全 文 :2016
y
5
z À
41
ÁÀ
9
}
Vol41,No.9 May,2016
[
gh)(
] 20151112
[
ijkR
]
Ö£g*bkle
(2013C02011)
[
le?m
]
opq
,
×t
,
uvåwh
ØÙmn
,Email:shang2002012@163com
[
?mno
]
ef
,
pqmnr
,
åwh
ØÙ¨|©ª¸±
,Email:aurora0119@163com
ÊËÌÍ8©XÎÏÐÑÒÓÔ©Õ
ÖP׫¡ØÙ
ef
1,2,3,
Pgh
2,
iSj
2,
klj
3,
)m
3,
+n
4,
opq
2
(1.
Öüh*t ht
,
Ö Ú¼
310053;
2.
Ö¦*t «_¦:ÛÎÜ3ݸ¹kºü
,
Ö Þ}
311300;
3.
ßà*t ht
,
qx
200433;4.
át rât
,
Ö á
323000)
[
pq
]
ÓAÄ9¸º<
7
·©©ÊËÌÍ8©XÎÏÐÑ©ÕP׫¡ØÙ
,
ÚýºâãÎÖb
ãÎÊËÌÍÒÓÔôÃÈÉÖ4!Þ
,
w¯7¡
DûÖæRûº`ÒÓÔåuZcáÖRÖ¨á
,
çå
©
HPLC
¡¢åZc$RcÒ«
,HPLC
¡¢åÎ!«¡
。
¡
,
ðò
7
CÎ?eNÊËÌÍÒÓÔåÁNë
,
qØÙåc§Î!«¡Ò«áEl
,
DO34
+ÆÒÓÔ©ÕÖ2Zcá
,
DO12
+Æ
cáEl
,DO18,DO19,DO120
?Î!RÖ¨áEl
,
bª©ÕP׫¡Zä%ë¸÷Ö
DO14,DO18,DO19
Ö
DO1204
Cù/Î
,
ÓÊËÌÍ8©XÎ#ÐÑâ7¯fÖg2ðâ
αÜ#Ö¶
。
[
rst
]
ÊËÌÍ
;
8©XÎ
;
©Õm[
;
P׫¡
EfectsofendophyticfungifromDendrobiumofficinaleonhostgrowthand
componentsmetabolismoftissuecultureseedlings
ZHUBo1,2,3,LIUJingjing2,SIJinping2,QINLuping3,HANTing3,ZHAOLi4,WULingshang2
(1.ZhejiangChineseMedicalUniversity,SchoolofPharmacy,Hangzhou310053,China;
2EngineeringandTechnicalResearchCenterofDendrobiumoficinaleofStateForestryAdministration,
ZhejiangAgriculturalandForestryUniversity,Lin′an311300,China;
3TheSecondMilitaryMedicalUniversity,SchoolofPharmacy,Shanghai200433,China;
4LishuiUniversity,SchoolofEcology,Lishui323000,China)
[Abstract] ThepaperaimstostudytheefectsofendophyticfungifromDoficinalecultivatedonlivingtreesongrowthandcompo
nentsmetabolismoftissuecultureseedlingsMorphologicalcharacteristicsandagronomiccharactersoftissuecultureseedlingsinfected
anduninfectedbyendophyticfunguswereobservedandmeasuredPolysaccharidesandalcoholsolubleextractscontentsweredeter
minedbyphenolsulfuricacidmethodandhotdipmethod,respectivelyMonosacchridecompositionofpolysaccharidesandalcoholsol
ubleextractscomponentswereanalyzedbyprecolumnderivativesHPLCandHPLCmethod,respectivelyItshowedthatefectsof
turningtopurpleofstemnodescouldbechangedbyendophyticfungusBesides,theendophyticfunguscouldafectthecontentsand
constitutionsofpolysaccharidesandalcoholsolubleextractsThestrainstested,expectDO34,couldpromotegrowthandpolysaccha
ridescontentoftissuecultureseedlingsThestrainstested,expectDO12,couldpromotetheaccumulationofmannoseFurthermore,
DO18,DO19andDO120couldincreasealcoholsolubleextractsOnthebasis,foursuperiorstrainswereselectedformechanismre
·2061·
ú
ÃÉ
:
ÊËÌÍ8©XÎÏÐÑÒÓÔ©ÕÖP׫¡ØÙ
searchbetweenendophyticfungusandtheirhostsandmicrobiologyengineering
[Keywords] Dendrobiumoficinale;endophyticfungi;growthanddevelopment;componentsmetabolism
doi:10.4268/cjcmm20160906
$,Üa
Ö©ÕMÄ]dâã
,
©ÕM
Äpq©¨!SÖ©¨!S
,
°¨8©XÎ
Ó[C_©¨!SÒuäuYW%8+
ãë
[14],
ÝB¡°¨8©XÎ
ÐÑ©Õ
、
2ÐÑÏ©¨ªoªo,
!
[5],
ÂÖÐÑ}©P×-¨ª«#El
,
Ø
Ù,¯°¨a
[67]。
ÊËÌÍ
DendrobiumoficinaleKimuraetMigo
ûo%W©¼`$,Ü
,
¼B0©;
、
[ðæÉ
Ä8
,¯
êæq;¦
,
׫¬
,
ð¥?
,
ÅF
ɧ
,
²kê
2015
ym
《
$%,>
》[8]。
ãyä
,
Ê
ËÌÍ8©X΢Ï%8+ãë
,
vÑ
_³$¤8©XΡv¹_
、
ÎXÎÏ°¨±¶
ÏmÖ0Ô©Õ¯ÉúD
[917],
WôÃÈ
É
、
4!ÞÖP׫¡ÉúDô©56ÊËÌÍ
8©XÎÖÐÑnâ7ãô5Bk{
。
õò
o¤å}9¸º<8©Xζf
,
568©X
ÎÏÒÓÔ©Õm[ÖP׫¡ØÙ
,¸
÷ù/
Î
,
Ó8©XÎÖÐÑâ7¯f
,
e/Ê
ËÌÍ,Üa
2ðâ[÷D¬
。
1
Ü#
ðòÎäMõÑÒå}W¥¦·©©Ê
ËÌÍ$¡v8©XÎÎ
,
Î/<Ó
DO12,
DO14,DO18,DO19,DO34,DO38,DO120(
1)。
ð
òÊËÌÍÒÓÔÓ
D6
aô
,
w¨*²w%
®²ÈoÊËÌÍg()$S÷[
。
1
ðò8©XÎ
Table1 Strainsofendophyticfungitested
Î ÐÑ¡v1·
(
©©±
)
Χ
(
±
)
¼
DO12
(
e#
、
;
、
cA
、
、
®Y
) Nemaniasp
DO14
(
cA
),
å
(
0¥
、
YA
、
®Y
),
B
(
e#
)
Pestalotiopsissp
DO18
(
ËF
、
;
、
cA
、
0¥
),
å
(
;
、
)、
B
(
ËF
、
e#
、
®Y
)
Talaromycessp
DO19
(
ËF
、
e#
、
;
、
cA
、
0¥
、
),
B
(
;
)
Xylariaceaesp
DO34
(
cA
) Phialocephalascopiformis
DO38
(
e#
、
;
) Tolypocladiumsp
DO120
(
0¥
) Hypoxylonsp
òoÑ_ß´
:MiliQAcademic
¹Jß
(
°
%
Milipore
DE
);SWCJ1C
mÖBRD×g
3
(
fH/Nß´ïXBCDE
);MLS3780
wM
|®Î¯
(
{õL[Ufst(+÷
);
MGC300A
_ÓZ
(
Wð&(BCDE
);
MJP250S
mÛÎÓZ
(
fH±vòoß´BCD
E
);DGG9070
mU橱ÉZ
(
fH±v
òoß´BCDE
);UV2550
ë+
?¡__^s
(
fHÀL¡¢ß´j
);116K
m«ñvSf
(
°%
SigmaAldrich
DE
);D37520
ðñvSf
(
Â
%
Heraeus
DE
);Agilent1260Infinity
8>âí
7ß
(
°%
Agilent
DE
)。
òí
:
|¡
(
23y°&(BCDE
);
A
BcÏa
(
$%Åa,a¶`þ
110833
200503);
c
、
g²c
、
%ùc£
、
ABc
、
%
ùc
、
Ac
、
²fcÏa
(
©<¡^Ó
140651
200602,111683200401,111646200301,110833
200503,02269602,1508200001,1506200203)
w
1§ê$%Åa,a¶`þ
;1
7
3
5
³0´ã
(PMP)
Ó_¹
,
ª
MS
Óº8ò
í
,
Ƨê%,³~_òíBCDE
;
¤òíÆ
Ó¡¢¹
。
2
úû
21
ôÃÈÉý
,X÷ίã±#W/DíµòK$µÖ
,
ãùáB
PDA
Óþ®f
,
½ùÛÎÓZ$
GÓ
(25℃),
¼ÎûÕ>þ®ÿ
,¯ 5mm
]Y
´]«Æî:¶
,
㱬ÊËÌÍÒÓÔ$
,
|ÁÔ
ã
1
Cζ
,
|CÎã±ÒÓÔ
30
Á
。
ã±ÿ
,
©sÒÓÔåéÖÝëíÁ=
(
ÂRåÁNëÓ
ëì
),
stëíåÁµ
=
ëíåÁÁ=
/
uÁ
=
×100%,
¥ãÎÒÓÔÓÏ
。
22
4!Þüý
,ÓW[`ßéÒÓÔ3Ö
,
·:Ó
,
¯¼¸¹º×n4!Þüý
。
¯6õº|
0ÔÔÖÕ
,¯
~ë»õºå1
、
å
$1
、
BÕ
(
B$/Õ
)
ÖB!
,
stBÕ!
=
BÕ
/
B!
,
©s|Ô=
、
B=ÖÏ÷=
,
·3061·
2016
y
5
z À
41
ÁÀ
9
}
Vol41,No.9 May,2016
¯U¶þXã±ÒÓÔå5ÖBu5
,
,å
ÖB½Þ
60℃
ôZô¬©
,
¡^XåÖB
。
|C}º
200
Ô
,
|Ô3Ä.
3
Bn
üý
,
BDEÂüè.É
[18]
úûnt
。
23
ÒÓÔP׫¡¡¢
,ô¬©åÖB
aܼ
,
60
å¸
,
¼
¯
。
åuZcáº`w¯7¡
Dû
[19],
ëì
üúúÓ
Y=0012X-002,R2=09995,X
Ó
^
,Y
Ó_^
,3
}f
;
Âü½Ê¾É
[20]
úû
º`åÎ!RÖ¨
,3
}f
;
åÎ!8>â
í7÷ø
:
w¯
XBC18í7ç(46mm×250mm,
05μm),25℃ç,IâÓ¹J(C)¿(D),
w¯À^·Ò
,
¶ºÃÕÓ
280nm,
Ó
10
μL;Rc ©ÂÁûÉ[21]úû。¯ SPSS170
rø}=ò
,
w¯RS
ANOVA
¡¢
,
w¯
LSD
û
。
3
á Ö¡¢
31
8©XÎÏÒÓÔôÃÈÉØÙ
ã±8©XÎÒÓÔ©Õ[éOnÿ
,
åé
+ÖÝåÁNëÝc
,
ÖÝ=
、
OnÖϵ¤
¡VE
(
q
1)。
ã±
DO38
ÒÓÔåÁNë.
Y
,
ã±ÿÀ
4
~BNëÝcÖÝ
;
ã±
DO14,
DO18,DO19
ÒÓÔ
,
åÁ¤À
5
rmNë
,
ã
±fu
4
CÎÒÓÔåÁNëOnÆ
CK
2
å
,
=
CK
@2
;
¥sûã±8©XÎ
,
Z=
ÒÓÔÀ
16~19
åÁNë=.Z
,
Îÿëíï
ÂÃ:
,
vã±
DO38
Ö
DO19
ÒÓÔëíåÁ
µõí©¥N
,
q
1。
q
1
ÒÓÔåÁNëÃèé
Fig1 Dynamicsofturningtopurpleofstemnodesoftissue
cultureseedlings
32
8©XÎÏÒÓÔ4!ÞÖ-ØÙ
ðòÒÓÔã±8©XÎÿ
,
4!Þnµ¤
¸V¹E
(
2,P<001),
$ã±
DO12,DO19
Ô
,
ã±
DO14,DO18,DO19,DO34,DO38,DO120
Ô
,
ã±
DO12,DO18,DO19,DO38,DO120
BDE
ƸV¹ê
CK(
2,P<001);
åu5Öu
.Óã±
DO19
ÒÓÔ
,
¡^Ó
1273,1040
g;
ÊËÌÍ-%ëÓåé
,
ã±
DO34
ÒÓÔ
åu5«ê
CK
Ò+
,
n
6
CÎÒÓÔ-
%ëÆê
CK。
òÑ_4!ÞÖ-%ë
,
ã
±
DO12,DO18,DO19
Ö
DO120
ÒÓÔÝ
,
ÝÖÔ
,
å
,
Bw
,
å¡êF
,
ô©Õ`$
ÉÈç
。
33
8©XÎÏÒÓÔP׫¡ØÙ
331
åuZcÖÎ!RÖ¨áE
ã
±¥¦ÎÒÓÔåuZcÖÎ!RÖ¨á
µ¤¸V¹E
(
3,P<001)。
ã±ðòÎ
ÒÓÔåuZcáƸV¹ê
CK(P<001),
$ã±
DO19
ÒÓÔåuZc
¡=.
(1486%),
û
CK
296
ú
;
ã±
DO18,DO19,
DO34
ÒÓÔåÎ!RÖ¨á¸V¹ê
CK
(P<001),
$
DO19
ÒÓÔåÎ!RÖ¨
¡=.
(1041%),
û
CK
Ò
119
ú
。
332
Zc$RcÒ«E
bãÎ
CK
Ò
ÓÔåZc ©ÿ¶ºÖ
4
±Rc«¡
,
¡^Ó
c
,
ABc
,
%ùcÖ²fc
,
ã±8©XÎÿ
,
ÒÓÔRcÒ«m©N_
(
4,
q
2)。
ã±
DO12,DO18,DO19,DO34
Ö
DO38
ÒÓÔ
4
±R
cÒ¡Ö
CK
â¦+
,
涺ÖAc«¡
;
Íã±
DO14
Ö
DO120
ÒÓÔRcÒ«
CK
F
,
ã±
DO14
ÒÓÔH¶ºÖcÖABc
,
ã±
DO120
ÒÓÔH¶ºÖc
,
ABcÖ²f
c
。
cûÊËÌÍZcÑ_Ò¡
,
DO12
+㱤ÎÒÓÔcµDEÆê
CK,
$ã±
DO19
ÒÓÔµDE.
,
û
CK
261
ú
。
333
åÎ!«¡E
ã±8©XÎÊË
ÌÍÒÓÔåÎ!«¡m©N_
,HPLC
EÈ
ɵ
(
5)
?¾
,
ãÎÿÒÓÔ$ÊB
21
C
HPLC
EÈɵÆ
CK
Z
,
$ã±
DO19
Ò
ÓÔÈɵ.Z
,
14
C
,
}Óã±
DO18,
DO120,DO14
ÒÓÔ
,
¡^Ó
11,11,9
C
。
¤
郵$
,3,13,15,18,19,20
<µÝÓµDE
w
,
¡v^îÓR[Èɵ
,
?[:ç¡¢
(
q
3)。
·4061·
ú
ÃÉ
:
ÊËÌÍ8©XÎÏÐÑÒÓÔ©ÕÖP׫¡ØÙ
3
8©XÎÏÒÓÔåuZcáÖåÎ!RÖ¨
áØÙ
(珋x±s,n=3)
Table3 Efectsofendophyticfungioncontentofpolysaccha
ridesandalcoholsolubleextractsfromtissuecultureseedlings
(珋x±s,n=3) %
Î åuZc åÎ!RÖ¨
DO12 729±008E 839±011C
DO14 1076±012C 870±012C
DO18 857±010D 915±014B
DO19 1486±015A 932±009B
DO34 868±011D 1041±010A
DO38 1326±009B 666±005D
DO120 1292±009B 850±007C
CK 502±008F 877±006C
4
ã±¥¦ÎÒÓÔåRc®ÏµDE
Table4 Absolutepeakareasofmonosaccharidefromtissue
cultureseedlingsinoculateddiferentendophyticfungi
Î c ABc %ùc Ac ²fc
DO12 1171 792 401 451 1907
DO14 2136 471 - - -
DO18 3091 2375 849 623 1854
DO19 3916 9442 2456 9465 17382
DO34 2130 3645 599 1147 610
DO38 3574 3470 953 2381 656
DO120 3485 927 - - 1344
CK 1502 1071 567 - 952
ë
:-
b¶ºÖÚ«¡
(
5
¦
)。
1
c
;2
g²c
;3
%ùc£
;4
ABc
;5
%ùc
;6
A
c
;7
²fc
。
q
2
RcÏa ©¨
(A)
ÖðòÒÓÔåRc ©¨
(B)HPLC
q
Fig2 HPLCchromatogramofmonosaccharidereferencesub
stancederivatives(A)andmonosaccharidederivativesoftissue
cultureseedlingstested(B)
·5061·
2016
y
5
z À
41
ÁÀ
9
}
Vol41,No.9 May,2016
5
ðòÊËÌÍÒÓÔåÎ!«¡ÈɵµDE
Table5 Characteristicpeakareasofalcoholsolubleextractsfromstemoftissuecultureseedlingstested
Î
郵
=
/
C
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
DO12 4 - 502 - - - 169 - 297301 - - - - - - - - - - - -
DO14 9 123262348 - - - - 492 - 282210 - 343 - - - 459 - - 28756267 -
DO18 11 - 10571415 - - 193258742572 - 294 90 - - - - - - 6961244297
DO19 14 1057 1226 - 271132345883412167721239898 - 1365 - - - 270 - - 430311
DO34 3 - 891 - - - - - 790366 - - - - - - - - - - - -
DO38 5 136 - - - - 193269 - 385 - - - - - 210 - - - - - -
DO120 11 - - - - - 477 - 94312031173249 - 4222291346811 - 1965421 - -
CK 1 - - - - - - - - - - 208 - - - - - - - - - -
q
3
ðòÒÓÔåÎ!
HPLC
q
Fig3 HPLCchromatogram ofalcoholsolubleextractsfrom
stemoftissuecultureseedlingstested
4
ásÖs
ðò
7
CX÷ÎÏÊËÌÍÒÓÔôÃÈ
É
、
4!Þ
、
-%ëÑ_P׫¡ÉúDÆB
¥¦^ØÙ
,
DO12
Î+n
6
CÎÆ
âÒÓÔåÁNë
,
Kã±Ú
6
CÎÒ
ÓÔåuZcáƸV¹ê
CK(P<001),
?
åéAíÖuZcᵤâã!
,
åéëòí
u¡V
,
Zcáu
[2223]。
bªã±8©XÎÿ
ÒÓÔ4!Þ
,
åuZc
,
RÖ¨ÖcµD
E
,
åÎ!«¡ÈɵÉ%ë
,¸
÷Ö
DO14,
DO18,DO19
Ö
DO1204
ù/Î
,
Æ¡V
ÒÓÔ©Õm[
,
å5¡^2
56%,44%,
649%,14%,
å$uZcá2
1137%,
707%,1960%,1574%,
c á 2
422%,1058%,1607%,1320%,
$ ã ±
DO18,DO19
Îæ?¡^2å$RÖ¨á
43%,63%。
Óâ[:AÄ8©XÎÏÒÓÔP׫¡
ØÙª«
,
WåÁAíN_¡¢P׫¡ÃNE
ª«
,
%÷ø®lOnçnlmÒ¡¢
,
WÍÄ
½ÊËÌÍP׫¡N_¡¶f
。
ååÊËÌ
ÍJÎ!ÖÎ!«¡]`âãk{F
,
,8«
¡¥°¡,
õòo9:~yâã±8©XÎÿÒ
ÓÔåÎ!«¡N_
,
¶ºÖ
6
C
HPLC
ÈÉ
Eµ
,
?ù0÷ø¡Å
7()[:¡¢
,
@
âÏ¡¶
9:]`?«¡
,
ÓÄ¡8©XÎ
ØÙÊËÌÍÎ!«¡N_f2ð¶
。
[
uv=w
]
[1] PetriniO,FisherP.Occurenceoffungalendophytesintwigsof
SalixfragilisandQuercusrobur[J].MycolRes,1990,94(8):
1077.
[2]
¬Â_
.
$,a
:
}s
、
úûÖnm
[M].
fH
:
fH
&()Öm÷
,2008:35.
[3]
ÆF4
.
©,
[M].
fH
:
BÇ©Öm÷
,2007:93.
[4] PetriniO.Fungalendophytesoftreeleaves.Microbialecologyof
leaves[M].NewYork:SpringerVerlag,1991:197.
[5] PorasAlfaroA,BaymanP.Hiddenfungi,emergentproperties:
endophytesandmicrobiomes[J].AnnuRevPhytopathol,2011,
49:291.
[6] MucciareliM,CamussoW,MafeiM.Volatileterpenoidsofen
dophytefreeandinfectedpeppermint(MenthapiperitaL.):
chemicalpartitioningofasymbiosis[J].MicrobEcol,2007,54
(4):685.
[7]
ýöâ
,
ÇW
,
²æ
.
8©XÎÏ!Ñ_4!ÞcP
×ãØ·!ØÙ
[J].
¨k
,2009,35(5):946.
[8]
$%,>
.
[1
[S].2015.
[9]
ßjF
,
}t~
,
ºæ
,
É
.
Xζ}ÊËÌÍ^
&å
HPLCMS
%±q7¡¢
[J].
$%,-.
,2008,43
(24):1859.
[10]
,
,
Èja
,
!?7
.
ÊËÌÍ8©XΡ$
[J].
î©
¨@k
,2010,37(1):37.
·6061·
ú
ÃÉ
:
ÊËÌÍ8©XÎÏÐÑÒÓÔ©ÕÖP׫¡ØÙ
[11]
àk[
,
&Éa
,
°L
.
ÊËÌÍ©8©Xθ÷Ö]
`
[J].
K9²Èwk
,2011,31(5):47.
[12]
îî
,
!?7
.
8©XÎÎûPרÏÊËÌ͸ú
¤©ÕØÙ
[J].
$%A&þk
,2001,23(6):556.
[13]
¸é
,
Ê.
,
ß<
,
É
.
ÎXÎÏÊËÌÍ©Õ#
~
SØÙ
[J].
y²þk
,2007,27(1):80.
[14]
¸é
,
%Ë
,
߸Å
,
É
.
ÊËÌÍÒÓÔÖÎXÎÊÓ
$â7¯
[J].
°¨©Ãk
,2009,33(3):433.
[15]
!?7
,
^¦
,
îî
.
ÊËÌ͸ÌÌÍÎXΡ
v©¨·!º`
[J].
$%$,-.
,2000,25(6):338.
[16]
ÈÍG
,
!?7
.
XÎÏÊËÌÍ^&å·!#+
pH
ØÙ
[J].
@k
,2004,31(2):26.
[17]
ë·
.
8©XÎ
MF24
ÏÊËÌÍ^&å¯ÌÍ
_«¡#·!
[D].
23
:
$%*#A&w
,
$%A
&þ
,2005.
[18]
è.
,
úÃ
,
θþ
,
É
.
ÊËÌÍ
F1PÔ}4!Þ
[J].
$%$,-.
,2013,38(4):498.
[19]
g
,
θþ
,
!²
,
É
.
Bg)ÓÊËÌÍZcáNE
ª«
[J].
$%$,-.
,2010,35(4):427.
[20]
½Ê¾
,
!ÁÁ
,
θþ
,
É
.
ÊËÌÍZc#Î!RÖ¨
ÃlEª«
[J].
$%$,-.
,2014,39(24):4769.
[21]
Áû
,
öì
,
θþ
,
É
.
çå ©
HPLC
¡¢ÊËÌÍZ
c$RcÒ«NEª«
[J].
$%$,-.
,2011,36
(18):2465.
[22]
Ïé
,
ßç
,
tÆ
,
É
.
¥¦-FÊËÌÍôÃB81·
«¡á
[J].
ʧ$A,wk
,2013,30(4):558.
[23]
!ê
,
(É
,
øÐÑ
,
É
.
ÊËÌÍNEóE!¡¢
[J].
K9Èk
,2015,28(3):1236.
[
xy-0
|}~
]
·7061·