全 文 ：正交设计优选吴茱萸汁的制备工艺
韩旭阳１，２，边宝林１，李娆娆１，张志杰１，麻印莲１，原思通１
（１中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００；２江西中医学院，江西 南昌 ３３０００６）
［摘要］ 目的：研究吴茱萸汁的制备工艺，为该辅料的规模化生产提供实验数据。方法：采用Ｌ９（３
４）正交表设计试验，以
吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯为指标，用高效液相色谱法测定这３种成分的含量，以加权系数法分析实验结果确定吴茱
萸汁的制备工艺。结果：确定吴茱萸汁的制备工艺为煎煮３次，首次煎煮加水量为１２倍，浸泡３０ｍｉｎ后煎煮４５ｍｉｎ，第２次煎
煮加水量８倍，煎煮２０ｍｉｎ，第３次煎煮加水量６倍，煎煮２０ｍｉｎ。经６个产地１０批样品中试验证，辅料质量稳定。结论：该工
艺方法简便，能够为该辅料的规范化及工业化生产提供实验数据。
［关键词］ 吴茱萸汁；正交设计；制备工艺
［收稿日期］ ２００９０６０２
［基金项目］ 中国中医科学院自选课题（ＺＺ２００６０９６）
［通信作者］ 李娆娆，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１２９７５，Ｅｍａｉｌ：ｌｅｅｒａｏｒａｏ
＠１６３ｃｏｍ
［作者简介］ 韩旭阳，硕士研究生，Ｅｍａｉｌ：ｒｕｂｙｈｘｙ＠１６３ｃｏｍ
吴茱萸汁又称吴萸汁，为常用的中药炮制辅
料。吴茱萸味辛、苦、性热，有小毒，具有温中下
气，散寒止痛，降逆止呕，温中止泻的功效；与性
味苦寒的药物共制，可缓和药性，如吴茱萸汁制
黄连，可抑制黄连的苦寒之性，使黄连寒而不滞，
善清气分湿热，散肝胆郁火，舒肝和胃而止呕［１］。
该辅料的应用可追溯到明代，李梃在《医学入门》
中记载“吴茱萸水炒黄连调胃厚肠，治冷热不
调”；李时珍在《本草纲目》中记载“黄连，……治
气分湿热之火，则以茱萸汤浸炒”［２］。目前 ２００５
年版《中国药典》、全国炮制规范及各地炮制规范
中吴茱萸汁的制备工艺均不一致［３４］，该辅料的
制备工艺目前仅凭经验掌握，尚未见到相关文献
报道。本研究采用正交设计对吴茱萸汁的制备
工艺进行研究，以吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱
萸内酯为指标，采用加权系数法分析实验结果，
确定了吴茱萸汁的制备工艺并进行１０批次的中
试验证，以期对吴茱萸汁的生产应用提供实验数
据。
１ 材料
Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪（６００Ｐｕｍｐ，Ｗａｔｅｒｓ６００
Ｃｏｎｔｒｏｌｅｒ，Ｗａｔｅｒｓ２４８７Ｄｅｔｅｃｔｏｒ），Ｍｉｌｅｎｎｉｕｍ３２色谱
管理软件（美国Ｗａｔｅｒｓ公司）。
吴茱萸碱对照品（中国药品生物制品鉴定所，
批号 １１０８０２２００５０５）；吴茱萸内酯、吴茱萸次碱均
购于上海顺勃生物工程有限公司，经 ＨＰＬＣ面积归
一化法测定纯度均在９８％以上，符合对照品要求。
甲醇、乙腈为色谱纯，水为自制高纯水。其余试剂均
为分析纯。
吴茱萸购自河北安国，经中国中医科学院中药
所冯学锋研究员鉴定为芸香科植物石虎 Ｅｖｏｄｉａｒｕ
ｔａｅｃａｒｐａ（Ｊｕｓｓ）ｂｅｎｔｈｖａｒｏｆｉｃｉｎａｌｉｓ（ｄｏｄｅ）Ｈｕａｎｇ
的干燥近成熟果实。
２ 方法与结果
２１ 正交试验设计
经文献查阅，确定浸药时间、煎煮次数、煎煮时
间、首次煎药加水量是影响吴茱萸汁有效成分煎出
量的主要因素，因此选定这４个因素，分别选出常规
可行的４个水平，按照 Ｌ９（３
４）正交设计表，进行吴
茱萸汁的制备工艺研究。见表１。
表１ 吴茱萸汁正交设计因素和水平
水平
Ａ
浸药时间
／ｈ
Ｂ
煎煮次数
／次
Ｃ
煎煮时间
／ｍｉｎ
Ｄ
首次煎药加水量
／倍
１ ０ １ ３０ ８
２ ０５ ２ ４５ １０
３ １ ３ ６０ １２
注：统一第２次采用煎煮时间２０ｍｉｎ，加水量８倍；第３次采用
煎煮２０ｍｉｎ，加水量６倍。
２２ 色谱条件
ＡｇｉｌｅｎｔＣ１８色谱柱（４６ｍｍ ×２５０ｍｍ，５μｍ）；
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流动相乙腈水四氢呋喃冰醋酸（４０∶６０∶１∶０２），
流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温３０℃；吴茱萸内酯、吴茱
萸碱检测波长 ２２５ｎｍ、吴茱萸次碱检测波长 ３４３
ｎｍ。在此条件下，各对照品和样品的色谱图见图１。
Ａ吴茱萸内酯对照品；Ｂ吴茱萸碱对照品；
Ｃ吴茱萸次碱对照品；Ｄ样品；１吴茱萸内酯；２吴茱萸碱；
３吴茱萸次碱。
图１ 吴茱萸汁ＨＰＬＣ图
２３ 溶液制备
２３１ 对照品溶液 分别取吴茱萸内酯对照品、吴
茱萸碱对照品和吴茱萸次碱对照品适量，加乙腈溶
解，得到３种对照品溶液的浓度依次为０５０，００４，
００２ｇ·Ｌ－１。
２３２ 供试品溶液 取吴茱萸样品９份，每份１０
ｇ，按照正交试验设计表煎煮，滤过，取滤液定容至
２５０ｍＬ。每份药汁各取３０ｍＬ，水浴蒸干，加乙腈
水（６
!
４）４０ｍＬ，称重，回流 １ｈ，冷却至室温，称
重，用乙腈水（６
!
４）补足失重，过０４５μｍ的滤
膜，即得。
２４ 线性关系考察
用乙腈配制吴茱萸内酯对照品溶液浓度为
０５４ｇ·Ｌ－１，吴茱萸碱对照品溶液为０１２ｇ·Ｌ－１，
吴茱萸次碱对照品溶液为００５ｇ·Ｌ－１，将３个对照
品各稀释 ２，４，８，１６，３２，６４倍，分别过滤进样 １５
μＬ。见表２。
２５ 方法学考察
表２ 线性关系
对照品名称 回归方程 ｒ 线性范围／μｇ
吴茱萸内酯 Ｙ＝２９×１０６Ｘ＋５８×１０４ ０９９９９ ０５１～８１３
吴茱萸碱 Ｙ＝２０×１０８Ｘ－２２×１０４ ０９９９８ ００２～１８２
吴茱萸次碱 Ｙ＝１０×１０８Ｘ＋１２×１０４ ０９９９９ ００１～０７４
２５１ 精密度试验 取吴茱萸样品，照２２２项下
的方法制备供试品溶液，连续进样５次，按２２色谱
条件测定各峰面积，结果显示吴茱萸内酯 ＲＳＤ
０９６％，吴茱萸碱 ＲＳＤ０３６％，吴茱萸次碱 ＲＳＤ
０６７％，表明仪器性能良好。
２５２ 重复性试验 取同一样品５份，按照２２２
项下的方法制备供试品溶液，分别进样测定，记录各
成分色谱峰的峰面积，计算吴茱萸内酯 ＲＳＤ
０７７％，吴茱萸碱 ＲＳＤ０７５％，吴茱萸次碱 ＲＳＤ
０８９％，表明样品的制备方法稳定，重复性良好。
２５３ 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在
０，２，４，６，８，１２，２４ｈ进样，测定各成分色谱峰的峰面
积，计算吴茱萸内酯 ＲＳＤ１２％，吴茱萸碱 ＲＳＤ
１０％，吴茱萸次碱 ＲＳＤ１１％，表明样品溶液在２４
ｈ内稳定性较好。
２５４ 回收率试验 采用加样回收法，取２号样品
５份，每份约５ｇ，分别加入吴茱萸内酯对照品３２７６
ｍｇ、吴茱萸碱对照品 １９９ｍｇ、吴茱萸次碱对照品
０６０ｍｇ。按２３２项下制备供试品溶液，分别进样
１５μＬ，测定，加样回收率均在９５％～１０５％，见表３。
２６ 样品测定 精密吸取按２３项下制备的对照
品溶液和供试品溶液各１５μＬ，进样测定，见表４。
２７ 结果
以吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱作为指标
性成分，根据这３种成分在辅料中的含量高低与各
自药理作用的主次，采用加权评分法，对实验数据进
行分析。因吴茱萸中生物碱类成分的活性更为主
要，但是苦味素类的含量很高是生物碱类的几十倍，
因此将生物碱类成分的系数定为０６，苦味素类成
分的系数定为０４。且在生物碱类成分中吴茱萸碱
含量要高于吴茱萸次碱，所以吴茱萸碱、吴茱萸次
碱、吴茱萸内酯 ３个指标的权重系数宜分别取为
０４，０２，０４。为在同一的标准下加权评分，分别将
各指标中含量最高的值定为１，其余为该值与最佳
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表３ 吴茱萸汁３种成分加样回收率
成分 样品中量／ｍｇ 加入量／ｍｇ 测得量值／ｍｇ 回收率／％ 平均值／％ ＲＳＤ／％
吴茱萸内酯 ３２７０ ３２７６ ６５３４ ９９６４ １０１４９ ２２１
３２７０ ３２７６ ６６５６ １０３３４
３２７０ ３２７６ ６６９１ １０４４３
３２７０ ３２７６ ６５６０ １００４１
３２７０ ３２７６ ６５３４ ９９６２
吴茱萸碱 １８７ １９９ ３９４ １０４０７ １０２６５ １５１
１８７ １９９ ３９４ １０３８０
１８７ １９９ ３９０ １０１８２
１８７ １９９ ３９２ １０３２０
１８７ １９９ ３８７ １００３５
吴茱萸次碱 ０６１ ０６０ １１９ ９６８８ １００４７ ２４２
０６１ ０６０ １２２ １０２０３
０６１ ０６０ １２１ ９９７１
０６１ ０６０ １２１ １００３５
０６１ ０６０ １２３ １０３３９
值的比值。最后总分为ｙ＝０４ｙ１＋０４ｙ２＋０２ｙ３。 见表４。
表４ 综合加权评分
Ｎｏ
质量分数／ｍｇ·１０ｇ－１ 综合加权评分法
吴茱萸内酯 吴茱萸碱 吴茱萸次碱 吴茱萸内酯 吴茱萸碱 吴茱萸次碱
总分
重复试验１ １ ３５７０ ２８２ １１５ ０３０ ０２２ ０２４ ０２５
２ ８９４７ １０１３ ３４８ ０７５ ０７８ ０７１ ０７５
３ １０９７７ １２９１ ４８９ ０９２ ０９９ １００ ０９６
４ ５７０５ ５５０ １９４ ０４８ ０４２ ０４０ ０４４
５ ９１３５ ９１３ ２７３ ０７６ ０７０ ０５６ ０７０
６ １１９７７ １２４５ ３７９ １００ ０９６ ０７８ ０９４
７ ３８２０ ３７７ １０６ ０３２ ０２９ ０２２ ０２９
８ ７２２７ ８９８ ３５４ ０６０ ０６９ ０７３ ０６６
９ １１２８９ １３０２ ３７３ ０９４ １００ ０７６ ０９３
重复试验２ １ ３６３６ ２８３ １２０ ０３０ ０２２ ０２４ ０２５
２ ９１３９ １０２９ ３５５ ０７４ ０７９ ０７１ ０７５
３ １１１５８ １３２０ ５０１ ０９１ １０１ １００ ０９７
４ ５６２０ ５５３ １９６ ０４６ ０４２ ０３９ ０４３
５ ９３３９ ９５３ ２８４ ０７６ ０７３ ０５７ ０７１
６ １２３１１ １２９１ ３９１ １００ ０９９ ０７８ ０９５
７ ３９０３ ３９２ １１１ ０３２ ０３０ ０２２ ０２９
８ ７２３１ ９０４ ３５９ ０５９ ０６９ ０７２ ０６５
９ １１２３３ １３１０ ３７６ ０９１ １００ ０７５ ０９１
通过直观分析可以看出，４个因素影响力大小
为Ｂ＞Ｄ＞Ｃ＞Ａ，最佳实验方案为 Ａ２Ｂ３Ｃ２Ｄ３。方
差分析可以看出４个因素的３水平之间的差异有显
著性意义，见表５。２次重复实验之间的差别无显著
意义。排除了实验操作的误差。最后优选出吴茱萸
汁的最佳制备工艺为煎煮 ３次，首次加水量为 １２
倍，浸泡半小时后煎煮４５ｍｉｎ，第２次加８倍水煎煮
２０ｍｉｎ，第３次加６倍水煎煮２０ｍｉｎ。
３ 讨论
３１ 指标成分选择的依据
吴茱萸包括生物碱、苦味素、挥发油这３大类主
要成分及其他成分。经实验研究发现吴茱萸汁的制
备过程中（水煎）挥发油已经基本损失，吴茱萸汁中
仅含少量或者不含挥发油类成分，因此挥发油类成
分在吴茱萸汁中不占主导地位。且经 ＨＰＬＣＭＳ实
验研究确定吴茱萸汁的主要成分为吴茱萸碱、吴茱
萸次碱等生物碱类成分和吴茱萸内酯等苦味素类成
分。从药理作用上来看：吴茱萸碱、吴茱萸次碱与吴
茱萸内酯三者都有镇痛抗炎的药理作用，吴茱萸碱
又能调节体温、吴茱萸次碱保护胃黏膜抗溃疡，这些
０１
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表５ 方差分析
因素 离差平方和 ｆ 均方 Ｆ Ｐ
校正模型 １２１５（ａ） ９ ０１４ ２４３０２３ ０００
截距 ７７８ １ ７７８ １３９９４８９０ ０００
重复试验 ５５６×１０－６ １ ５５６×１０－６ ０１０ ０７６
浸药时间 ００２ ２ ００１ １４５６０ ０００
煎煮次数 １１７ ２ ０５８ １０４９５３０ ０００
煎煮时间 ００２ ２ ００１ １９６３０ ０００
煎煮水量 ００１ ２ ００１ ９８８０ ０００
误差 ０００ ８ ５５６×１０－５
总合 ８９９ １８
校正 １２２ １７
注：ａ．Ｒ２＝１０００（校正Ｒ２＝０９９９）。
药理作用可能在“抑制黄连的苦寒之性，使黄连寒
而不滞，治疗肝胃不合呕吐吞酸”中起着关键的作
用。因此选择吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯
作为指标成分。
３２ 正交试验影响因素的选择
吴茱萸汁的制备工艺各地差异较大，２００５年版
《中国药典》在黄连炮制项下规定“取吴茱萸，加适
量水煎煮，煎液…”；全国中药炮制规范则规定“取
净吴萸，加水适量，煎煮半小时，去渣取汁…”，各地
炮制规范中吴茱萸汁的煎煮时间、加水量等均不相
同，因此本实验将浸药时间、煎煮时间、煎煮次数、首
次煎煮的加水量作为该辅料的４个因素。
３３ 液相色谱条件的选择
３３１ 色谱柱及流动相的选择 比较了ＡｇｉｌｅｎｔＣ１８
色谱柱与 ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８色谱柱对吴茱萸汁３种成分
的分离效果，结果显示前者能使吴茱萸内酯、吴茱萸
碱、吴茱萸次碱达到基线分离，而用 ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８色
谱柱则吴茱萸内酯与其他成分未能达到基线分离，
因此确定使用 ＡｇｉｌｅｎｔＣ１８色谱柱。本实验参照文献
［９］并进行流动相的优化，确定以乙腈水四氢呋
喃冰醋酸（４０
!
６０
!
１
!
０２）为流动相。
３３２ 供试品溶液制备方法的选择 在回流溶剂
的选择上进行了实验研究，比较了乙腈水的比例从
１０
!
０～０
!
１０作为回流溶剂对有效成分的溶出
影响，结果得出当乙腈水（６
!
４）时，有效成分的溶
出率最高。
３３３ 检测波长的确定 吴茱萸内酯的最大吸收
２０３ｎｍ，吴茱萸碱２２５ｎｍ，吴茱萸次碱３４３ｎｍ。当
检测波长２２５ｎｍ时吴茱萸内酯、吴茱萸碱能够基线
分离，而吴茱萸次碱的分离度较差，峰面积也较低，
但在３４３ｎｍ时，吴茱萸次碱能够达到基线分离，并
且吸收最大。而２０３ｎｍ受末端吸收影响太大。因
此选定２２５，３４３ｎｍ２个波长作为检测波长。
４ 小结
本实验采用Ｌ９（３
４）正交设计表，以浸药时间 Ａ
（０，０５，１ｈ）、煎煮次数 Ｂ（１，２，３次）、煎煮时间 Ｃ
（３０，４５，６０ｍｉｎ）、首次煎煮加水量Ｄ（８，１０，１２倍）４
因素３水平进行了吴茱萸汁的制备工艺研究，采用
运用综合加权评分法对实验结果进行分析，得出的
最佳工艺为 Ａ２Ｂ３Ｃ２Ｄ３，即煎煮３次，首次加水量为
１２倍，浸泡半小时后煎煮４５ｍｉｎ，第２次加８倍水
煎煮２０ｍｉｎ，第３次加６倍水煎煮２０ｍｉｎ。经中试
验证，该制备方法简单易操作，适合于大工业生产。
吴茱萸汁作为炮制辅料，是在炮制过程中加入，
其质量的优劣直接影响萸黄连的质量。吴茱萸汁的
制备工艺是确保该辅料质量的主要因素，对其进行
制备工艺研究对于保证饮片质量、确保临床疗效具
有重要意义。本实验仅是萸黄连研究的开端，把好
吴茱萸汁的质量关，为今后揭示萸黄连炮制机制奠
定了实验基础。
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第３４卷第２３期
２００９年１２月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２３
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Ｏｐｔｉｍａｌｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｐｒｅｐａｒｉｎｇｅｖｏｄｉａｅｊｕｉｃｅ
ｂｙｏｒｔｈｏｇｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ＨＡＮＸｕｙａｎｇ１，２，ＢＩＡＮＢａｏｌｉｎ１，ＬＩＲａｏｒａｏ１，ＺＨＡＮＧＺｈｉｊｉｅ１，ＭＡＹｉｎｌｉａｎ１，ＹＵＡＮＳｉｔｏｎｇ１
（１ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
２ＪｉａｎｇｘｉＣｏｌｅｇｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０００６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｂｅｓｔｔｅｃｈｎｉｃｓｆｏｒｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｅｖｏｄｉａｅｊｕｉｃｅＭｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ
ｅｖｏｄｉａｍｉｎｅ，ｒｕｔａｅｃａｒｐｉｎｅａｎｄｅｖｏｄｉｎｗａｓｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｗｉｔｈＨＰＬＣ，ａｎｄｅａｃｈｙｉｅｌｄｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｅｒｅｃｈｏｓｅｎａｓ
ｔｈｅｅｖａｌｕａｔｉｎｇｉｎｄｉｃａｔｏｒＴｈｅｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈｔｈｅｗｅｉｇｈｔｅｄｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅａｄｏｐｔｅｄｔｏａｃｑｕｉｒｅｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｔｈｃｈｎｏｌ
ｏｇｙｆｏｒｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｅｖｏｄｉａｅｊｕｉｃｅＲｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｓｔｕｄｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｂｅｓｔｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｅｖｏｄｉａｅｊｕｉｃｅｗａｓａｓ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｅｖｏｄｉａｅｊｕｉｃｅ；ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔ
［责任编辑 周驰］
２１
第３４卷第２３期
２００９年１２月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９