化过氧化物酶
37 ℃孵育 30 min。DAB 显色约 10 min ,时间可根
据显色情况掌握。水洗 ,脱水封片。阴性对照分别
用不含探针的杂交缓冲液取代含探针的杂交液 ,及
用正常羊血清取代羊抗地高辛抗体 Ig G 进行孵育。
每组随机取 5 张阳性细胞染色爬片 ,在显微镜下
( ×20) 随机选 10 个视野对每张爬片 VDR 阳性细
胞计数 ,取其平均值。
118 　Western blot ting 检测 AL P、O PN 和 VDR 蛋
白表达 :将诱导 7 d 后的细胞裂解 ,提取细胞总蛋
白 ,分装后 ,取 50μL ,加入 6 ×蛋白质样品缓冲液
(5 ∶1) 混匀 ,在 100 ℃水浴中煮沸 5 min ,各组取
10μL 在 10 % SDS 聚丙烯酰胺凝胶上电泳后 ,电转
至 PVDF 膜 , T TBS 洗 5 min ,共 3 次 ,5 % 脱脂牛
奶封闭 30 min ,分别加兔抗 AL P 和 VDR 多克隆抗
体 (1 ∶1 000) 。4 ℃过夜 , T TBS 洗 5 min ,共 4
次 ,分别与 HRP 标记的二抗羊抗兔 Ig G ( 1 ∶
10 000) 室温下振荡孵育 1 h , T TBS 洗 10 min ,共 4
次 ,加超敏发光液反应 5 min ,在暗室中曝光 ,后在
显影液和定影液中冲洗胶片 ,显像后观察结果。
119 　R T2PCR 检测 VDR mRNA 表达 :提取对照
组、成骨诱导组、龟板提取物组细胞基因组 , 总
RNA 按照 Trizol 试剂盒说明书进行 ; R T2PCR 参
照 Genbank 的 cDNA 序列 ,采用 Primer Premier
510 软件设计引物 ,由上海英骏公司合成。VDR 上
游引物 : 5′2GGAACGT GCCCCGAA TCT GC23′,下
游 引 物 : 3′2CACCCCCA TCTCCACGAACT G25′。
GA PD H 上 游 引 物 : 5′2TAAA GGGCA TCCT2
GGGCTACACT23′,下游引物 :5′2T TACTCCT T G2
GA GGCCA T GTA GG23′。反应条件为 : 93 ℃、2
min ,然后 93 ℃、45 s ,63 ℃、30 s ,共 30 个循环。反
应结束后 ,取 PCR 反应液进行琼脂糖凝胶电泳。
VDR 和 GA PD H 反应条件相同。R T2PCR 产物经
115 % 琼脂糖凝胶电泳 ,以图像分析仪进行吸光度
扫描。
1110 　统计学处理 :每张切片随机选取 10 个 200
倍视野 ,计算其中阳性细胞数和总细胞数 ,求出百分
比 ,所有数值应用 SPSS 1010 统计软件采用方差分
析检验。
2 　结果
211 　流式细胞技术检测结果 :培养所得到的 MSCs
利用流式细胞术检测细胞表面抗原 CD44 细胞标
志 ,结果发现 CD44 阳性细胞达到 98114 % (图 1) 。
图 1 　流式细胞术检测 MSCs 细胞表面抗原 CD44 细胞标志
Fig. 1 　Detection of MSCs for cultured cell
homogeneity CD44 by FCM
212 　免疫组织化学结果
21211 　成骨标记物 OPN 和 AL P 的免疫组化染色
结果 :成骨诱导组和龟板提取物低剂量组、高剂量组
的阳性细胞数明显多于对照组的阳性细胞数 ( P <
0105) ;而龟板提取物高剂量组的阳性细胞数多于低
剂量组 ,低剂量组又稍多于成骨诱导组。结果显示
成骨诱导组促 OPN 和 AL P 的表达 ,而龟板提取物
高剂量组促 OPN 和 AL P 表达作用较强 (图 2) 。
21212 　VDR 的免疫组化染色结果 :成骨诱导组和
龟板提取物低剂量组、高剂量组的阳性细胞数明显
多于对照组的阳性细胞数 ( P < 0105) ;而龟板提取
物高剂量组的阳性细胞数多于低剂量组 ,低剂量组
又稍多于成骨诱导组。结果显示成骨诱导组促
VDR 的表达 ,而龟板提取物高剂量组促 VDR 表达
较成骨诱导组强 (图 3) 。
·906·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
与对照组比较 : 3 P < 01053 P < 01 05 vs cont rol group
图 2 　MSCs 成骨标记物 OPN 和 ALP 免疫组化染色结果
Fig. 2 　Results of immunohistochemistry stain
of OPN and ALP in MSCs
与对照组比较 : 3 P < 01053 P < 01 05 vs cont rol group
图 3 　MSCs 中 VDR 阳性表达 (免疫组化染色) 和 VDR
原位杂交结果
Fig. 3 　Results of VDR positive expression ( immuno2
histochemistry stain) and VDR determined
by in situ hybridization in MSCs
213 　VDR 的原位杂交结果 :与对照组相比 ,成骨诱
导组和龟板提取物组的阳性细胞数明显增多 ( P <
0105) ;龟板提取物组呈明显强阳性且阳性细胞数又
比成骨诱导组的多 (图 3) 。
214 　Western blot ting 检测 AL P、O PN 和 VDR 蛋
白的表达 : 成骨诱导组的 AL P、OPN (图 4) 和
VDR (图 5) 蛋白的表达水平均高于对照组 ,而龟板
提取物组的 AL P、OPN、VDR 蛋白表达水平又高于
成骨诱导组 (图 4) 。
215 　R T2PCR 结果 :成骨诱导组的 VDR mRNA
表达升高 ,与对照组相比有显著差异 ;龟板提取物组
的 VDR mRNA 的表达比成骨诱导组升高。半定
量结果以 VDR 与 GADP H 的比值表示 (图 5) 。
图 4 　Western blotting 检测 MSCs 中 ALP 和 OPN
mRNA 表达结果
Fig. 4 　Results of ALP and OPN mRNA expression
in MSCs determined by Western blotting
图 5 　MSCs 中 VDR mRNA 和蛋白表达
Fig. 5 　mRNA and protein expression of VDR in MSCs
3 　讨论
　　骨髓间充质干细胞 ( MSCs) 是一类来源于中
胚层的未分化的间充质干细胞 ,它能分化为中胚层
的多种成熟组织细胞 , 如脂肪、肌肉、骨和软骨
等[14 ] 。MSCs 获取容易、创伤微小 ,具有无限扩增
和多分化潜能 ,因自体移植不存在免疫排斥反应而
受到医学研究者的青睐。同时 ,MSCs 作为骨组织
工程最有希望和潜力的种子细胞 ,是目前研究最多
的干细胞之一。开发促进 MSCs 向成骨细胞分化
的新药已成为当前研究的热点。以中医“肾主骨生
髓”的理论为指导依据 ,前期实验已发现 MSCs 在
·016· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
龟板含药血清诱导作用下 ,可向成骨细胞方向分化 ,
表现为 AL P 活性升高[10 ] 。在成骨细胞系中 AL P
的表达作为成骨活动是否活跃的一种标志 , MSCs
的 AL P 的活性越高 ,说明它向成骨细胞分化的程
度越高 ;成骨细胞标记物 O PN 也是成骨分化的标
志。本实验用流式细胞技术检测的 MSCs 的纯度 ,
CD44 是 MSCs 的重要标记物 ,免疫组化结果显示
龟板提取物能增加 MSCs 定向成骨分化标记物
AL P、OPN 阳性表达 ,Western blot ting 结果显示龟
板提取物组的 AL P、OPN 和 VDR 的蛋白表达水平
明显高于对照组。中医补肾药龟板的化学成分复
杂 ,其中发现龟板的醋酸乙酯部位分离出来的成分
含有与成骨诱导剂地塞米松类似的甾类成分 ,甾类
化合物主要是甾醇脂和甾酮类[15 ] 。当前 ,有机小分
子具有促进干细胞增殖与分化的作用的研究引起人
们的普遍关注。近期报道龟板提取物具有促进
MSCs 增殖的作用 ,进一步表明有机小分子对干细
胞的增殖与分化的作用对发展细胞工程、组织构建
以及基因治疗等方面具有重要意义[16 ,17 ] 。
核受体 (nuclear receptor , N R) 是一类在生物
体内广泛分布的、配体依赖的转录因子 ,其成员众
多 ,构成了一个大家族 ,可分为 3 大类 :类固醇激素
受体、非类固醇激素受体和孤儿核受体。VDR 作为
亲核蛋白 ,属于类固醇激素/ 甲状腺激素受体超家族
成员 ,是钙平衡和骨代谢的主要调节因子。VDR 是
介导 1 ,25 (O H) 2 D3 发挥生物效应的核内生物大分
子 ,具有抗增殖、促分化的作用。另外 ,VDR 可参与
许多基因的转录调控 ,与影响成骨分化中有着密切
的联系。MSCs 具有多向分化潜能 ,体外培养时只
有一部分能自动分化成骨 ,其成骨分化很大程度上
依赖诱导条件 ,其中基本的辅剂为地塞米松 (Dex) 、
β2甘油磷酸钠 (β2GP) 和维生素 C (Vit C) [18 ] 。Dex
可诱导 MSCs 分化表达骨钙素 (OCN) ,增强骨桥
素 (OP) 和 Ⅰ型胶原 (Col Ⅰ) mRNA ,同时还可以
调节成骨样细胞合成胰岛素生长因子 ( IGFs) 和促
进胶原合成的作用 ,刺激其 A KP 活性。β2GP 提供
磷离子作为 A KP 作用的底物 ,诱导和激活 A KP ,
促进有机磷向无机磷转化 ,并加速钙盐沉着。Vit C
可通过多种途径如基因转录、羟基化以及前胶原形
成等刺激细胞外胶原基质的生物合成 ,含胶原的细
胞外基质合成是诱导成骨的必须要求 , 研究证
实[19 ] ,Vit C 可诱导骨髓基质细胞 ( bone marrow
st romal cells , BMSCs) 的 A KP 活性 ,促进成骨标
记蛋白 mRNA 的表达、钙的沉积、矿化结节的形
成。Vit C 诱导成骨是在 Col Ⅰ形成的基础上可能
继发激活 BMPs 的信号转导途径 ,或通过整合素
α2β1 (胶原特异性受体) 与胶原作用 ,激活局部黏合
酶及丝裂原活化的蛋白激酶通道 ( MA KP) 所致。
在 Vit C 存在时 ,β2GP (5 mmol/ L ) 对 A KP 的活
性增加无明显作用 ,对于 Vit C 与β2GP 的协同作
用还有待进一步研究。同时通过研究 VDR 基因敲
除小鼠发现 , Vit C 的大多数生物学作用是通过
VDR 介导的 , VDR 缺陷可引起多种疾病的发
生[20 ] 。免疫组化结果显示龟板提取物能增加 VDR
的阳性细胞数 , Western blot ting 结果显示龟板提
取物组的 VDR 的蛋白表达水平明显高于对照组 ,
原位杂交表明龟板醋酸乙酯部位能增加 VDR 的阳
性细胞数 ,同时 R T2PCR 亦表明龟板提取物能上调
MSCs 定向成骨分化过程 VDR mRNA 的表达
水平。
综上所述 ,龟板提取物促进 MSCs 向成骨分化
可能与其内的小分子脂肪酸类、脂肪酸酯类、甾体直
接进入细胞膜作用内部核受体有关。龟板提取物可
上调 MSCs 定向成骨分化过程中 VDR 的表达 ,这
在一定的程度上揭示龟板促进 MSCs 定向成骨分
化的可能机制。
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委陵菜黄酮对正常小鼠及四氧嘧啶所致糖尿病小鼠血糖与血脂的影响
乔 　卫 ,赵 　川 ,卢 　滨 ,张彦文 ,段宏泉 3 ①
(天津医科大学药学院 基础医学研究中心 ,天津 　300070)
摘 　要 :目的 　研究委陵菜黄酮对正常小鼠及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖、血脂的影响。方法 　以四氧嘧啶制
备糖尿病小鼠模型 ,糖尿病小鼠分别给予反式和顺式委陵菜黄酮 ,按照不同剂量连续给药 15 d ,采血测量空腹血
糖 ,测定血清甘油三酯 ( T G) 和总胆固醇 ( TC) 水平 ;并观察各组小鼠胰腺组织病理学的改变。结果 　委陵菜黄
酮可显著降低实验性糖尿病小鼠的血糖、T G 和 TC 水平 ,且胰腺组织病理学较模型组均有不同程度的改善。结论
委陵菜黄酮对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠具有降血糖和降血脂的作用 ,但对正常小鼠的血糖、血脂没有影响。
关键词 :委陵菜黄酮 ; 糖尿病 ; 血脂
中图分类号 :R286172 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0420612203
　　委陵菜 Potenti l l a chi nensis Ser . ,别名翻白草、
白头翁、痢疾草等 ,属蔷薇科委陵菜属 ,为多年生草
本 ,全草及根入药。有清热润燥 ,凉血解毒 ,止血消
肿 ,止痢之功效 ;多用于治疗痢疾、疟疾、痈肿、各种
出血[ 1 ] 。临床上多以其单方或复方治疗糖尿病 ,此
外委陵菜还有抗菌 ,增强免疫的作用。
本课题组前期已经从委陵菜中分离筛选出具有
抗糖尿病作用的活性成分 :椴树苷 (tiliro side[ 2 ] ,委
陵菜黄酮 ,反式和顺式委陵菜黄酮) ,即山柰酚232O2
β2D2(62O2t rans2对羟基桂皮酰基) 葡萄糖苷和山柰
酚232O2β2D2(62O2cis2对羟基桂皮酰基 ) 葡萄糖
苷[3 ,4 ] 。本实验拟研究这两种委陵菜黄酮对正常小
鼠及四氧嘧啶所致糖尿病小鼠血糖、血脂的影响 ,并
探讨其作用机制 ,以阐明委陵菜的物质基础。
1 　材料
111 　实验动物 :昆明种小鼠 ,雌雄兼用 , (24 ±2) g ,
由军事医学科学院实验动物中心提供 ,许可证号
SCXK2(军) 20022001。实验前在实验室适应饲养 1
周 ,室温 (22 ±2) ℃,相对湿度 65 %～70 %。日光
照 12 h ,自由饮食、摄水。
112 　药品、试剂与仪器 :顺式和反式委陵菜黄酮 ,自
制 , 高效液相色谱法测定其质量分数分别为
9417 %、9814 % (峰面积归一化法) ,四氧嘧啶 ( Sig2
ma 公司) ,盐酸二甲双胍片 (天津太平洋制药公司 ,
批号 061104) 。甘油三酯 ( T G) 试剂盒、总胆固醇
( TC) 试剂盒 (中生北控生物科技有限公司) 。血糖
·216· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
①收稿日期 :2009206227　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30772635) ; 天津市自然科学基金资助项目 (07 GCZDJ C05100)
作者简介 :乔　卫 (1968 —) ,女 ,天津人 ,副教授 ,博士 ,硕士生导师 ,主要从事中药药理学研究。
Tel : (022) 23529181 　E2mail : qiaowei @tijmu. edu. cn3 通讯作者　段宏泉　Tel : (022) 23542018 　E2mail : duanhq @tijmu. edu. cn