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丹皮炭对大鼠血小板功能和纤溶活性的影响
李 　娴 ,张 　丽 ,丁安伟 3
(南京中医药大学 江苏省方剂研究重点实验室 ,江苏 南京 　210046)
摘 　要 :目的 　研究丹皮炭及其止血活性部位对大鼠血小板功能和纤溶活性的影响。方法 　以 SD 种大鼠为研究
对象 ,观察丹皮炭及其止血活性部位对 4 ,52腺苷二磷酸二钠盐 (ADP) 和胶原诱导的大鼠血小板聚集率、血浆中血
栓素 B2 ( TXB2 ) 和 62酮2前列腺素 F1α (62keto2P GF1α) 水平 ,以及大鼠组织型纤溶酶原激活物 ( t2PA) 及其抑制剂
( PA I21) 活性的影响。结果 　丹皮炭及其止血活性部位均能提高 ADP 和胶原诱导的血小板聚集率 ;提高大鼠血
浆中 TXB2的量而降低 62keto2P GF1α的量 ;对大鼠血浆 t2PA 和 PA I21 活性无明显影响。结论 　丹皮炭及其止血活
性部位可能是通过调节 TXB2 、62keto2P GF1α的量来增强血小板的聚集功能 ,发挥止血、凝血作用 ;而其对纤溶活性
无显著影响。
关键词 :丹皮炭 ; 血小板聚集 ; 血栓素 B2 ( TXB2 ) ; 62酮2前列腺素 F1α (62keto2P GF1α) ; 纤溶活性
中图分类号 :R286131 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2010) 02 0264 03
　　牡丹皮为毛茛科植物牡丹 Paeoni a su f f ruti2
cosa Andr . 的干燥根皮 ,是中医临床常用中药之
一 ,始载于《神农本草经》,列为中品 ,已有两千余年
的药用历史。元代始即将牡丹皮制炭后用于临床 ,
以治疗各种出血性疾病。长期的临床实践证明丹皮
炭具有明显的止血作用 ,可用于吐血、崩漏及其他多
种出血病症 ,疗效确切[1 ] 。然而目前国内外对丹皮
炭止血机制的研究尚不深入。前期实验研究中已筛
选确定出丹皮炭止血的主要活性部位 ,并在此基础
上对其止血机制进行了初步研究[2 ] ,本实验则着重
通过 EL ISA 法测定大鼠血浆中血栓素 B2 ( TXB2 ) 、
62酮2前列腺素 F1α (62keto2P GF1α) 水平以及大鼠组 织型纤溶酶原激活物 ( t2PA) 及其抑制剂 ( PA I21)活性 ,探讨丹皮炭及其止血活性部位对大鼠血小板功能和纤溶活性的影响 ,以期进一步揭示丹皮炭止血作用的机制。1 　材料111 　动物 :SD 大鼠 ,雄性 ,体质量 (180 ±20) g ,购自浙江省实验动物中心 ,许可证号 : SCXK (浙)200320001。112 　药品与试剂 :云南白药为云南白药集团股份有限公司产品 (批号 20080209) ; CMC2Na :中国医药(集团) 上海化学试剂公司 ;4 ,52腺苷二磷酸二钠盐(ADP) :北京世帝科学仪器公司 ;胶原 :Sigma 公司 ;
·462· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
3 收稿日期 :2009208220　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家“十一五”科技攻关项目 (2006BAI09B006202) ; 2008 年江苏省研究生培养创新工程 (CX08B_200Z)
作者简介 :李　娴 (1980 —) ,女 ,博士研究生 ,主要从事中药炮制与复方研究。Tel : 13611517960 　E2mail : lixian0813 @126. com3 通讯作者　丁安伟　Tel : (025) 85811523 　E2mail : awding105 @163. com
EL ISA 试剂盒、TXB2 、62ket2P GF1α、t2PA、PA I21 均
为武汉中美科技有限公司产品。
113 　仪器 :L G—PAB ER 血小板聚集凝血因子分
析仪 (北京世帝科学仪器公司 ) 、680 型酶标仪
(Bio2Rad 公司) 、离心机 (上海安亭科学仪器厂) 。
114 　供试品制备 :云南白药临床用量为 2 g ,实验
动物按临床用量 20 倍给药 ,即 01667 g/ kg。取云
南白药粉末 6167 g 加入 015 % CMC2Na 200 mL 研
磨均匀即得云南白药供试品。
　　牡丹皮药材购自安徽亳州 ,经南京中医药大学
中药鉴定教研室吴启南教授鉴定为毛茛科植物牡丹
Paeoni a su f f ruticosa Andr . 的干燥根皮。
　　丹皮炭 (十灰散) 临床用量为 9 g ,实验动物按
临床用量 20 倍给药 ,即 3 g/ kg。取适量生品牡丹
皮 ,280 ℃炒制 20 min ,制成牡丹皮炭品。适当粉
碎后过 200 目筛。取丹皮炭粉末 30 g ,加入 015 %
CMC2Na 200 mL 研磨均匀即得丹皮炭品供试品。
　　取 30 g 丹皮炭粉末 ,按《中国药典》2005 年版
中鞣质的提取方法进行提取 ,将提取液浓缩到 1 g/
mL 后 ,加入 015 % CMC2Na 200 mL 混匀即得丹皮
炭鞣质供试品。
　　取适量丹皮炭粉末 ,以 70 % 乙醇回流提取 2
次 ,每次 2 h ;回收乙醇 ,用醋酸乙酯少量多次萃取
后 ,回收醋酸乙酯 ;制备成丹皮炭的醋酸乙酯部位浸
膏。取 1158 g 浸膏 (相当于 30 g 丹皮炭粉末) 加
入 015 % CMC2Na 200 mL 混匀即得丹皮炭醋酸乙
酯供试品。
　　取适量生品牡丹皮 ,适当粉碎后过 200 目筛 ,
取生丹皮粉末 3715 g (相当于 30 g 丹皮炭粉末) 加
入 015 % CMC2Na 200 mL 研磨均匀即得丹皮生品
供试品。
2 　方法
211 　血小板聚集功能的测定 :取大鼠 60 只 ,雄性 ,
体质量 (180 ±20) g ,随机分为 6 组 ,每组 10 只 ,分
别为对照组 (015 % CMC2Na) 、云南白药组、丹皮生
品组、丹皮炭品组、丹皮炭鞣质组、丹皮炭醋酸乙酯
浸膏组。将各供试品分别按 2 mL/ 100 g 每天 ig 给
药 1 次 ,连续 5 d。于第 5 天给药后 1 h ,大鼠颈动
脉插管取血 514 mL ,加入盛有枸橼酸钠 (318 %)
溶液 016 mL 的离心管内抗凝。以 800 r/ min 离心
10 min ,取上层液即为富血小板血浆 ( PRP) ;余下
部分再以 3 000 r/ min 离心 10 min ,取上清液即为
贫血小板血浆 ( PPP) [ 3 ] 。按 Born 比浊法[ 4 ] 测定血
小板最大聚集率 ,分别精密吸取各组 PPP 和 PRP
各 300μL 加入测试杯中 , PPP 调透光率到 100 % ,
PRP 在 37 ℃预温槽中预热 3 min 后加入诱导剂
ADP 10μL (终浓度为 5μmol/ L) 、胶原 15μL (终质
量浓度为 50μg/ mL) 检测 5 min ,记录最大聚集率。
212 　TXB2和 62keto2P GF1α的测定 :取大鼠 60 只 ,
分组及给药方法同 211 项。于末次给药 1 h 后 ,颈
动脉插管取血 514 mL ,加入盛有肝素 (1 %) 溶液
016 mL 的离心管内抗凝。以 1 000 r/ min 离心 15
min ,分离血浆 ,严格按试剂盒说明书步骤操作 ,用
EL ISA 法测定 TXB2和 62keto2P GF1α水平。
213 　t2PA 和 PA I21 活性的测定 :将 212 项中血浆
按试剂盒说明书步骤操作 ,用 EL ISA 法测定 t2PA
和 PA I21 的活性。
214 　统计学处理方法 :采用 SPSS 1310 统计软件
对数据进行方差分析 ,实验数据以 x ±s 表示。
3 　结果
311 　各组大鼠血小板聚集率 :与对照组比较 ,丹皮
炭品组、丹皮炭鞣质组均明显提高 ADP 和胶原诱
导的血小板聚集率 ( P < 0105、0101) ;丹皮炭醋酸乙
酯浸膏对两者诱导的血小板聚集均无明显促进作
用 ;而丹皮生品组与对照组比较 ,能明显抑制 ADP 和
胶原诱导的血小板聚集率 ( P < 0101) ,结果见表 1。
表 1 　各丹皮炭供试品对大鼠血小板聚集的影响
( x ±s , n = 10)
Table 1 　Effects of tested samples of carbonized
Cortex Moutan on platelet aggregation
of rats ( x ±s , n = 10)
组 　别
剂量/
(g ·kg - 1 )
血小板最大聚集率/ %
ADP 胶原
对照 - 461 31 ±81 82 451 97 ±5109
云南白药 01 667 591 14 ±51 13 3 3 531 54 ±7117 3
丹皮生品 3100 221 82 ±71 33 3 3 271 43 ±8185 3 3
丹皮炭品 3100 531 31 ±41 97 3 511 06 ±4134 3
丹皮炭鞣质 3100 581 38 ±41 99 3 3 521 72 ±4141 3 3
丹皮炭醋酸乙酯浸膏 3100 511 39 ±31 64 501 42 ±5118
　　与对照组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs cont rol group
312 　各组大鼠血浆中 TXB2 和 62keto2P GF1α的水
平 :丹皮炭品组、丹皮炭鞣质组和丹皮炭醋酸乙酯浸
膏组均能明显提高大鼠血浆中 TXB2 的量 ,与对照
组比较有统计学差异 ( P < 0105) 。丹皮炭品组、丹
皮炭鞣质组和丹皮炭醋酸乙酯浸膏组均降低大鼠血
浆中 62keto2P GF1α的量 ,与对照组比较有统计学差
异 ( P < 0105) 。结果见表 2。
313 　各组大鼠血浆中 t2PA 和 PA I21 活性 :丹皮炭
及其止血活性部位、丹皮生品均对 t2PA 及 PA I21
·562·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
活性无影响。结果见表 2。
表 2 　各丹皮炭供试品对大鼠血浆中 TXB2 、62keto2PGF1α
水平及 t2PA、PAI21 活性的影响 ( x ±s , n = 10)
Table 2 　Effects of tested samples of carbonized Cortex
Moutan on levels of TXB2 and 62keto2PGF1α ,
and activities of t2PA and PAI21 in plasma
of rats ( x ±s , n = 10)
组别
剂量/
(g·kg - 1 )
TXB2 /
(pg·mL - 1 )
62keto2PGF1α/
(pg·mL - 1 )
t2PA/
( IU ·mL - 1 )
PAI21/
( IU ·mL - 1 )
对照 - 26189 ±14130 12108 ±5119 0135 ±0107 0104 ±0103
云南白药 01667 45177 ±14159 3 5161 ±2190 3 0124 ±0110 3 0116 ±0112 3
丹皮生品 3100 37150 ±13130 3 3 8131 ±4174 3 3 0137 ±0102 0104 ±0104
丹皮炭品 3100 49117 ±15170 3 6146 ±3130 3 0130 ±0109 0110 ±0108
丹皮炭鞣质 3100 58123 ±17181 3 3 5169 ±3114 3 0135 ±0108 0103 ±0102
丹皮炭醋酸乙酯浸膏 3100 58167 ±24174 3 6132 ±1149 3 0137 ±0109 0101 ±0101
　　与对照组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs cont rol group
4 　讨论
　　目前国内外对牡丹皮药理作用的研究多集中于
生品 ,对牡丹皮的炮制作用及丹皮炭止血机制还没
有深入的研究。为探讨丹皮炭止血作用的机制 ,首
先对丹皮炭止血作用主要活性部位进行药效学筛选
研究 ,通过实验筛选确定其止血作用主要活性部位
为丹皮炭鞣质部位以及醋酸乙酯部位 ;并初步探讨
了其止血作用的部分机制[2 ] 。本实验则着重探讨了
丹皮炭及其止血活性部位对大鼠血小板聚集性及
TXB2 、62keto2P GF1α的量以及对 t2PA 及其抑制剂
PA I21 活性的影响 ,以期从血小板功能和纤溶活性
方面阐述丹皮炭止血作用的机制。
通常正常止血与凝血过程包括血管壁、血小板
和凝血因子等多方面的作用 ,其中血小板的吸附、聚
集作用在止血初期具有重要意义[ 5 ] 。血栓素 A2
( TXA2 ) 是目前已发现的最强的缩血管物质与血小
板聚集剂之一[ 6 ] 。前列腺素 I2 ( P GI2 ) 则是较强的
血小板功能的抑制剂 ,具有抑制血小板的黏附、聚集
和释放反应 ,抑制血小板的促凝活性等作用[7 ] 。
P GI2和 TXA2之间的动态平衡是维持正常止血功能
的基础 ,血小板与血管壁接触时被激活 ,合成和释放
TXA2并促进血小板聚集 ,而血管壁利用自身或外源
性的花生四烯酸合成 PGI2 。由于 TXA2和 PGI2的半
衰期很短 ,一般将 TXA2 和 PGI2 稳定的代谢产物
TXB2和 62keto2PGF1α作为判断其浓度的指标[8 ] 。
在纤溶系统中 ,产生于血管内皮细胞 t2PA 及
其抑制剂 PA I21 发挥重要作用[9 ] 。t2PA 能选择性
地激活纤溶酶原形成纤溶酶 ,继而催化纤维蛋白水
解。PA I21 是 t2PA 活性主要的生理性抑制剂 ,
PA I21 能快速与 t2PA 结合 ,形成 1 ∶1 复合物而使
t2PA 失活。t2PA 与 PA I21 在纤溶系统激活过程中
起着相互拮抗的作用[10 ] 。
本实验研究表明 ,丹皮炭及其鞣质部位均能明
显提高 ADP 和胶原诱导的大鼠血小板聚集率 ,通
过对 TXB2 和 62keto2P GF1α量的检测证实 ,丹皮炭
及其鞣质部位均能明显提高大鼠 TXB2 的量 ,同时
下调 62keto2P GF1α的量。在对 t2PA 及 PA I21 活性
的测定中发现 ,丹皮炭及其止血活性部位对大鼠2
PA 及 PA I21 活性无影响 ,提示丹皮炭的止血作用
机制与纤溶活性无关。因此推测丹皮炭可能是通过
对 TXB2和 62keto2P GF1α量的影响来实现对血小板
活化作用的调节 ,血小板活化后增强血小板的聚集
功能 ,起到止血作用。在本实验中还发现 ,丹皮生品
能抑制 ADP 和胶原诱导的大鼠血小板聚集率 ,表
现出对血小板功能的抑制作用即抗凝血作用。故推
测丹皮炭发挥止血作用是否与其生品炒炭后活血物
质降低或凝血物质增加有关 ,值得进一步探讨。
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