全 文 ：314
, 茚三酮反应阳性, 三氯化铁反应阳性。
1H
NMR ( 400 MHz, D2O )
: 7 08 ( 2H , d, J =
8 4 Hz) , 6 78( 2H , d, J= 8 4 H z)为对位取代苯环
上的 4个氢信号, 3 81( 1H , m)为氨基酸的 位 CH
氢信号, 3 08( 1H , m ) , 2 93( 1H , m )为 位 CH 2 氢
信号,推测该化合物可能为酪氨酸, 与文献数据 [ 12]
对照一致, 与酪氨酸对照品同薄层色谱展开, Rf 值
一致,故鉴定该化合物为酪氨酸。
化合物 11: 白色无定形粉末 (水) , 1H
NMR
( 400 MHz, DM SO
d6 )
: 3 81( 1H , m)为氨基酸的 
位 CH 氢信号, 1 80( 1H , m ) , 1 58( 2H , m )分别为
次甲基和亚甲基氢信号, 0 86( 6H , m)为 2 个甲基
氢信号。13C
NMR ( 100 MHz, DM SO
d6 )
: 175 6
( C
1) , 53 8( C
2) , 40 1( C
3) , 24 4( C
4) , 22 2( C

5) , 21 2( C
6)。以上数据与文献报道 [ 13
14]一致, 与
亮氨酸对照品同薄层色谱展开, Rf 值一致, 故鉴定
该化合物为亮氨酸。
化合物 12: 白色无定形粉末 (水) , 1H
NMR
( 400 MHz, DM SO
d6 )
: 3 74( 1H , m)为氨基酸的 
位 CH 氢信号, 0 99( 3H , t , J= 6 9 Hz) , 1 08( 3H ,
d, J = 6 9 Hz) 为两个甲基信号, 1 25 ( 1H , m ) 和
1 47( 1H , m )为一个亚甲基信号, 1 76( 1H , m)为一
个次甲基信号。13C
NMR( 100 MHz, DM SO
d6 )
:
176 5( C
1) , 59 8( C
2) , 36 1( C
3) , 24 7( C
4) ,
14 9( C
5) , 11 2( C
6)。以上数据与文献数据[ 13, 15]
对照一致, 与异亮氨酸对照品同薄层色谱展开, Rf
值一致,故鉴定该化合物为异亮氨酸。
参考文献:
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潜在抗HIV活性内生真菌 Epulorhiza sp 的化学成分研究
郭文娟1, 2 , 郭顺星2 * ∃
( 1 天津工业大学 环境与化学工程学院,天津  300160; 2 中国医学科学院 中国协和医科大学
药用植物研究所,北京  100094)
摘  要:目的  探讨内生真菌 Epulorhiz a sp 中抗 HIV 活性成分。方法  应用微生物培养的方法获得内生真菌
菌丝体,再用溶剂提取, 各种柱色谱和重结晶的方法分离内生真菌中的化学成分, 通过理化常数测定及波谱学方法
鉴定化合物的结构。结果  从内生真菌的醋酸乙酯部位分离得到 11 个单体化合物, 分别为吡咯骈( 1, 2a)
3, 6
二
酮六氢吡嗪( 1)、( 3R , 8aR)
hexahydro
3
( 2
methylpr opyl)
pyr ro lo ( 1, 2a)
pyr azine
1, 4
dione ( 2)、核黄素( 3)、3
羧
基吲哚( 4)、2
羟基
4
氧
3, 4, 5, 6
四氢嘧啶( 5)、腺苷( 6)、胸腺嘧啶 ( 7)、尿嘧啶核苷( 8)、鸟嘌呤核苷 ( 9)、4, 4
二甲
基
1, 7
庚二酸( 10)、
棕榈精( 11)。结论  所有化合物皆为首次从该属真菌中分得, 其中 3
羧基吲哚据文献报道
有抗 HIV 活性。
关键词:金线莲; 内生真菌;抗 H IV
中图分类号: R284 1    文献标识码: A    文章编号: 0253
2670( 2010) 11
1773
03
%1773%中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
∃收稿日期: 2010
04
19                     基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30325047)作者简介:郭文娟( 1980- ) ,女,吉林人,博士,现为天津工业大学讲师,从事天然产物化学的教学与科研工作。
T el : ( 022) 24528055  E
mail: guow en juan@ yah oo cn
* 通讯作者  郭顺星
  近年来,艾滋病感染人数急剧增加,已成为人类
的第四大死亡原因。然而,现有的抗 HIV 化学药物
存在不良反应大、口服利用度低、成本高等缺点, 因
此寻找新的高效低毒的抗 H IV 药物是当务之急 [ 1]。
本实验室从兰科开唇兰属珍稀濒危药用植物金线莲
Anoectochi lus r ox bur ghii ( Wall ) Lindl 中分离筛
选到一种具有抗 HIV 活性的内生真菌 Ep ulorhi z a
sp ,其发酵提取物在 MT/ H IV
1SF33培养体系中对
细胞显示出保护作用,选择指数> 3。为了进一步探
索该真菌中抗 HIV活性成分, 本实验进行了该真菌
的发酵培养和化学成分研究, 分离得到 11个单体化
合物,分别为吡咯骈( 1, 2a)
3, 6
二酮六氢吡嗪( 1)、
( 3R, 8aR )
hexahydro
3
( 2
methy lpropyl )
pyrr olo
( 1, 2a)
pyrazine
1, 4
dione ( 2)、核黄素( 3)、3
羧基
吲哚( 4)、2
羟基
4
氧
3, 4, 5, 6
四氢嘧啶( 5)、腺苷
( 6)、胸腺嘧啶( 7)、尿嘧啶核苷( 8)、鸟嘌呤核苷( 9)、
4, 4
二甲基
1, 7
庚二酸( 10)、
棕榈精( 11)。所有
化合物皆为首次从该属真菌中分得, 其中 3
羧基吲
哚据文献报道有抗 HIV 活性。
1  材料与仪器
1 1  菌种:瘤菌根菌属 Epulor hiz a sp 真菌, 由郭
顺星研究员鉴定,由本实验室提供,保存在麦麸斜面
培养基上。
1 2  培养基:麦麸液体培养基:麦麸 3%(煮 30 m in
取汁) ,葡萄糖 2%, KH 2PO 4 0 3%, MgSO4 0 15%。
麦麸固体培养基:上述麦麸液体培养基加琼脂
0 8% ~ 1 0%。
13  仪器与试剂: X & 4型熔点仪; VARIAN INOVA
600/ 500型核磁共振仪; Micromass Zabspec 质谱
仪; T CQ & 250超声波清洗器; Heidolph wb2000 型
旋转浓缩仪; SHZ & 3型循环水式真空泵。
100~ 200 目粗孔硅胶(青岛海洋化工厂) , 200~
300 目粗孔硅胶(青岛海洋化工厂) ; Sephadex LH
20
凝胶( Pharmacia 公司) ; 石油醚、氯仿、醋酸乙酯、丙
酮、甲醇、正丁醇均为北京化工厂产品;显色剂:香草
醛
浓硫酸、碘、10%磷钼酸等;所用试剂均为分析纯。
2  方法
2 1  发酵工艺流程:试管斜面菌种 ∋平板菌种∋三
角瓶液体种子∋ 300 L 种子罐培养。
2 000 L 发酵罐培养(板框过滤) ∋发酵液 ∋浓
缩∋菌丝体∋干燥
2 2  提取与分离:菌丝体 11 kg 用 95%乙醇提取 3
次,每次 3 h,滤过,合并提取液, 减压浓缩得菌丝体
乙醇提取物 1 8 kg。水分散后, 以等体积石油醚、
醋酸乙酯、正丁醇分别萃取, 依次得 4个极性部位;
菌丝体乙醇提取物的石油醚部位 900 g、醋酸乙酯部
位 160 g、正丁醇部位 150 g、水部位 560 g。醋酸乙
酯部位分别用硅胶、聚酰胺、Sephadex LH
20凝胶
色谱分离,得化合物 1~ 11。
3  结构鉴定
化合物 1: 白色晶体( 16 mg ) , mp 216~ 218
。
1H
NMR( 600 MHz, CDCl3 )
: 4 13( 1H , s, H
2) ,
3 93( 1H , dd, J= 17 5, 4 5 Hz, H
5a) , 4 12( 1H ,
d, J = 4 5 H z, H
5b) , 2 42 ( 1H , m, H
7a ) , 2 10
( 1H , m, H
7b) , 1 98( 1H , m, H
8a) , 2 06( 1H , m,
H
8b) , 3 67( 1H , m, H
9a ) , 3 58 ( 1H , m , H
9b) ;
13C
NMR( 150 MHz, CDCl3 )
: 58 5 ( C
2) , 169 8
( C
3) , 46 6( C
5) , 163 4( C
6) , 28 4( C
7) , 22 4( C

8) , 45 3( C
9)。以上数据与文献报道的吡咯骈( 1,
2a)
3, 6
二酮六氢吡嗪的数据 [ 2] 一致, 推定该化合
物为吡咯骈( 1, 2a)
3, 6
二酮六氢吡嗪。
化合物 2: 白色针晶( 6 mg ) , mp 146~ 148
。
1H
NMR( 600 MHz, CDCl3 )
: 4 14( 1H , s, H
2) ,
4 02( 1H , dd, J= 9 5, 3 Hz, H
5) , 2 35( 1H , m, H

7a) , 2 13( 1H , m , H
7b) , 1 91( 1H , m, H
8a) , 2 03
( 1H , m, H
8b) , 3 61( 1H , m, H
9a) , 3 55( 1H , m,
H
9b) , 1 55( 1H , m, H
10a) , 2 05( 1H , m, H
10b) ,
1 91 ( 1H , m , H
11) , 1 01 ( 3H , d, J= 6 5 Hz,
H
12) , 0 96 ( 3H , d, J= 6 5 Hz, H
13) ; 13C
NMR
( 150 MHz, CDCl3 )
: 58 9( C
2) , 170 3( C
3) , 53 4
( C
5) , 166 2( C
6) , 28 0( C
7) , 22 7( C
8) , 45 4( C

9) , 38 5( C
10) , 24 6( C
11) , 23 3( C
12) , 21 2( C

13)。以上数据与文献报道的( 3R, 8aR )
hexahydro

3
( 2
methy lpr opy l)
pyr rolo ( 1, 2a)
py razine
1, 4

dione 的数据 [ 3]一致, 故推定该化合物为( 3R , 8aR )

hexahydr o
3
( 2
methylpropyl )
py rrolo ( 1, 2a )

pyrazine
1, 4
dione。
化合物 3: 黄色粉末( 5 mg ) , mp 257~ 259
,
分子式为C17H 20N 4O6 ; EI
MS m/ z : 376[ M ] + , 360,
315, 285, 256, 242, 213, 171;
1
H
NMR( 600 MHz,
DM SO
d6 )
: 11 33( 1H , s, H
3) , 7 92 ( 1H , s, H

6) , 7 89 ( 1H , s, H
9) , 2 40 ( 3H , s, CH 3
7) , 2 48
( 3H , s, CH 3
8) , 4 94( 1H , m, H
1(a) , 4 63( 1H , m,
H
1(b) , 3 63 ( 1H , m , H
2() , 4 26( 1H , m, H
3() ,
3 64( 1H , m , H
4() , 3 62( 1H , m , H
5() ; 13C
NMR
( 150 MHz, DM SO
d6 )
: 155 4( C
2) , 159 9( C
4) ,
130 6( C
6) , 132 0( C
7) , 135 6( C
8) , 117 4( C
9) ,
133 9( C
11) , 145 9( C
12) , 150 8( C
13) , 136 7( C

%1774% 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
14) , 20 7( CH3
7) , 18 7( CH 3
8) , 47 2( C
1() , 68 7
( C
2() , 73 5( C
3() , 72 7( C
4() , 63 3( C
5()。以上
数据与文献报道的核黄素光谱数据 [ 4]一致, 推定该
化合物为核黄素。
化合物 4: 黄绿色结晶 ( 28 mg ) , mp 232~
234
; 分 子 式 为 C9H 7NO 2 ; EI
MS m/ z : 161
( [ M ]
+
, 100%) , 其他碎片离子还有 144, 132, 116;
1H
NMR( 600 MHz, CD3OD)
: 7 97( 1H , ddd, J =
8 4, 2 4, 0 6 Hz, H
5) , 7 84 ( 1H , s, H
2 ) , 7 33
( 1H , ddd, J= 8 4, 2 4, 0 6 Hz, H
8) , 7 08( 2H , m,
H
6, 7)。13 C
NMR( 150 MHz, CD3OD)
: 169 5( C

10) , 139 2( C
9) , 133 3( C
2) , 127 8( C
3) , 123 5
( C
5) , 122 4( C
7) , 122 0( C
6) , 112 8( C
8) , 108 8
( C
4) ,波谱数据与 3
羧基吲哚标准谱图[ 5
6] 完全一
致,推知为 3
羧基吲哚。
化合物 5: 无色晶体( 5 mg ) , mp 274~ 276
。
EI
MS m/ z : 114 [ M ] + , 分 子式为 C4H6N 2O 2。
1H
NMR( 600 MHz, DM SO
d6 )
: 2 68( 2H , t, J =
6 6 Hz, H
5) , 3 45( 2H , t , J= 6 6 Hz, H
6) , 以上
数据与 2
羟基
4
氧
3, 4, 5, 6
四氢嘧啶标准谱图[ 5
6]
对照完全一致, 推定该化合物为 2
羟基
4
氧
3, 4,
5, 6
四氢嘧啶。
化合物 6: 黄色晶性粉末 ( 53 mg ) , mp 235~
237
, 分子式为 C10H 13N 5O 4。EI
MS m/ z : 267
[ M ] + , 237 [ M - CH 2O ] + , 178, 148, 135, 108。
1H
NMR( 600 MHz, CD3OD)
: 8 25( 1H , s, H
6) ,
8 46( 1H , s, H
2) ; 13C
NMR( 150 MHz, CD3OD)
:
152 4( C
2) , 149 1( C
4) , 119 4( C
5) , 156 2( C
6) ,
140 0( C
8) , 88 0( C
1() , 73 5( C
2() , 70 7( C
3() ,
86 0( C
4() , 61 7( C
5()。以上数据与文献报道的
腺苷波谱数据[ 7] 一致,推定该化合物为腺苷。
化合物 7:无色粉末( 20 mg) , mp 308~ 310
,
分子式为C5H 6N 2O 2 ; EI
MS m/ z : 126[ M ] + , 112,
83, 55, 43。 13C
NMR ( 150 MHz, DM SO
d6 )
:
166 3( C
4) , 153 3( C
2) , 142 8( C
6) , 109 5( C
5) ,
13 5( 5
CH 3 )。以上数据与文献报道胸腺嘧啶波谱
数据[ 8] 一致,推定该化合物为胸腺嘧啶。
化合物 8: 白色结晶性粉末( 50 mg) , mp 164~
166
, 分子式为C9H 12N 2O6 ; EI
MS m/ z : 112(苷
元) , 73, 69, 57。1H
NMR( 600 MHz, DM SO
d6 )
:
5 67 ( 1H , d, J= 7 8 Hz, H
5) , 7 98 ( 1H , d, J =
7 8 Hz, H
6) , 11 34( 1H , s, NH ) , 5 81( 1H , d, J =
5 43 Hz, H
1() , 4 07( 1H , m, H
2() , 3 96( 1H , m,
H
3() , 3 91( 1H , m, H
4() , 3 55( 1H , m, H
5(a ) ,
3 62( 1H, m, H
5(b)。以上数据与文献报道的尿嘧啶
核苷光谱数据[ 9]一致,确定该化合物为尿嘧啶核苷。
化合物 9: 白色粉末( 55 mg ) , mp 240~ 242
,
分子式为C10H 13N 5O5 ; EI
MS m/ z : 283[ M ] + , 207,
185, 152;
13
C
NMR( 150 MHz, D 2O)
: 153 6( C
2) ,
151 2( C
4) , 116 6( C
5) , 156 6( C
6) , 135 5( C
8) ,
86 3( C
1() , 70 3( C
2() , 73 6( C
3() , 85 1( C
4() ,
61 3( C
5()。以上数据与文献报道鸟嘌呤核苷波谱
数据[ 9]一致,推定该化合物为鸟嘌呤核苷。
化合物 10: 白色晶体 ( 28 mg ) , mp 104~
107
;分子式为C9H 16O 4 ; EI
MS m/ z : 171( M -
OH) , 152( M - 2H 2O, 100%) ; 1H
NMR( 600 MHz,
CD3OD)
: 2 18( 2 ) 2H , t , J= 7 2 Hz, 2, 6
CH 2 ) ,
1 51( 2 ) 2H , t, J= 7 2 H z, 3, 5
CH 2 ) , 1 25 ( 2 )
3H , br s, 2 ) CH 3 ) ; 13 C
NMR( 150 MHz, CD 3OD)

: 26 0( C
8, 9, 4) , 30 0 ( C
3, 5) , 34 9 ( C
2, 6) ,
177 7( C
1, 7)。T LC 检测结果, Rf 值与 4, 4
二甲
基
1, 7
庚二酸相同, 故推断该化合物为 4, 4
二甲
基
1, 7
庚二酸。
化合物 11:白色粉末( 30 mg ) , mp 69~ 71
;
氢谱和碳谱数据与文献报道 
棕榈精波谱数据[ 10]
一致,推测该化合物为 
棕榈精。
4  结语
从金线莲的内生真菌 Ep ulorhiz a sp 中分离
得到 11个单体化合物,所有化合物皆为首次从该属
真菌中分得。其中 3
羧基吲哚具有明确的抗 HIV
病毒的活性[ 11] ;吡咯骈( 1, 2a)
3, 6
二酮六氢吡嗪具
有抗心律失常的作用 [ 4] ,还有多种核苷及其的类似
物,其活性有待进一步研究。
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