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2010201453364 20100330
卷柏提取物对去卵巢大鼠骨代谢的影响
郑晓珂1, 2 ,陈克宇2 , 侯庆伟2 , 王小兰2 ,张 鑫2 ,李冬梅2 *
( 1 河南中医学院,河南 郑州 450008; 2 河南省中药开发工程技术研究中心, 河南 郑州 450008)
摘 要:目的 研究卷柏提取部位 ( A、B、C、D) 对去卵巢大鼠血清雌二醇水平及骨代谢生化指标的影响, 并初步探
讨其作用机制。方法 采用 6 月龄雌性 Wistar 大鼠 70 只, 按体质量随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和 4
个卷柏不同提取部位用药组,每组 10 只。除假手术组外, 其余各组切除双侧卵巢建立模型。手术 1 周后开始给
药,连续给药 26 周后处死大鼠。用放射免疫法检测雌二醇 ( E2 )、肿瘤坏死因子( T NF)、血清骨钙素 ( BGP )、降
钙素 ( CT ) 水平,用常规生化法检测血清碱性磷酸酶 ( ALP )、抗酒石酸酸性磷酸酶 ( T RAP) 活性。结果 大鼠去
除卵巢以后, E2、CT 水平明显降低, ALP、T RAP、BGP、T NF水平明显升高。给药 26 周后,用药组 ALP、T RAP、
BGP、T NF水平比模型组明显降低 ( P< 0 01) ; E2、CT 水平明显升高 ( P < 0 01)。结论 卷柏提取物对去卵巢
大鼠骨代谢有一定的调节作用,能够提高血清雌激素水平,提示卷柏提取物对骨质疏松症有一定预防和治疗作用。
关键词:卷柏; 去卵巢; 雌二醇; 骨代谢; 骨质疏松症
中图分类号: R285 5 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 10 1686 04
卷柏为蕨类卷柏科 ( Selaginellaceae) 植物卷柏
Selag inel la tamar iscina ( Beauv. ) Spring 的全草,
为多年生草本植物, 又名长生不死草、九死还魂草、
石莲花、万年青 [ 1]。卷柏为传统中药,早在 本经!中
已有记载,将其列为上品,述其∀主治五脏邪气,女子
阴中寒热痛, 癥瘕血闭绝子。#卷柏和垫状卷柏 S.
pulv inata ( Hook. et Gr ev. ) M ax im. 一直被 中国
药典!(一部)收载,作为卷柏的药材使用。
本实验室前期对卷柏化学成分进行了全面系统
的研究,从中分离得到大量的黄酮类、木脂素类、核
苷类和其他多酚类化合物成分 [ 28] ,并对其药理活性
进行了初步的研究。在前期实验中发现, 卷柏提取
物能增加性未成熟小鼠子宫系数,可使小鼠子宫质
量增加,具有雌激素样作用[ 910]。去卵巢大鼠所引
起的生物学上的变化与妇女绝经后生理上改变相
似,主要是由于体内雌激素水平下降而引起骨质疏
松[ 11]。本实验选用去卵巢大鼠模型, 探讨卷柏提取
物长期作用对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响, 为卷
柏抗骨质疏松有效成分的活性筛选及其机制的研究
提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1 1 实验动物:雌性 Wistar 大鼠 70 只, 6月龄,平
均体质量 200~ 220 g (郑州大学河南省动物实验中
心,合格证号:豫 20080013) , 实验期间在二级动物
房喂养,环境温度为 ( 25 ∃ 1) % 。
1 2 药物制备:卷柏购自本草国药堂责任有限公司
(批号 20080321) , 经河南中医学院陈随清教授、董
诚明教授鉴定为卷柏属植物卷柏 S . tamar iscina
( Beauv. ) Spring。卷柏干燥全草 8 98 kg , 80% 乙
醇回流提取 2次, 每次 2 h, 合并滤液, 减压干燥,得
到 A ( 350 1 g, 总部位) , 然后上聚酰胺柱, 用水和
不同体积分数乙醇梯度洗脱,得到 B ( 100 8 g, 水部
位)、C ( 66 34 g , 50% 乙醇部位)、D ( 86 06 g, 80%
乙醇部位) 4个部位。
1 3 主要试剂和仪器: 尼尔雌醇片 ( Tabellae
Nilest rioli) , 1 mg /片 (上海华联,批号 071103) ;碱
性磷酸酶 ( ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶 ( TRAP)
试剂盒 (南京建成生物工程研究所生产) ; 雌二醇
&1686& 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
收稿日期: 20100116 基金项目: ∀ 重大新药创制#国家科技重大专项 ( 2009ZX09103440) ; 重大公益性科研招标项目 ( 08110091800)作者简介:郑晓珂( 1962 ∋ ) ,女,博士,教授,硕士生导师,主要从事中药活性成分及其作用机制研究。
T el : ( 0371) 65575963 Email: zh engxk . 2006@ yahoo. com. cn
( E2 ) 试剂盒 (北京科美东雅生物技术有限公司) ;
骨钙素 ( BGP )、降钙素 ( CT )、肿瘤坏死因子
( TN F) 放免试剂盒 (北京普尔伟业生物科技有限
公司)。
奥林巴斯 AU400 全自动生化分析仪, 放射免
疫分析仪, 可见紫外分光光度计 ( 岛津 UV ∋
2201) ,电热恒温水浴箱, KDC ∋ 160 HR 高速低温
冷冻离心机 (科大创新股份有限公司中佳分公司) ,
电子天平 (梅特勒托利多仪器 (上海) 有限公司产
品) , 超低温冰箱等。
1 4 动物造模、分组及给药: 70 只大鼠适应性喂养
3 d,随机分为假手术组,模型组, 阳性对照 (尼尔雌
醇片, 1 mg/ kg ) 组,卷柏提取物 A ( 300 mg/ kg )、B
( 85 mg / kg)、C ( 56 84 mg / kg )、D ( 73 74 mg/ kg )
组,每组 10 只。参考文献方法[ 12] ,将大鼠用 3 5%
水合氯醛 ( 1 mL/ 100 g) ip 麻醉,俯卧于手术台上,
四肢固定,背部正中 (肋弓下缘) 处备皮,络合碘消
毒,切开皮肤,于脊柱旁 1 cm ,距肋弓下缘 1 cm, 依
次切开肌肉,剪开腹膜进入腹腔, 可见乳白色组织,
轻轻将之提出腹腔,即可见被包裹的粉红色黄豆大
小∀桑堪样#卵巢, 分离后钳夹、结扎, 剪去卵巢。其
中假手术组大鼠进入腹腔后取一小部分脂肪, 检查
有无渗血,分层缝合皮肤, 给予庆大霉素切口外擦,
保温待麻醉苏醒。各组大鼠自由摄取标准鼠料, 自
由饮水,室温 ( 20~ 22) % 。造模完成后,适应性喂
养 1周开始给药, 每日 1次; 假手术组和模型组 ig
蒸馏水,每日 1次。卷柏各组用药量均按临床用药
量的 20 倍换算, 所有大鼠喂养期间均自由进食饮
水。连续给药 26 周后处死。
1 5 标本采集和指标测定:每周各组大鼠称体质量
1次,实验结束前一天禁食, 眼球取血后脱颈处死。
以 3 500 r/ min 离心 20 min,分离血清,置 - 80 %
冰箱冷藏待测。用放射免疫法检测血清 E2、BGP、
CT、TNF 水平, 常规生化法检测血清 ALP、
T RAP 的浓度。各指标测定参照试剂盒方法操作。
1 6 数据分析: 使用 SPSS13 0 统计软件,数据以
x ∃ s 表示,各组间比较采用单因素方差分析。
2 结果
2 1 卷柏提取物对血清 E2、BGP、CT、T NF水平
的影响:给药 26周后,模型组大鼠 E2、CT 水平明显
下降,与假手术组比较有非常显著差异 ( P< 0 01)。
阳性对照组血清 E2、CT 水平明显升高,与模型组比
较有显著性差异 ( P< 0 01、0 05)。卷柏各用药组
E2、CT 水平明显高于模型组,与模型组比较有非常
显著性差异 ( P< 0 01)。其中 A 组和 D 组升高较
明显 (表 1)。
给药 26周以后,模型组 T NF、BGP 水平明显
高于假手术组 ( P < 0 01)。阳性对照组 TNF、
BGP 水平有所降低, 与模型组比较 TNF无显著
性差异 ( P> 0 05) ,但 BGP 有非常显著差异 ( P<
0 01)。卷柏提取物 A 组和 D 组 T NF水平低于
模型组, A 组与模型组比较有非常显著性差异
( P< 0 01) , 但 D 组与模型组比较无显著性差异
( P> 0 05) ; B组和 C组 TNF水平高于模型组, B
组与模型组比较无显著性差异 ( P> 0 05) , C组与
模型组比较有显著性差异 ( P< 0 05) ; 卷柏各用药
组 BGP 水平明显低于模型组, 与模型组比较有非
常显著性差异 ( P< 0 01)。其中 A 组和 D组升高
较明显 (表 1)。
2 2 卷柏提取物对血清 ALP、T RAP 水平的影响:
给药 26周以后,模型组 A LP、TRAP 活性明显高于
假手术组 ( P< 0 01)。阳性对照组 ALP 活性有降
低趋势,与模型组比较无显著性差异 ( P> 0 05) ,而
T RAP 活性明显降低,与模型组比较有显著性差异
( P< 0 05)。
卷柏各用药组 ALP、TRAP 活性均低于模型
组, A、C、D 组 ALP 活性与模型组比较有非常显著
性差异 ( P< 0 01) , B组与模型组比较有显著性差
表 1 卷柏提取物对去卵巢大鼠血清 E2、BGP、CT、TNF、ALP、TRAP 水平的影响 ( x∃ s)
Table 1 Effect of S. tamariscina extracts on levels of serum E2 , BGP, CT, TNF, ALP, and TRAP of ovariectomized rats (x∃ s)
组 别 动物数/只 E2 / ( pg & mL - 1) TNF/ ( pg& mL- 1 ) CT / ( ng& mL - 1 ) BGP/ ( ng& mL- 1 ) A LP/ ( U & L- 1 ) TRAP/ ( U & L - 1)
假手术 9 23 30∃ 2 584 0 997 ∃ 0 103 2 339 6 ∃ 19 73 1 813∃ 0 261 6 48 420 ∃ 5 740 9 465∃ 1 414
模型 9 14 25∃ 1 126* * 1 725 ∃ 0 152 5* * 228 2 ∃ 18 82* * 3 377∃ 0 407 5* * 62 500 ∃ 7 231* * 12 410∃ 2 272* *
尼尔雌醇 8 18 70∃ 1 469 ( ( 1 653 ∃ 0 108 9 266 6 ∃ 26 04( 2 782∃ 0 275 1( ( 54 330 ∃ 14 730 10 590∃ 1 696(
卷柏提取物 A 9 25 66∃ 1 850 ( ( 1 002 ∃ 0 097 6 ( ( 430 9 ∃ 31 07( ( 2 166∃ 0 306 7( ( 44 660 ∃ 5 046 ( ( 9 199∃ 1 269( (
卷柏提取物 B 8 19 84∃ 1 311 ( ( 1 787 ∃ 0 139 5 404 6 ∃ 11 00( ( 2 281∃ 0 340 7( ( 49 660 ∃ 3 076 ( 10 170∃ 1 413(
卷柏提取物 C 8 16 71∃ 1 607 ( ( 1 875 ∃ 0 099 4 ( 345 5 ∃ 32 76( ( 2 413∃ 0 131 2( ( 52 660 ∃ 3 881 ( ( 9 550∃ 1 485( (
卷柏提取物 D 9 23 69∃ 1 449 ( ( 1 618 ∃ 0 082 3 408 8 ∃ 30 90( ( 2 230∃ 0 146 4( ( 48 200 ∃ 5 263 ( ( 11 79 ∃ 1 935
与假手术组比较: * * P < 0 01; 与模型组比较: ( P< 0 05 ( ( P< 0 01
* * P< 0 01 v s Sham gr ou p; (P < 0 05 ( (P < 0 01 v s model group
&1687&中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
异 ( P< 0 05) ,其中 A 组和 D组下降较明显; A、C
组 TRAP 活性与模型组比较有非常显著性差异
( P< 0 01) , B组与模型组比较有显著性差异 ( P<
0 05) , D 组与模型组比较无显著性差异 ( P >
0 05) ,其中 A组下降较明显 (表 1)。
3 讨论
本实验采用的是去卵巢大鼠动物模型, 即诱发
卵巢功能缺陷而形成的活体动物模型, 卵巢摘除以
后,雌激素水平下降, 导致骨形成和骨吸收失去平
衡,这种模型可以较好地模拟绝经后骨质疏松症的
骨代谢特点及产生的结果。
骨质疏松症是以骨量减少为特征, 骨组织显微
结构改变、骨折危险频度增加的一种系统性骨骼疾
病。前期实验表明卷柏有雌激素样作用, 而雌激素
可通过各种途径参与骨代谢, 在维持骨量平衡、稳定
中具有重要作用。大量研究表明,绝经或切除卵巢
后雌激素缺乏导致骨吸收增加,骨量下降;而雌激素
替代疗法则抑制骨吸收, 减少骨丢失[ 13]。
TNF是一种具有炎症介导活性的细胞因子,
主要作用于破骨细胞形成的早期阶段, 其作用依赖
基质成骨细胞的存在, 可抑制骨形成、促进骨吸
收[ 14] , 同时还可抑制基质成骨细胞的功能, 减少骨
矿量,抑制骨胶原合成, 以及骨形成和钙化 [ 15]。本
实验结果显示, 模型组大鼠血清 E2水平明显降低,
这是由于大鼠卵巢分泌 E2功能丧失, 导致体内 E2
水平下降;大鼠血清中骨吸收刺激因子 TNF量有
所升高,表明在正常情况下 E2对 TNF有一定的
抑制作用,当 E2水平下降时, 解除或降低了这种抑
制作用, 从而使 TNF水平增加, 这与文献报道一
致[ 16]。实验结果显示,卷柏提取物连续 ig 26 周以
后,使血清 E2保持较高水平, 提示卷柏提取物能刺
激体内雌激素分泌,具有雌激素样作用; 血清 TNF
水平下降,表明卷柏提取物对 TNF有下调作用,提
示卷柏可能具有促进骨形成、抑制骨吸收的作用。
CT 是一种重要的钙调节激素, 对维持钙的平
衡起重要作用, 通过受体介导作用能抑制破骨细胞
的活性,抑制骨吸收 [ 17]。本实验结果显示, 大鼠去
卵巢以后, CT 水平明显降低, 表明雌激素水平下
降,降低了甲状腺滤泡旁细胞对 Ca2+ 的敏感性, 从
而减少 CT 的分泌, 降低了对骨吸收的控制能力。
给药后 CT 有所上升, 其中卷柏提取物 A组和 D组
升高较明显,提示 A组和 D组有较强的雌激素样作
用,增加了 CT 的分泌, 升高了对骨吸收的控制能
力,从而抑制了骨吸收。BGP 是由成骨细胞合成和
分泌的非胶原蛋白, 其主要功能是维持骨的正常矿
化速率,抑制异常的磷灰石晶体形成,抑制生长软骨
矿化的速度;它能够较准确地反映成骨细胞的活性,
是衡量骨代谢状况的特异性生化指标[ 18]。ALP 是
一种细胞内酶,在骨代谢的研究中被广泛应用, 定量
检测细胞内的 ALP 活性具有重要意义, 是评价机
体的成骨活性和骨组织钙化能力相对特异性的指
标[ 1 9]。T RAP 主要由破骨细胞释放, 是反映骨吸收
的特征性酶,在骨吸收活跃的部位 TRA P 升高, 由
破骨细胞产生的 T RAP 可进入血液循环。本实验
中去卵巢大鼠由于雌激素减少或缺乏使其对破骨细
胞的抑制作用解除,骨吸收显著增加,随之骨形成也
增加, 使得 ALP、TRAP、BGP 水平升高,骨偶联过
程失衡,破骨细胞性骨吸收作用超过了成骨细胞性
骨形成作用,导致净骨量减少, 产生骨质疏松症, 即
高转换型骨质疏松,结果与以往文献一致[ 20] 。连续
ig 卷柏提取物 26 周以后, ALP、T RAP、BGP 水平
降低,其中 A 组和 D组作用较明显,提示卷柏既有
降低骨转换速率的作用,又有抑制骨吸收的作用,以
保持适度的骨转换,使骨代谢趋于平衡。
以上实验结果显示, 卵巢摘除后 ALP、T RAP、
BGP 明显升高, 表明在正常情况下 E2对 ALP、
T RAP、BGP 有一定的抑制作用, 当卵巢摘除 E2水
平下降时, 解除或降低了这种抑制作用, 从而使
ALP、TRAP、BGP 量增加, 活性增强,促进骨吸收,
抑制骨形成, 导致骨质疏松症的发生。给予卷柏提
取物 26 周后, E2水平显著上升, 对机体骨代谢有一
定的调节作用,有效缓解了骨质疏松的症状。
综上所述,卷柏具有雌激素样作用,主要是通过
调节体内雌激素水平对骨代谢产生影响, 对去卵巢
大鼠模型骨质疏松症有一定的预防和治疗作用。卷
柏提取物A 组和 D组作用比较明显,且 D组用药量
明显低于 A组,是 A 组用药量的 1/ 4, 提示 D可能
是其活性部位,为卷柏抗骨质疏松有效成分的活性
筛选及作用机制的研究提供一定的理论依据。
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中西医结合治疗小儿阑尾脓肿的疗效分析
赵 镭,楼 毅,蒋国平,何 瑾,何 彧,彭学慧*
(浙江大学医学院附属儿童医院,浙江 杭州 310003)
摘 要:目的 观察中西医结合治疗小儿阑尾脓肿的临床疗效。方法 将 150 例患者随机分为治疗组和对照组,
治疗组 75 例采用中西医结合治疗,对照组采用西医治疗。对两组患者治疗后主要症状、体征消退的平均时间、平
均住院时间及辅助检查 (白细胞、CRP、腹部 B 超) 结果进行比较。结果 治疗组的症状、体征消退时间和住院时
间明显短于对照组,治疗组不同时间点 CRP 和白细胞数恢复正常的病例数明显多于对照组。结论 中西医结合
治疗小儿阑尾脓肿能明显提高疗效,缩短住院时间。
关键词:中西医结合; 小儿阑尾脓肿; 疗效分析
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 10 1689 03
小儿阑尾炎是儿童最常见的急腹症之一, 由于
小儿阑尾炎尤其是婴幼儿阑尾炎诊断较为困难, 容
易延误治疗,使小儿阑尾脓肿的发病率偏高。因手
术治疗阑尾脓肿的并发症多, 目前常采用保守治疗,
而单纯西医治疗其缺点是病程长, 复发率高。近 3
年来本院采用中西医结合方法治疗小儿阑尾脓肿,
与单纯西医治疗进行临床观察比较,报道如下。
1 资料与方法
1 1 一般资料:将 150 例小儿阑尾脓肿患者 (均为
本院患者) 随机分为治疗组和对照组。治疗组 75
例,男性 43 例,女性 32 例; 年龄 3~ 15 1 岁, 平均
6 2岁;病程 3~ 15 d, 体温 37 0~ 40 5 % , 白细胞
计数 ( 8 8~ 29 4) ) 109 / L, 以腹痛、腹部不适为首
发症状的 59 例, 以腹胀、恶心、呕吐为首发症状的
11 例, 以发热为首发症状的 4 例, 以腹泻为首发症
状的 1例。对照组 75 例,男性 44 例,女性 31 例;
年龄 3 1~ 15 8 岁, 平均 6 4 岁; 病程 3~ 12 d, 体
温 37 4~ 41 % ,白细胞计数 ( 8 5~ 28 7) ) 109 / L,
以腹痛、腹部不适为首发症状的 52 例, 以腹胀、恶
心、呕吐为首发症状的 15 例, 以发热为首发症状的
7 例, 以腹泻为首发症状的 1 例。两组性别、年龄、
病程经统计学处理,差异无统计学意义 ( P> 0 05)
&1689&中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
收稿日期: 20091225 基金项目:浙江省中医药科研基金资助项目 ( 491040W50612)作者简介:赵 镭( 1980 ∋ ) ,女,浙江省杭州市人,主管技师,学士,研究方向为小儿腹部及心脏的超声诊断。
T el : ( 0571) 8706100752421 Email: f is hlc_zl@ yah oo. com . cn