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Comparative study between Cassia obtusifolia and processedCassia obtusifolia on anti-oxidation effect and NO/ET secretion

生、炒决明子水提物抗氧化及对一氧化氮、内皮素影响的比较研究



全 文 :生、炒决明子水提物抗氧化及对一氧化氮、内皮素
影响的比较研究
李文,殷小杰,张村,李丽,王岚,肖永庆
(中国中医科学院 中药研究所,北京 100700)
[摘要] 目的:对生、炒决明子水提物抗氧化及舒张血管的作用进行比较,探讨决明子明目的作用机制。方法:小鼠按体
重随机分成3组。即正常组,生决明子组,炒决明子组。每组20只,雌、雄各半 。给药组每日灌胃给药1次,生药含量10g·
kg-1;20mL·kg-1。正常组给相同体积的蒸馏水。连续给药1个月,摘除眼球组织匀浆,取上清液测定超氧化物岐化酶
(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮(NO),同时眼眶后静脉丛采血测定内皮素(ET)含量。结果:生、炒决
明子水提物有提高小鼠眼组织中SOD和 LDH活性、降低 MDA含量的作用,以生决明子作用为强。二者均能提高眼组织中
NO含量及NO/ET比值,炒决明子作用强于生决明子。结论:生、炒决明子均有一定抗氧化及调节舒张血管作用,决明子明目
作用可能是通过此方面来实现。
[关键词] 决明子;抗氧化;舒张血管
[收稿日期] 20090403
[基金项目] 国家“十一五”科技支撑计划(2006BAI09B06011)
[通信作者] 肖永庆,研究员。Tel:(010)84040221,Email:x.
heqi@163.com
  决明子始载于《神农本草经》,以明目之功而
名。它具有清肝明目、利水通便之功效,是临床用于
治疗眼疾的常用中药。有文献报道决明子具有抗氧
化方面作用[12],但对于眼组织方面的作用研究甚
少。本实验通过测定眼组织中的氧自由基,对生、炒
决明子水提物在抗氧化及对一氧化氮、内皮素方面
的作用进行比较,观察决明子炮制前后药理作用的
变化,对决明子明目作用机制进行初步探讨。
1 材料
1.1 动物 昆明种小鼠19~21g,雌雄各半,共60
只。购于北京大学医学院动物饲养中心,合格证号
CCYK(京)20060008;0125102。
1.2 药物 决明子CasiaobtusifoliaL.由本所胡世
林研究员鉴定。实验用样品的制备:取生、炒决明子
(炒决明子的制备按照《中国药典》2005年版一部相
关方法炮制)各20kg,分别加水煎煮3次,第1,2
次各15h,第3次1h,滤过,合并滤液,分别常压浓
缩至浸膏。生决明子每1g浸膏相当于原药材2.38
g;炒决明子每1g浸膏相当于原药材2.42g。由本
所化学室张村博士提供。使用前用蒸馏水配成05
g·mL溶液备用。
1.3 试剂与仪器 试剂盒:超氧化物歧化酶(SOD)
批号20081027;丙二醛(MDA)批号20081027;乳酸
脱氢酶(LDH)批号20081027;一氧化氮(NO)批号
20081029;以上试剂由南京建成生物研究所第一分
所提供。内皮素(ET)批号 200809;由解放军总医
院科技开发中心放免所提供并测定。仪器 LXJⅡ
离心沉淀机,上海医用仪器厂;ZS3半自动生化仪,
北京中生生物工程高技术公司;JD1003电子天平,
沈阳龙腾电子称量仪器有限公司;Sn695B型免疫
计数器,上海核所日环光电仪器有限公司。
2 方法[3]
2.1 动物分组与给药 小鼠按体重随机分成3组,
即正常组、生决明子组和炒决明子组。每组20只,
雌雄各半。给药组每日灌胃给药1次,生药含量10
g·kg-1;20mL·kg-1,相当于临床成人用量的2倍
(30g·d-1)正常组给相同体积的蒸馏水。连续给
药1个月后,摘取小鼠双侧眼球为1份标本,保留视
神经和球结膜,用生理盐水洗去表面残血,滤纸吸去
水分,电子分析天平称重后置于匀浆器中,加入4℃
生理盐水,低温匀浆成25%的匀浆液。将匀浆液
以3000r·min-1低温离心 15min,取上清液测定
SOD,MDA,LDH,NO在组织中的含量。
在取眼球前,眼眶采血1mL,置于含10%依地
酸二钠15μL和抑肽酶20μL的试管中混匀,低温
3000r·min-1离心15min,分离血浆,测定血浆中
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的ET含量。
2.2 统计学处理 实验结果以 珋x±s表示,采用单
因素方差分析,用SPSS130统计软件包处理。P<
005为有统计学差异。
3 结果
3.1 对自由基相关指标及乳酸脱氢酶的影响 结
果显示,生、炒决明子组可提高 SOD,LDH活性,降
低 MDA含量,与正常组比较有明显差异(P<
005)。与炒决明子相比,生决明子作用稍强,但两
组之间未见显著性差异(表1)。
表1 生、炒决明子对小鼠眼球中SOD,LDH活性及MDA水平的影响(珋x±s,n=20)
组别 剂量/g·kg-1 SOD/U·mg-1 MDA/nmol·mg-1 LDH/U·g-1
正常   - 223±031 138±091 16692±12065
生决明子 10 247±0371) 088±0721) 17840±193361)
炒决明子 10 235±039 105±082 17104±16833
  注:与正常组比较1)P<005(表2同)。
3.2 对 NO及 ET的影响 结果显示,炒决明子组
NO含量、NO/ET比值增高,与正常组比较有显著性
差异(P<005)。生决明子组作用强于正常组,但无
统计学意义,生、炒决明子之间差异不显著(表2)。
表2 生、炒决明子对小鼠眼球中NO及血浆中ET水平的影响(珋x±s,n=20)
组别 剂量/g·kg-1 NO/μmol·g-1 ET/ng·L-1 NO/ET
正常   - 0813±0436 6563±1037 1290±803
生决明子 10 1197±0737 5990±946 2029±1273
炒决明子 10 1297±08081) 5930±1042 2409±22061)
4 讨论
近年的研究结果证实[4],各种眼疾也是氧自由
基长期破坏的结果。随着年龄的增长,人体抗氧化
物与自由基的代谢日趋不平衡,过量堆积的氧自由
基抑制抗氧化物质的产生和功能的发挥。由于眼睛
周围分布着丰富的毛细血管、神经等组织,老化堆积
过量的自由基袭击眼部神经、晶状体、睫状体、视网
膜、血管壁等部位,从而导致白内障、黄斑退化等严
重老化性眼疾,这是老年人容易患有各种眼睛疾病
的主要原因。本实验结果显示,生、炒决明子水提物
能增强眼球组织中SOD的活性,同时使过氧化脂质
MDA的水平降低。表明生、炒决明子具有一定的抗
氧化作用,能清除氧自由基,使眼组织在代谢障碍等
方面减少自由基的攻击。
有关报道介绍,老年性白内障未成熟期与外伤
性白内障比较,其 LDH活性明显降低,说明老年性
白内障在形成过程中 LDH活性下降[5]。而老年性
白内障患者房水和血清中 LDH活性较正常人偏
低[6]。LDH是人体中的重要酶之一,它通过参与糖
的无氧酵解,产生三磷酸腺苷(ATP)。ATP具有扩
张末梢血管的作用,能改善视网膜及视神经血液循
环[7]。本实验结果显示,生、炒决明子水提物能使
小鼠眼球组织中LDH活性提高,这有可能会弥补白
内障在形成过程中造成的LDH低下,起到对老年性
白内障的预防和治疗作用。
现代医学研究发现,眼底退行性病变常伴有
眼底微循环的障碍,NO和 ET是血管内皮细胞产
生的血管活性物质,NO能松弛平滑肌、舒张血
管。有研究发现 NO能扩张脉络膜血管及眼外动
脉[8],而 ET具有血管收缩作用。正常情况下,二
者属于动态平衡,如果平衡失调,将导致眼底微
循环障碍。本实验结果显示,生、炒决明子水提
物能提高眼组织中 NO的含量和 NO/ET比值,这
对于扩张血管、改善眼底微循环可能会有一定的
促进作用。
本实验从抗氧化和舒张血管调节因素等方面对
生、炒决明子水提物进行比较研究,实验结果表明
生、炒决明子水提物都具有一定抗氧化及调节舒张
血管因素作用。生决明子水提物抗氧化方面的作用
略强,而炒决明子水提物调节舒张血管因素的作用
更明显,但二者差异不显著。
决明子用于临床治疗眼疾已有悠久的历史,以
上研究分析表明:决明子的明目作用机制可能是通
过增加眼组织抗氧化物,提高局部一氧化氮含量,调
节舒张血管因素,间接改善视网膜和眼底微循环来
实现的。
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[参考文献]
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ComparativestudybetweenCassiaobtusifoliaandprocessed
CassiaobtusifoliaonantioxidationefectandNO/ETsecretion
LIWen,YINXiaojie,ZHANGCun,LILi,WANGLan,XIAOYongqing
(InstituteofChineseMateriaMedica,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China)
[Abstract] Objective:ToobservethediferentefectsofwatersolubleextractsfromCasiaobtusifoliaandprocessedCobtusi
foliaonantioxidationandvasodilatation,andtoexplorethemechanismofeyeclearingefect.Method:Micewererandomlydivided
intothreegroups:normalcontrolgroup,CobtusifoliagroupandprocessedCobtusifoliagroup.Tenmaleand10femalemicewerein
eachgroup.miceweregivenextractsoraly10g(20mL)crudedrug/kgforonemonth,controlgroupweregivensamevolumewater.
ThentheeyebaltissuewasharvestedtopreparehomogenatetotestSOD,MDA,LDHandNO.Bloodwascolectedfromposterioror
bitalvenousplexustotestET.Result:BothtwokindsofextractscouldraisetheactivityofSODandLDH,decreasetheMDAlevel.
ExtractsfromCobtusifoliashowedhigherefectsonabovementionedaction.BothtwokindsofextractsincreasedtheratiovalueofNO/
ETsignificantly,andextractsfromprocessedCobtusifoliashowedhigheractivity.Conclusion:BothCobtusifoliaandprocessedC
obtusifoliaextractsshowobviousantioxidationandvasodilatationefects.TheseresultsmaysupporttheeyeclearingactivityofCob
tusifolia.
[Keywords] Casiaobtusifolia;antioxidation;vasodilatation
[责任编辑 古云侠]
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