全 文 ：桑叶酚类物质的变化规律研究
沈维治1, 2 ,廖森泰1, 2 * ,邹宇晓1 ,肖更生1 ,刘吉平2 , 杨春英1
( 1 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 广东省农产品加工公共实验室, 广东 广州 510610;
2 华南农业大学动物科学学院, 广东 广州 510642)
摘 要:目的 测定不同品种桑叶在不同采收时间总多酚及绿原酸、芦丁、安息香酸和黄芪苷 4 种主要酚类单体化
合物的量,初步探讨桑叶酚类物质的变化规律。方法 采用 FolinPheno l法测定桑叶中总酚的量, 采用 HPLC 法
测定绿原酸、芦丁、安息香酸和黄芪苷的量。结果 6 个品种桑叶总多酚量在 4~ 10 月连续 7 个月内变化的趋势基
本相同。各品种中 13 种酚类单体物质的变化比较复杂: 同一品种桑叶中不同酚类物质变化不一样, 不同品种桑叶
中相同酚类物质变化也不一样。结论 不同品种桑叶的酚类单体成分的组成及其变化规律具有品种特异性,在相
同栽培条件及气候条件下,桑叶中酚类物质的量在不同品种之间有差异, 但在所有品种中多酚的量均以绿原酸最
高,其次为芦丁, 再次为安息香酸和黄芪苷。
关键词:桑叶; 多酚;变化规律
中图分类号: R282 7 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 11189003
桑叶性味甘、苦、寒, 归肺、肝经,用于风热感冒、
肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花。桑叶已被 中国药
典!收录。 神农本草经!称桑叶为∀神仙叶#, 具有疏
散风热、益肝通气、降压利尿等功效; 本草纲目!记
载:桑叶∀汁煎代茗,能止消渴#, ∀灸熟煎饮, 代茶止
渴# [ 1] ; 历代中医药典籍中有许多关于桑叶治疗消渴
症的记载,现代药理学研究表明桑叶除具有传统的
药用价值外, 还具有抗氧化、抗衰老、调血脂、降血
糖[ 2]、抗应激、增强机体耐力、降低血清胆固醇、调节
肾上腺功能及抗癌等作用, 桑叶对微生物也有抑制
作用,已经被国家卫生部正式列入∀既是食品又是药
品#的名单。
植物多酚为植物体内的复杂酚类次生代谢物,
具有多元酚结构, 主要存在于植物的皮、根、叶、果
中,在植物中的量仅次于纤维素、半纤维素和木质
素[ 3]。桑叶中富含的多酚类物质因其化学结构具有
活泼的羟基氧, 能在多酚氧化酶作用下终止生物体
内自由基的链锁反应, 起到清除自由基和消除自由
基毒性的作用 [ 4] ,从而表现出抗衰老、抗辐射、防治
肿瘤及增加机体免疫力等多种生物活性 [ 5]。研究表
明,桑叶多酚主要由绿原酸、芸香苷等单体成分所组
成[ 6]。本研究采用高效液相色谱法对不同采摘时间
和不同品种桑叶中的酚类物质的变化规律进行研
究,以期对桑叶多酚类成分进行比较全面的考察, 为
桑叶药材的鉴别以及质量评价提供依据。
1 材料与方法
1 1 材料及试剂、仪器
1 1 1 材料: 供试桑叶为育 2、紫白 4、大 10、湘
7920、抗青 10 号、粤桑 11号 6个品种, 采于广东省
农业科学院大丰基地桑园。60 ∃ 烘干至恒定质量,
粉碎,过 60目筛, 储藏备用。
1 1 2 对照品:没食子酸、龙胆酸、绿原酸、儿茶素、
香草酸、咖啡酸、丁香酸、表儿茶素、芦丁、金丝桃苷、
安息香酸、黄芪苷、槲皮素。其中安息香酸、丁香酸、
香草酸、咖啡酸、龙胆酸由美国 Sigma公司生产, 其
余均为国产。
1 1 3 试剂:乙醇(分析纯) ,没食子酸(分析纯) ,冰
醋酸(分析纯) ,乙腈(色谱纯)。
1 1 4 仪器: Ag ilent T echnolog ies 1200 Seris高效
液相色谱仪(安捷伦科技有限公司) , UV % 1700紫
外分光光度计(日本岛津) , PHS % 3C 精密 pH 计
(上海雷磁仪器厂) , KS % 300E &型超声波清洗机
(宁波海曙科生超声设备有限公司) , EYELA N %
1001旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)。
1 2 桑叶样品采集: 6个品种从 4月份到 10月份
每个月采集一次。
1 3 酚类物质的提取:酚类物质提取采用超声波提
取法,将各品种的干燥桑叶粉碎,过 60目筛,准确称
取 1 0 g, 用 40 mL70%乙醇( pH 4)于超声波清洗
机中提取 30 m in, 提取液减压浓缩, 用纯净水定容
∋1890∋ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
收稿日期: 20100330 基金项目:广东省自然科学基金团队项目(粤科基字[ 2009] 2号;现代农业产业技术体系建设专项资金(财教[ 2008] 370号 ) ;广东省科技厅社会发展攻关项目(编号 2008A030101001)作者简介:沈维治( 1982 % ) ,男,湖南省岳阳市人,硕士研究生。Email: s kyforce12@ 163 com
* 通讯作者 廖森泰 T el: ( 020) 87596248 Email: liaost@ 163 com
至 25 mL,摇匀, 4 ∃ 保存备测。
1 4 总酚的测定: 桑叶总酚的测定采用 FolinCio
calteu法 [ 7]。取 0 2 mL 提取液定容至 10 mL,取 1
mL 稀释样品, 加入 1 mL 福林酚试剂和 2 mL 10%
碳酸钠溶液,混匀, 置于 25 ∃ 水浴60 min后,在765
nm 下测定吸光度,测定 3次取其平均值。
1 5 色谱条件: ZORBAX SBC18色谱柱( 250 mm (
46 mm, 5 m) ;流动相 A: 乙腈, B: 0 4%冰醋酸; 体
积流量 1 0 mL/ min;柱温30 ∃ ;检测波长 280 nm;
梯度洗脱程序: 流动相 B 在 0~ 40 min 时, 95% )
75% ;在 40~ 45 m in时, 75% ) 65% ;在 45~ 50 m in
时, 65% ) 50% ;在 50~ 55 min时, 50% ) 45%。根
据样品的出峰保留时间比对对照品的保留时间, 确
定样品中单体酚类物质的组成; 外标法测定每个品
种单体酚类物质的量。
1 6 对照品溶液配制:准确称取对照品各 0 010 0
g,用纯甲醇定容至 10 mL, 4 ∃ 保存备测。
2 结果与分析
2 1 不同桑叶品种在不同采集时间总多酚量变化
2 1 1 没食子酸标准曲线和方程:以溶液质量浓度
(g/ mL)为横坐标,吸光度( A )为纵坐标,制作标准
曲线并得出回归方程与回归系数。回归方程为:
Y= 0 040 4 X + 0 003 2, r = 0 999 1,线性范围为
4~ 16 g / mL。
2 1 2 品种和采集时间对桑叶总多酚的量变化的
影响:季节变化会引起温度、光照等生态因子的改
变,桑叶成熟度和体内物质积累也受季节影响。选
取 6个品种分别在 7 个月份采收,进行桑叶总多酚
的测定,由图 1结果可知,各个品种间总多酚量在 4
月份最低,到 5 月份时达到最大值。5月过后逐渐
下降, 7到 8月份开始又缓慢上升直至 10月份, 量
有较大的增多。
图 1 不同品种桑叶在不同采集时间的总酚量的变化
Fig 1 Change of total polyphenol in mulberry leaves
of dif ferent varieties in dif ferent collection times
2 2 采集时间对桑叶中主要单体酚类物质量变化
的影响
2 2 1 液相色谱标准曲线的制备:在确定的色谱条
件下测定不同质量浓度的对照品混合液, 以各梯度
质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,得到酚类单体
化合物的回归方程(表 1)。各对照品质量浓度与峰
面积的相关性良好, r> 0 999 2。
表 1 13 种酚单体的标准曲线
Table 1 Standard curves of 13 kinds of polyphenol monomer
化合物 线性回归方程 r 线性范围/ ng tR/ min
没食子酸 Y= 2 234 93 X+ 15 49 0 999 2 2 02~ 20 200 5 483
龙胆酸 Y= 606 23 X+ 4 11 0 999 6 8 627~ 11 000 13 372
绿原酸 Y= 2 017 63 X- 30 163 0 999 4 7 02~ 20 800 15 738
儿茶素 Y= 689 09 X+ 28 66 0 999 5 11 48~ 20 200 16 038
香草酸 Y= 1 592 73 X+ 5 07 0 999 9 0 545~ 10 700 18 669
咖啡酸 Y= 3 724 23 X+ 6 61 0 999 9 0 427~ 10 900 19 077
丁香酸 Y= 3 082 04 X+ 0 14 0 999 7 2 76~ 21 600 19 954
表儿茶素 Y= 706 07 X- 0 61 0 999 8 9 66~ 20 200 21 090
芦丁 Y= 740 46 X- 2 14 0 999 4 9 19~ 20 600 29 929
金丝桃苷 Y= 961 88 X+ 1 48 1 000 0 1 03~ 20 200 30 846
安息香酸 Y= 1 862 21 X+ 13 30 0 999 9 29 96~ 10 700 33 949
黄芪苷 Y= 1 188 83 X+ 5 97 0 999 9 4 27~ 20 200 35 629
槲皮素 Y= 1 438 25 X- 1 45 0 999 7 5 75~ 20 200 47 608
2 2 2 6个桑叶品种在 4~ 10月 7个月份中主要
单体酚类物质的量变化:用本实验确定的 HPLC测
定方法对 6个桑树品种桑叶在 4~ 10月 7个月份中
4种主要单体酚类物质的量进行了测定,由表 2结
果可知,在不同月份, 4种主要单体酚类物质在 6个
桑树品种桑叶中的量变化比较复杂。绿原酸的量以
紫白 4最高,育 2较低;多数品种中绿原酸在不同月
份中变化规律相似, 4月份时的量均不高, 在 5月份
时的量达到最高。芦丁的量以抗青 10号最高,育 2
最低; 4~ 10月,抗青 10号、粤桑 11号、紫白 4中芦
丁的量均先减少后增多。安息香酸的量以粤桑 11
号最高,大 10较低;粤桑 11号、育2、紫白 4、湘 7920
变化趋势大体相同,从 4月份开始增加, 5、6 月份减
少,到 8、9月份又开始增加。黄芪苷的量相差不大,
以育 2和粤桑 11号较高,大 10较低; 从 4月份到 8
月份各品种中黄芪苷的变化趋势基本一样。
2 3 品种育 2在不同采集时间酚类物质液相色色
谱图:育 2在各个月份酚类物质图谱相似,共有峰较
多,说明同一品种桑叶内在质量差别不大,多酚类成
分组成基本一样。峰的多少与峰面积表明不同月份
酚类物质组成和量存在一定的差异。见图 2。
3 讨论
3 1 总多酚变化规律: 6个桑叶品种总多酚在 4~
10月 7 个月份中的量不同, 但变化的趋势基本相
同,各个品种间总多酚在 4月份量最低,到 5月份时
达到最大值。5月过后逐渐下降, 从 7 到 8月份开
始又缓慢上升直至 10月份,有较大的增多。
3 2 不同品种的酚类单体成分的组成及其变化规
∋1891∋中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
表 2 不同月份各品种桑叶中主要单体酚类物质的量
Table 2 Contents of main phenol compounds
in mulberry leaves in different months
化合物 桑叶品种 质量分数/ %
4月 5月 6月 7月 8月 9月 10月
绿原酸 育 2 1 72 1 79 1 79 1 51 1 12 203 1 00
紫白 4 1 95 3 08 2 34 2 00 2 31 223 2 41
大 10 0 97 1 27 2 52 1 33 1 99 105 1 28
湘 7920 1 65 2 15 2 12 2 08 2 14 233 1 68
抗青 10号 2 65 2 84 2 62 1 75 1 21 191 2 21
粤桑 11号 2 43 2 61 1 65 1 44 1 33 222 2 93
芦丁 育 2 0 00 0 00 0 00 0 00 0 00 026 0 44
紫白 4 0 44 0 33 0 56 0 13 0 25 037 0 50
大 10 0 00 0 33 0 61 0 34 1 05 032 0 45
湘 7920 0 00 0 14 0 08 0 43 0 22 027 0 12
抗青 10号 0 96 1 03 0 76 0 86 1 45 151 1 85
粤桑 11号 0 69 0 84 0 75 0 30 0 45 083 0 76
安息香酸育 2 0 62 0 79 0 46 0 39 0 54 056 0 39
紫白 4 0 30 0 69 0 85 0 38 0 49 041 0 28
大 10 0 00 0 09 0 24 0 24 0 22 004 0 09
湘 7920 0 24 0 72 0 56 0 61 0 54 044 0 19
抗青 10号 0 18 0 04 0 03 0 21 0 33 047 0 55
粤桑 11号 0 93 1 00 0 81 0 54 0 61 094 0 97
黄芪苷 育 2 0 37 0 51 0 29 0 41 0 56 084 0 51
紫白 4 0 16 0 40 0 46 0 50 0 55 067 0 88
大 10 0 00 0 26 0 22 0 30 0 57 019 0 29
湘 7920 0 12 0 35 0 25 0 52 0 44 041 0 17
抗青 10号 0 17 0 28 0 15 0 45 0 47 036 0 51
粤桑 11号 0 43 0 53 0 49 0 40 0 66 074 0 88
律:不同品种桑叶的酚类单体成分的组成及其变化规
律具有品种特异性。6个品种桑叶中 13种酚类物质
在4~ 10月 7个月份中的变化比较复杂,同一品种桑
叶中不同的酚类物质变化不一样,不同品种桑叶中相
同的酚类物质变化也不一样。表明在相同栽培条件
t/ min
图 2 育 2品种在不同月份酚类物质色谱图
Fig 2 Chromatogram of variety Yu 2 of phenol
compounds in different months
及气候条件下,桑叶中酚类物质的量在不同品种之
间有差异。但在所有品种中多酚的量均以绿原酸最
高,其次为芦丁,再次为安息香酸和黄芪苷。
本实验所测定的 13种酚类物质中,有两种成分
的加样回收率大于 100% ,可能是方法的本身误差、
处理样品时的误差或样品中的杂质引起的正误差。
有 7种成分的加样回收率低于 95% ,可能是多酚物
质在常温下容易发生化学变化造成的。
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温度及种根大小对附子萌发及苗期性状的影响
罗 意1 ,陈兴福1 * ,杨文钰1 ,舒光明2 ,刘 莎1 , 夏燕莉2
( 1 四川农业大学,四川 雅安 625014; 2 四川省中医药科学院, 四川 成都 610041)
摘 要:目的 阐明不同温度及种根大小对附子萌发及苗期性状的影响。方法 用光照培养箱控制附子的发芽温
度,观察不同温度下不同大小附子种根的发芽情况。结果 变温处理较恒温处理的附子种根发芽时间短, 发芽率、
发芽势和发芽指数均较高,小种根的发芽率、发芽势、发芽指数均高于大、中种根, 苗期性状表现也较好。结论 种
根在 10 g 左右发芽的综合性能优良,早春应加强水分管理提高种根发芽率。
关键词:附子; 温度;种根; 发芽
中图分类号: R282 2 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 11189204
∋1892∋ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
收稿日期: 20100103 基金项目:科技部∀ 十一五#支撑计划项目( 2006BAI06A1201) ;四川省育种攻关项目( 2006yzgg12 % 21)作者简介:罗 意( 1986 % ) ,女,重庆人,在读硕士研究生,从事药用植物生理、栽培等研究。
T el : ( 0835)2882612 Email: kb lfil y@ 163 com
* 通讯作者 陈兴福 T el: ( 0835) 2882612 Email: ch enxf64@ sohu com