全 文 ：ＲＰＨＰＬＣ同时测定野菊花中６种黄酮的含量
刘菲１，杨洋２，谭晓杰２，毕开顺２，贾英１
（１．沈阳药科大学 中药学院，辽宁 沈阳 １１００１６；
２．沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 １１００１６）
［摘要］ 目的：建立了同时测定不同产地的野菊花药材中木犀草素７Ｏ葡萄糖苷、芹菜素７Ｏ葡萄糖苷、蒙花苷、木犀
草素、芹菜素和刺槐素含量的方法。方法：采用ＲＰＨＰＬＣ，Ｃ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈００５％磷酸水溶液
梯度洗脱，检测波长３２６ｎｍ。结果：木犀草素７Ｏ葡萄糖苷、芹菜素７Ｏ葡萄糖苷、蒙花苷、木犀草素、芹菜素和刺槐素分别在
１０８～２１５ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９０），０２７８～５５７ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９４），５５８～１１２ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９９），０５２１～１０４ｍｇ·
Ｌ－１（ｒ＝０９９９５），０１６２～３２５ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９９）和０２８８～５７６ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９８）与峰面积呈良好的线性关系，平
均加样回收率（ｎ＝９）均在９６３４％～１０４０％，ＲＳＤ均小于１１％，仪器精密度（ｎ＝６）ＲＳＤ均小于１２％，方法重复性（ｎ＝６）
的ＲＳＤ均小于２６％。结论：该分析方法快速、准确，重现性好，可作为野菊花药材的质量控制方法。
［关键词］ 野菊花；反相高效色谱法；黄酮；含量测定
［收稿日期］ ２００８１２２１
［通信作者］ 贾英，Ｔｅｌ：（０２４）２３９８６２９６，Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｙｉｎｇｓｙｐｈｕ＠ｙａ
ｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
［作者简介］ 刘菲，从事中药质量控制研究。Ｔｅｌ：（０２４）２３９８６２９６，
Ｅｍａｉｌ：ｓｙｒｌｉｕｆｅｉ８２０３２５＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
野菊花（ＦｌｏｓＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉＩｎｄｉｃｉ）为菊科植物
野菊ＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｉｎｄｉｃｕｍＬ．的头状花序，作为常
用中药收载于《中国药典》２００５年版。味苦、辛、性
微寒，清热解毒，疏风平肝。用于疔疮痈肿，风热感
冒，目赤肿痛，头痛眩晕等症。野菊花中主要的化学
成分为黄酮类和挥发油类［１］，其中黄酮类成分具有
显著的抗炎作用，以及对心脏的保护作用和降血压
作用，同时还可减少心肌梗死范围，为野菊花的主要
活性成分［２３］，且目前已报道仅对野菊花药材中的蒙
花苷和木犀草苷７Ｏ葡萄糖苷的含量测定进行了
研究［４５］，鉴于野菊花药材中的黄酮类成分复杂，不只
局限于这两种黄酮苷，而且据报道野菊花药材中还含
有黄酮苷元［６７］，且含量较高，所以本实验采用 ＲＰ
ＨＰＬＣ同时测定野菊花药材的６种不同黄酮苷和苷元
含量，为全面控制野菊花药材的质量提供方法。
１ 仪器与试药
日本岛津 ＬＣ２０１０系列高效液相色谱仪；
ＣＬＡＳＳＶＰ色谱工作站。
木犀草素７Ｏ葡萄糖苷、芹菜素７Ｏ葡萄糖
苷、蒙花苷、木犀草素、芹菜素（均为自制，纯度用
ＨＰＬＣ峰面积归一化法计算均大于９８０％）、刺槐
素（购自美国 ｓｉｇｍａ公司，批号 １９３９７２），乙腈和磷
酸为色谱纯，水为娃哈哈纯净水。从不同产地收集
１３批野菊花药材，均经沈阳药科大学植物教研室孙
启时教授鉴定确认为Ｃ．ｉｎｄｉｃｕｍ。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａＣ１８色谱柱（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相Ａ相为００５％磷酸水
溶液，Ｂ相为乙腈，梯度洗脱，０～２ｍｉｎ，Ｂ１６％ ～
１９％；２～１４ｍｉｎ，Ｂ１９％ ～２１％；１４～３２ｍｉｎ，
Ｂ２１％～３４％；３２～４２ｍｉｎ，Ｂ３４％ ～４２％，４２～５０
ｍｉｎ，Ｂ４２％～８０％。柱温３５℃；检测波长３２６ｎｍ；
流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；进样量１０μＬ。对照品及样品
色谱图见图１。
２．２ 对照品溶液 分别精密称定６种黄酮对照品
适量，别配置成木犀草素７Ｏ葡萄糖苷８９６ｍｇ·
Ｌ－１，芹菜素７Ｏ葡萄糖苷 ６９６ｍｇ·Ｌ－１，蒙花苷
４６５０ｍｇ·Ｌ－１，木犀草素 ８６８ｍｇ·Ｌ－１，芹菜素
８１２ｍｇ·Ｌ－１和刺槐素４８０ｍｇ·Ｌ－１的甲醇储备
液。
２．３ 供试品溶液 取野菊花药材粉末约０４ｇ。精
密称定，置锥形瓶中，精密加入８０％甲醇４０ｍＬ，加
热回流０５ｈ，放冷，滤过，残渣再用８０％甲醇１０ｍＬ
洗涤３次，至１００ｍＬ量瓶中，用８０％甲醇溶解并稀
释至刻度，摇匀，经０４５μｍ微孔滤膜滤过，取续滤
液，即得。
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Ａ．对照品；Ｂ．样品；１．木犀草素７Ｏ葡萄糖苷；２．芹菜素７Ｏ
葡萄糖苷；３．蒙花苷；４．木犀草素；５．芹菜素；６．刺槐素。
图１ ６种黄酮对照品和野菊花样品 ＨＰＬＣ图
２．４ 线性关系的考察 分别精密移取木犀草素７
Ｏ葡萄糖苷，蒙花苷对照品溶液６０ｍＬ，木犀草素，
刺槐素对照品溶液３０ｍＬ，芹菜素７Ｏ葡萄糖苷对
照品溶液２０ｍＬ，芹菜素对照品溶液１０ｍＬ置２５
ｍＬ量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得混合对照品
溶液。分别精密移取上述混和对照品溶液 ０５，
１０，２０，４０，８０，１００ｍＬ置１０ｍＬ量瓶中，加甲
醇定容至刻度，摇匀，分别取１０μＬ进样，在上述色
谱条件下进行分析。以对照品浓度（ｍｇ·Ｌ－１）为
横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归
计算，得６种黄酮的标准曲线回归方程见表１。
２．５ 精密度试验 取６种黄酮混合对照品溶液，在
上述色谱条件下，重复进样６次，计算仪器精密度的
ＲＳＤ，木犀草素７Ｏ葡萄糖苷、芹菜素７Ｏ葡萄糖
苷、蒙花苷、木犀草素、芹菜素和刺槐素分别为
０９％，１２％，１２％，１２％，１２％和０９％。
表１ ６种黄酮的标准曲线方程（ｎ＝６）
化合物 线性方程 ｒ 线性范围／ｍｇ·Ｌ－１
木犀草素７Ｏ葡萄糖苷 Ｙ＝１８７×１０４Ｘ＋８９４×１０３ ０９９９０ １０８～２１５
芹菜素７Ｏ葡萄糖苷 Ｙ＝２８３×１０４Ｘ＋２３６×１０３ ０９９９４ ０２７８～５５７
蒙花苷 Ｙ＝２０１×１０４Ｘ－７８４×１０３ ０９９９９ ５５８～１１２
木犀草素 Ｙ＝３２６×１０４Ｘ－３１０×１０３ ０９９９５ ０５２１～１０４
芹菜素 Ｙ＝４６７×１０４Ｘ－６６１×１０２ ０９９９９ ０１６２～３２５
刺槐素 Ｙ＝４５２×１０４Ｘ－２１８×１０３ ０９９９８ ０２８８～５７６
注：Ｙ．峰面积；Ｘ．对照品质量浓度（ｍｇ·Ｌ－１）。
２．６ 重复性试验 精密量取同一样品６份，依２．３
项下的方法操作，在上述色谱条件下分析测定。木
犀草素７Ｏ葡萄糖苷、芹菜素７Ｏ葡萄糖苷、蒙花
苷、木犀草素、芹菜素和刺槐素的平均质量分数分别
为 ００９％，００４％，１６９％，００６％，００３％ 和
００３％，ＲＳＤ分别为 １１％，１０％，０９％，１４％，
２６％和１０％。
２．７ 回收率试验 精密称取适量野菊花药材９份，
３份为１组，分别精密加入一定量的对照品，按 ２．３
项下的方法操作，在上述色谱条件下进行分析测定，
得木犀草素７Ｏ葡萄糖苷、芹菜素７Ｏ葡萄糖苷、
蒙花苷、木犀草素、芹菜素和刺槐素的平均回收率为
９７２０％，１０３９７％，９７９０％，９７２７％，９６３４％ ，
９７０２％，ＲＳＤ 为 ０９％，１３％，１３％，１０％，
２１％，１１％。
２．８ 样品稳定性试验 取样品溶液，于室温下放
置，分别在０，１，２，４，６，１２，２４ｈ进样，结果表明，６种
黄酮在２４ｈ内稳定，木犀草素７Ｏ葡萄糖苷、芹菜
素７Ｏ葡萄糖苷、蒙花苷、木犀草素、芹菜素和刺槐
素的ＲＳＤ分别为１９％，２８％，１８％，１９％，２０％
和２０％。
２．９ 样品测定 按２．３项下的方法操作，测定１２
批野菊花中６种黄酮的含量，见表２。
３ 讨论
本实验采用了超声提取法考察了水，乙醇，甲醇
的提取效率，结果表明甲醇提取效率最高；由此基础
上考察了４０％，６０％，８０％甲醇水的提取效率，结果
表明８０％甲醇水的提取效率最佳，又以８０％甲醇
水作为提取溶剂比较了回流提取与超声提取２种提
取方法，发现回流提取效率大大高于超声提取。在
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表２ 野菊花中６种黄酮的质量分数（ｎ＝３） ％
产地 木犀草素７Ｏ葡萄糖苷 芹菜素７Ｏ葡萄糖苷 蒙花苷 木犀草素 芹菜素 刺槐素
山东辽城 ０２３ ００５ ０５１ ００６ ００１ －
黑龙江哈尔滨 ０１４ ００３ ０３５ ００４ ００１ －
辽宁 ００６ ００４ １４２ ００４ ００３ ００１
河南 ０１３ ００５ ０８７ ００５ ００２ ００１
四川（１） ００９ ００４ １６８ ００６ ００４ ００３
四川（２） ０１５ ００３ ０２４ ００７ ００２ －
江苏 ０１１ ００５ １４９ ００４ ００２ ００１
河北（１） ００４ ００１ ０６１ ００３ ００１ ００１
河北（２） ００５ ００２ １４５ ００６ ００３ ００２
河北（３） ０１３ ００３ ０４６ ００６ ００１ －
河北（４） ０１８ ００４ ０７４ ００６ ００１ ００１
河北（５） ０３０ ００３ ０３２ ００８ ００１ －
此基础上，考察了回流提取的次数，溶剂用量及提取
时间对实验结果的影响，结果表明 ８０％甲醇水回
流提取１次，１００倍量，提取０５ｈ即可将药材中６
种黄酮提取完全。
上述６种黄酮的最大吸收波长分别为木犀草
素７Ｏ葡萄糖苷 ３４８ｎｍ、芹菜素７Ｏ葡萄糖苷
３３３ｎｍ、蒙花苷 ３２６ｎｍ、木犀草素 ３４６ｎｍ、芹菜
素３３６ｎｍ和刺槐素 ３２７ｎｍ，由于《中国药典》
２００５年版中野菊花的指标性成分是蒙花苷，又考
虑到刺槐素的峰面积较小，为提高对蒙花苷的定
量准确度以及对刺槐素的检测准确度，故选择
３２６ｎｍ作为检测波长。
在测定 １３批野菊花药材的 ６种黄酮成分的
含量时发现，同一产地药材中，６种黄酮的含量差
距较大，且不同产地的同一种黄酮的含量差距也
较大，６种黄酮的最低和最高含量分别为木犀草
素７Ｏ葡萄糖苷 ００４％，０３０％；芹菜素７Ｏ葡
萄 糖 苷 ００１％，００５％； 蒙 花 苷 ０２４％，
１６８％；木 犀 草 素 ００３％，００８％；芹 菜 素
００１％，００４％；刺槐素 ００１％，００９％，其中有
５批药材的刺槐素未能检测到，说明这 ５批药材
的刺槐素含量极低。
野菊花应用广泛，《中国药典》２００５年版中
采用高效液相色谱法测定蒙花苷的含量［８］。本
实验首次建立了高效液相色谱同时测定野菊花
中６种黄酮含量的分析方法，方法简便、快速、准
确，重复性好，可以为野菊花的质量控制提供
依据。
［参考文献］
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ＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｉｘｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎＦｌｏｓＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉＩｎｄｉｃｉ
ｂｙＲＰＨＰＬＣ
ＬＩＵＦｅｉ１，ＹＡＮＧＹａｎｇ２，ＴＡＮＸｉａｏｊｉｅ２，ＢＩＫａｉｓｈｕｎ２，ＪＩＡＹｉｎｇ１
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ；
２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｌｕｔｅｏｌｉｎ７Ｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ，ａｐｉｇｅｎｉｎ７Ｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ，
ｌｉｎａｒｉｎ，ｌｕｔｅｏｌｉｎ，ａｐｉｇｅｎｉｎａｎｄａｃａｃｅｔｉｎｉｎＦｌｏｓＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉＩｎｄｉｃｉｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｒｅｖｅｒｓｅｄｐｈａｓｅＨＰＬＣｓｙｓｔｅｍｃｏｎ
ｓｉｓｔｉｎｇｏｆａＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ａｎｄａｍｉｘｔｕｒｅｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｎｄ００５％ ｐｈｏｓｐｈａｔｅａｃｉｄｗｉｔｈｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎａｓ
ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓａｄｏｐｔｅｄ．Ｔｈｅａｂｓｏｒｂａｎｃｅｗａｓｍｏｎｉｔｏｒｅｄａｔ３２６ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒｅｓｐｏｎｓｅｒａｎｇｅｗａｓ１０８２１５ｍｇ·Ｌ－１
（ｒ＝０９９９０），０２７８５５７ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９４），５５８１１２ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９９），０５２１１０４ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９５），０１６２
３２５ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９９）ａｎｄ０２８８５７６ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９８），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（ｎ＝６）．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ（ｎ＝９）ｏｆｓｉｘ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｗｅｒｅ９６３４％１０４０％．ＡｌｏｆＲＳＤｏｆｐｒｅｃｉｓｉｏｎ（ｎ＝６）ａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ（ｎ＝６）ｗｅｒｅｌｅｓｓｔｈａｎ１２％ ａｎｄ２６％．Ｃｏｎ
ｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｖａｌｉｄａｔｉｏｎｄａｔａｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｉｅ，ａｎｄｃａｎｂｅａｓｅｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｓｉｘｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎ
ＦｌｏｓＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉＩｎｄｉｃｉ．
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