全 文 ：熟地黄抗 Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导过敏反应的活性部位研究
孔晓妮，温学森
（山东大学 药学院 生药学研究所，山东 济南 ２５００１２）
［收稿日期］　２００８０４２５
［基金项目］　国家自然科学基金项目（３０４７２１８９）
［通信作者］　温学森，Ｔｅｌ：（０５３１）８８３８２０２８，Ｅｍａｉｌ：ｘ．ｓ．ｗｅｎ＠
１６３．ｃｏｍ
［作者简介］　孔晓妮，硕士研究生，主要从事中药现代化研究，Ｔｅｌ：
（０５３１）８８３８２０２８，Ｅｍａｉｌ：ｋｏｎｇｘｉａｏｎｉ＠１６３．ｃｏｍ
　　熟地黄具有滋阴补血，益精填髓的功效，临床上
通常作为补血药［１］。现代药理研究表明，地黄对血
液系统、内分泌系统、免疫系统、心血管系统和神经
系统有着广泛的生物活性［２］。熟地黄作为滋补药，
通常需要长期用药才能发挥药效，但近年研究表明，
熟地黄还具有快速作用的一面，如抗急性胃黏膜损
伤［３］，抗Ⅰ型变态反应［４］等。戴岳等［５］报道，熟地
黄配伍的四物汤对实验性变态反应的抑制作用强于
生地黄配伍的四物汤；在体外实验中，熟地黄能抑制
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０所诱导的肥大细胞组胺释放，而生
地黄不仅没有抑制作用，反而具有一定的促进作用，
说明熟地黄抗过敏反应活性是由炮制而产生的。熟
地黄炮制过程中成分发生了显著变化［６］，至今对熟
地黄有效成分研究尚不深入。本研究对熟地黄抗
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导的过敏反应活性部位进行了
初步探索。
１　材料
１．１　熟地黄水煎液及其不同部位的制备　熟地黄
饮片购自济南建联中药饮片有限公司，经山东大学
生药教研室赵华英教授鉴定为 ＲａｄｉｘＲｅｈｍａｎｎｉａｅ
Ｐｒａｅｐａｒａｔａ。首先将熟地黄加３倍量水，微沸３ｈ，取
煎液。残渣再煎煮２次，每次加２倍量水，微沸２ｈ，
合并３次煎液，浓缩至生药含量２００ｇ·Ｌ－１，作为熟
地黄水煎液。分装，－２０℃冷冻备用。
取熟地黄水煎液，用４倍量醋酸乙酯萃取４次，
合并醋酸乙酯相，５０℃减压蒸干，用少量乙醇溶解
作为脂溶性部位；水相加乙醇调至含醇量为８０％，
静置，抽滤，沉淀加蒸馏水溶解，作为醇不溶部位
（此部位主要含熟地黄多糖等醇不溶大分子成分）；
滤液蒸至无醇味，作为醇溶部位（此部位主要含醇
溶小分子成分）。各部位浓缩至含原生药２００ｇ·
Ｌ－１，供药效实验用。
１．２　试剂　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０，Ｏｐｈｔｈａｌａｌｄｅｈｙｄｅ和
Ｐｅｒｃｏｌ分离液（美国 Ｓｉｇｍａ公司），其他试剂均为国
产分析纯。
１．３　动物　雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠２２０～２５０ｇ；雄性昆明
种小鼠２０～２４ｇ，均由山东大学实验动物中心提供，
动物质量合格证号 ＳＣＸＫ（鲁）２００３０００４；动物室温
度２２℃，湿度５０％ ～５５％，饲养和实验过程中，动
物自由进食和饮水。
２　方法
２．１　对 Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导大鼠腹腔肥大细胞
（ＲＰＭＣ）组胺释放的影响　参照 Ｅｎｅｒｂａｃｋ等的方
法［７］，将大鼠断头处死后给其腹腔注射预冷的 ｂｕｆ
ｅｒＢ（１３７ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＣｌ，５６ｍｍｏｌ·Ｌ－１葡萄糖，
１２ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＨＣＯ３，２７ｍｍｏｌ·Ｌ
－１ ＫＣｌ，０３
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＨ２ＰＯ４，０１％明胶）２０ｍＬ，按摩腹部
９０ｓ，吸取腹腔冲洗液，４℃离心（１１００ｒ·ｍｉｎ－１，１０
ｍｉｎ，沉淀以 １ｍＬｂｕｆｅｒＢ重悬。取 ９０％Ｐｅｒｃｏｌ４
ｍＬ，加入１ｍＬ细胞悬液，混匀后于液面上滴加１ｍＬ
ｂｕｆｅｒＢ溶液，４℃离心（１５００ｒ·ｍｉｎ－１，１５ｍｉｎ），细
胞沉淀以 ｂｕｆｅｒＢ溶液洗涤２次，用１ｍＬｂｕｆｅｒＡ
（１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＨＥＰＥＳ，１３０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＣｌ，５
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ，１４ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＣａＣｌ２，１ｍｍｏｌ·Ｌ
－１
ＭｇＣｌ２，５６ｍｍｏｌ·Ｌ
－１葡萄糖，０１％小牛血清）重
悬。调细胞密度５０×１０５个／ｍＬ。台盼蓝染色测细
胞活力９５％，甲苯胺蓝染色，细胞纯度约９２％。
取上述肥大细胞悬液０９Ｌ置不同试管中，分
别加药液００５ｍＬ，使熟地黄水煎液组原生药含量
为０１，１０，２０ｇ·Ｌ－１；使脂溶性部位、醇不溶部位
和醇溶部位组相当于生药含量为１０ｇ·Ｌ－１，Ｃｏｍ
ｐｏｕｎｄ４８／８０对照组和自发释放组给予等体积的
ＰＢＳ缓冲溶液（ｐＨ７２）。３７℃孵育１０ｍｉｎ后，各
组添加Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０００５ｍＬ（自发释放组添加
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等体积生理盐水），使终浓度为０５ｍｇ·Ｌ－１，继续
孵育１０ｍｉｎ，冰浴终止反应，离心得上清液，采用改
良的荧光分光光度法测定组胺含量［８９］，作为组胺释
放量；于沉淀中加１ｍＬｂｕｆｅｒＡ重悬细胞，煮沸 １
ｍｉｎ，离心收集上清液，测定组胺含量，作为组胺剩余
量。按以下公式计算释放率和抑制率：
释放率＝组胺释放量／（组胺释放量 ＋组胺剩余量）×
１００％；
抑制率＝（释放率对照组 －释放率处理组）／（释放率对照组 －
自释放率发释放组）×１００％
２．２　对Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导过敏性休克的影响　
取雄性小鼠７５只，随机分为５组，腹腔给药，熟地黄
水煎液、脂溶性部位、醇溶部位和醇不溶部位各组的
生药剂量均为１×１０－２ｇ·ｋｇ－１，Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０对
照组给予等体积生理盐水。１ｈ后各组均腹腔注射
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０（８μｇ·ｇ－１），观察１ｈ，记录小鼠死
亡情况，计算死亡率（％）。
２．３　对Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导过敏小鼠血浆组胺含
量的影响　取雄性小鼠６０只，随机分为６组（正常
组、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０对照、熟地黄水煎液、脂溶性部
位、醇不溶部位、醇溶部位）。给药和 Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／
８０的方法同 ２．２，正常组给予等体积的生理盐水。
１０ｍｉｎ后断头取血，肝素抗凝，２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心
１０ｍｉｎ得血浆，组胺含量测定方法同２．１。
组胺抑制率＝（组胺含量对照组 －组胺含量处理组／（组胺含
量对照组 －组胺含量正常组）×１００％
３　结果
３．１　对Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导ＲＰＭＣ组胺释放的影
响　在本实验条件下，ＲＰＭＣ组胺自发释放率
（９６２±１６４）％，Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０对照组胺释放率
（６３８２±２２３）％。３个剂量的熟地黄水煎液均显
著抑制ＲＰＭＣ组胺释放，且具有剂量依赖关系。与
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０对照组相比，熟地黄各部位对Ｃｏｍ
ｐｏｕｎｄ４８／８０诱导的ＲＰＭＣ脱颗粒均有抑制作用，其
中脂溶性部位和醇不溶部位的组胺抑制率较弱，而
醇溶部位的抑制率较强，并且显著高于相当剂量的
熟地黄水煎液（表１）。
３．２　对Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导过敏性休克的影响　
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０对照组在腹腔注射 Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／
８０后，小鼠出现躁动、抓鼻、呼吸急促、紫癜、步态不
稳、跳跃、痉挛等症状，最后死亡。而各给药组能不
同程度地改善其症状，降低小鼠死亡率，醇溶部位死
　　表１　熟地黄不同提取部位对Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导大鼠
腹腔肥大细胞组胺释放的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｇ·Ｌ－１
组胺释放率
／％
抑制率
／％
自发释放 － ９６２±１６４ －
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０对照 － ６３８２±２２３ －
熟地黄水煎液 ０１ ４７６３±２９３２） ６２
　 １ ２５０１±１３４２） ５４７
　 ２ ４０２±１２３２） ９２１
脂溶性部位 １ ５２８９±４４２１，３） １９５
醇不溶部位 １ ５０３０±２７７２，３） ３６２
醇溶部位 １ ８３４±３７９２，３） ８６１
　　注：与Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０对照比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１；与熟地
黄水煎液中剂量组比较３）Ｐ＜００５。
亡率仅有４６４７％，明显低于熟地黄水煎液中剂量
组（表２）。
表２　对Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导小鼠过敏性休克及其
血浆组胺含量的影响（珋ｘ±ｓ）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
死亡率
／％
血浆组胺含量
／μｇ·Ｌ－１
组胺抑
制率／％
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０对照 － １０００ ２４６３±１５７ －
熟地黄水煎液 １×１０－２ ６００ １０３９±０６０２） ５８６
脂溶性部位 １×１０－２ ６６７ ２０３７±０９１２，３）１８８
醇不溶部位 １×１０－２ ７３３ ２３４９±０７９１，３） ６４
醇溶部位 １×１０－２ ４６７ １２６３±１０１２，３）４９７
　　注：①与 Ｃｏｎｍｐｏｕｎｄ４８／８０对照比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１；与
熟地黄水煎液组比较３）Ｐ＜００５。②死亡率 ｎ＝１５，血浆组胺含量
ｎ＝１０。
３．３　对Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导过敏小鼠血浆组胺含
量的影响　经测定正常小鼠血浆组胺含量为（１３５±
０１３）μｇ·Ｌ－１，而 Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０对照组小鼠为
（２４６３±１５７）μｇ·Ｌ－１。统计处理表明：各给药组
血浆组胺含量均显著低于 Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０对照组，
而醇溶部位组胺抑制率与熟地黄水煎液组比较接近，
醇不溶部位和脂溶性部位的抑制率较低（表２）。
４　讨论
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０是 Ｎ甲氧苯胺和甲醛的缩合
物，常被用来作为实验性过敏反应的诱导剂［９１１］。
因此，采用Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导的小鼠全身过敏反
应和ＲＰＭＣ脱颗粒实验作为熟地黄抗过敏反应活
性部位的筛选模型。
Ｋｉｍ．Ｈ等［４］研究发现，体内给药时，每克体重
００１ｍｇ熟地黄可使大鼠死亡率从对照组的１００％
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下降到５３３％；而离体条件下，质量浓度为 １ｇ·
Ｌ－１的熟地黄对ＲＰＭＣ脱颗粒的抑制率达到显著水
平。本研究根据实际情况，对给药剂量进行了调整。
将熟地黄分为不同部位，虽然各部位均有一定作用，
但小分子部位的作用强度明显高于其他部位。在体
内实验中，选用小鼠作为实验动物，进一步证实了体
外实验的结果，因此认为醇溶部位为 Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／
８０诱导过敏反应的有效部位。
熟地黄及其醇溶部位在体外和体内实验中，有
效剂量差异很大，认为其可能通过间接途径发挥抗
过敏作用，其作用机制正在研究中。针对地黄的活
性成分研究前人已经开展了大量工作，如地黄多
糖［１２］、地黄寡糖［１３］、梓醇［６］等。水苏糖和梓醇为生
地黄的主要小分子成分，但在炮制过程中，梓醇几乎
全部降解，其降解途径和产物不明，水苏糖几乎全部
转化成了甘露三糖，同时果糖含量显著增加［１４］。因
此，熟地黄对Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０诱导过敏反应的有效
成分尚待进一步研究。
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ｐｒｏｖａｂｌｅｅｆｅｃｔｓｏｎｈｅｍｏｒｈｅｏｌｏｇｙｗｉｔｈｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆｒｏｏｔｓｏｆ
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［责任编辑　古云侠］
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