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HPLC法测定伤痛宁胶囊中延胡索乙素
闫小青1 , 董林毅2*
( 11 天津市天津医院, 天津 300180; 21 天津大学, 天津 300072)
摘 要: 目的 建立用高效液相色谱法测定伤痛宁胶囊中延胡索乙素的方法。方法 采用高效液相色谱法。Kro-
masil C18色谱柱( 250 mm @ 41 6 mm, 5Lm) ;以甲醇-水-三乙胺 ( 65B 35B 01 5)为流动相;检测波长为 280 nm;体积
流量为 01 80 mL/ min;柱温为室温; 进样量为 20LL。结果 延胡索乙素在 01 250~ 81 00 Lg/ mL 线性良好,平均回
收率为 1001 24% , RSD为 21 43%。结论 本方法操作简便,准确, 灵敏,为伤痛宁胶囊的质量控制建立了方法。
关键词:伤痛宁胶囊; 延胡索乙素;高效液相色谱
中图分类号: R2861 02 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2010) 07-1109-02
伤痛宁胶囊由延胡索(醋制)、白芷、乳香(制)、
没药(制)、山柰、细辛、香附(制)、甘松 8味中药精制
而成,主要用于各种急慢性软组织损伤所致的疼痛、
肿胀、功能障碍; 因闪腰挫气或陈伤所致的局部疼
痛、关节痛、腰腿痛、肩背痛等;对骨折患者可促进骨
痂生长,缩短骨折愈合时间;对因气滞血瘀所致的胸
痹心痛、脉管炎、乳腺炎、痔疮等有疗效。为了完善
其质量控制方法,笔者选取了延胡索作为质量控制
对象之一进行研究。有关延胡索乙素的测定方法主
要有高效液相色谱法、紫外分光光度法、薄层扫描
法、高效毛细管电泳法 [ 1~ 5] 。本实验采用高效液相
色谱法测定伤痛宁胶囊中延胡索乙素, 方法学考察
结果表明, 该方法简便、准确、重现性好。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(美国科美特科学仪器公司, 包
括 LDI ) 6000色谱输液泵, PVW I ) 6000紫外检测
器, ANSTAR色谱工作站) ; PB153 I ) S 型电子分
析天平 (梅特勒-托利多公司) ; Milipore I ) Q 超纯
水装置(美国密理博公司) , M SE 台式高速离心机
(三洋电器公司) , HU I ) 10260B超声波清洗器(天
津市恒奥科技发展有限公司) , YKH I ) 1型液体快
速混合器(江西医疗器械厂)。
延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所
提供,批号 0726-9605) ; 伤痛宁胶囊(长沙市恒石医
药科技有限公司, 批号分别为 091022、090908、
090810) ;延胡索(醋制)、白芷、乳香(制)、没药(制)、
山柰、细辛、香附(制)、甘松药材由天津市天津医院
提供;甲醇为色谱纯(天津市协和吴鹏色谱科技有限
公司提供,批号 090812) ; 三乙胺为分析纯, 其他试
剂均为分析纯,实验室用水为超纯水。
2 方法与结果
21 1 色谱条件: Kromasil C18色谱柱 ( 250 mm @ 41 6
mm, 5 Lm) ;以甲醇-水-三乙胺( 65 B35B 01 5)为流动
相;检测波长 280 nm; 体积流量 0180 mL/ min;柱温室
温;进样量 20 LL。理论塔板数不低于 5 000。在上述
条件下伤痛宁胶囊中延胡索乙素与其他组分达到基线
分离,与相邻的杂质峰分离度大于 215。
21 2 对照品溶液的制备:精密称取延胡索乙素对照
品 2 mg ,置 25 mL 量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻
度,振荡,摇匀, 即得对照品储备液(质量浓度为 80
Lg/ mL) ,冰箱保存,临用时用甲醇稀释。
21 3 供试品溶液的制备: 取伤痛宁胶囊 10粒分别
精密称定质量后, 将胶囊中药物取出混匀, 精密称取
相当 4粒胶囊所含药物,置于 100 mL 量瓶中,加适
#1109#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
* 收稿日期: 2009- 12-23 作者简介:闫小青,主管药师,从事专业:药物分析。
* 通讯作者 董林毅 T el: 13682164749 E-m ail: dongw l119@ 1631 com
量甲醇溶剂, 超声提取 30 min, 放置室温用甲醇定
容,摇匀,即得, 冰箱保存。临用时用微孔滤膜滤过,
弃去初滤液,取续滤液 4 mL,加入 3 mL 乙醚, 旋涡
混匀后, 用离心机( 4 000 r/ min)离心后, 去除上层
乙醚液,目的是去除脂溶性杂质。用 NaOH 试液调
pH 值至 10。用乙醚萃取 3 次,每次 3 mL, 合并 3
次萃取液。将乙醚液挥干, 残渣用 1 mL 流动相复
溶,旋涡混匀后, 用高速离心机( 12 000 r/ min)离心
后,取上清液,即得。
21 4 阴性样品溶液的制备:取除去延胡索以外的其
他中药饮片, 在研钵中将其研成粗粉后, 放入烧杯
中,加适量甲醇溶剂,超声提取 30 m in, 然后用微孔
滤膜滤过, 取适量滤液吹干,用流动相复溶, 旋涡混
匀后,用高速离心机( 12 000 r/ min)离心后,取上清
液,即得。
21 5 标准曲线制备:精密量取延胡索乙素对照品储
备液 01 075、01 15、01 30、01 60、11 20、11 80、21 40 mL,
置于 7个 25 mL 量瓶中, 用流动相制成质量浓度分
别为 01 25、01 5、11 0、21 0、41 0、61 0、81 0 Lg / mL 对照
品溶液,摇匀,在选定的色谱条件下分别进样 6次测
定,记录各色谱峰面积。以峰面积的均值为纵坐标,
质量浓度为横坐标绘制标准曲线, 得回归方程 Y =
30 708 X- 1 4591 4, r= 01 999 9。表明延胡索乙素
在 01 25~ 81 00 Lg/ mL 线性关系良好。
21 6 专属性试验: 取延胡索乙素对照品、伤痛宁胶
囊供试品和阴性样品,制备溶液, 进样, 结果在确定
上述色谱条件后,经阴性对照试验,结果阴性对照无
干扰,证明此色谱条件可行。见图 1。
*-延胡索乙素
*-tet rahydr opalmat ine
图 1 对照品(A)、伤痛宁胶囊( B)和阴性对照(C)的
HPLC图谱
Fig. 1 HPLC Chromatograms of reference substance
( A) , Shangtongning Capsula ( B) ,
and negative sample ( C)
21 7 精密度试验: 取 1 Lg/ mL 延胡索乙素对照品
溶液,重复进样 6次,记录峰面积, 计算 RSD, 结果
RSD为 11 82%。
21 8 稳定性试验: 取批号 091022 的伤痛宁胶囊样
品,制备供试品溶液,分别于 1、2、4、6、8、10 h进样测
定,记录延胡索乙素峰面积,计算得 RSD为 21 70%。
21 9 重现性试验: 取批号 091022伤痛宁胶囊样品
6份, 制备供试品液, 进样测定, 计算延胡索乙素的
质量分数,结果其 RSD为 21 70%。
21 10 加样回收率试验:精密量取已测知延胡索乙
素质量浓度的伤痛宁胶囊供试品溶液 4 mL,分别加
入 80%、100%、120%的延胡索乙素对照品, 制备供
试品溶液,进样测定,计算回收率, 结果平均回收率
为 1001 24%, RSD为 21 43%。
21 11 样品测定: 3 批伤痛宁胶囊 (批号分别为
091022、090908、090810) , 每批取样 3份,分别制备
供试品溶液, 进样 20 LL, 测定延胡索乙素的峰面
积,计算其质量分数,结果延胡索乙素的平均质量分
数分别为 01 49、01 51、01 50 Lg / g。
3 讨论
对延胡索乙素的 HPLC 测定的相关文献报道
有多种流动相, 如甲醇-不同 pH 值磷酸盐缓冲溶
液、甲醇-三乙胺、甲醇-水。实验中考察了甲醇-水
( 45 B 55) , 01 01 mo l/ L 磷酸二氢钾水溶液-甲醇
( 30B70)、( 35B45)、( 45B 55)、( 50B 50) , 最终选定
甲醇-水-三乙胺( 65 B 35 B 01 5)。在本流动相条件
下,延胡索能与其他成分得到很好分离,出峰时间在
20 min左右, 峰形也很好。
对延胡索乙素的对照品溶液在 200~ 350 nm
进行扫描, 结果在 2811 9 nm 处有最大吸收峰,故确
定采用 280 nm 作为检测波长。
本品为中药复方制剂, 药物成分复杂, 而且延胡
索含有多种生物碱。为了排除干扰, 并降低提取过
程中的药物损耗, 对药物提取的次数、时间、溶剂以
及溶剂的用量进行了考察。结果采用乙醚对药物进
行萃取,除去一些杂质, 然后在碱性条件下,再用乙
醚提取药物 3次。这种处理方法较用乙醇、甲醇、乙
腈等溶剂提取完全, 延胡索乙素损耗较少, 图谱清
晰,而且阴性试验无干扰。
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#1110# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月