全 文 ：原花青素舒张家兔离体肺动脉的研究
张团笑１，牛彩琴２，蓝海涛１，刘红１，敬华娥１
（１．川北医学院 生理学教研室，四川 南充 ６３７００７；
２．川北医学院 中西医临床医学系，四川 南充 ６３７００７）
［摘要］　目的：研究葡萄籽提取物原花青素（ＰＣ）对家兔离体肺动脉血管的舒张作用及机制。方法：采用家兔离体肺动
脉平滑肌标本，以去甲肾上腺素（ＮＡ）预收缩后，给予ＰＣ（０６２５，１２５，２５ｍｇ·Ｌ－１），观察其舒张血管的量效关系；并分为对
照组、ＰＣ组、ＰＣ＋吲哚美辛（１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１）、ＰＣ＋普萘洛尔（１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１）、ＰＣ＋左旋硝基精氨酸（１×１０－４ｍｏｌ·
Ｌ－１）、ＰＣ＋甲烯蓝（１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１）和ＰＣ＋去内皮细胞７组，探讨ＰＣ舒张血管的机制；用ＰＣ（２０ｍｇ·Ｌ－１）温育标本后，观
察ＰＣ对ＮＡ（１×１０－８～１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１），ＫＣｌ（６３～１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１）和ＣａＣｌ２（１×１０
－５～１×１０－２ｍｏｌ·Ｌ－１）量效曲线的影
响。结果：ＰＣ能明显舒张肺动脉血管，并有量效关系（ｒ＝０６９，Ｐ＜００１）；去除血管内皮、ＬＮＮＡ或 ＭＢ可抑制 ＰＣ的舒张作
用，但吲哚美辛和普萘洛尔无影响；ＰＣ能压低 ＮＡ，ＫＣｌ和 ＣａＣｌ２的量效收缩曲线，三者的 ｐＤ２分别由对照的（７５７±２４１），
（１７４±１１９），（３７２±１８８）降低为（６４７±１４２），（１０７±１１２），（３１７±１５５）；ＰＣ也能抑制ＮＡ引起的第Ⅰ时相收缩，对
ＣａＣｌ２引起的第Ⅱ时相收缩无影响。结论：ＰＣ舒张肺动脉的作用是内皮依赖性，且与 ＮＯ／ｃＧＭＰ介导有关；也可能是拮抗 ＲＯＣ
和ＰＤＣ通道，降低胞浆Ｃａ２＋而舒张血管。
［关键词］　原花青素；肺动脉环；内皮细胞；Ｃａ２＋
［收稿日期］　２００９０７０３
［基金项目］　四川省教育厅重点项目（０８ＺＡ１０９）
［通信作者］　牛彩琴，Ｔｅｌ：（０８１７）２２４２２６２，Ｅｍａｉｌ：ｎｉｕｃａｉｑｉｎ＠
１２６．ｃｏｍ
　　原花青素（ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ，ＰＣ）是广泛存在于植物
界中的一类多酚化合物，由不同数量的儿茶素或表
儿茶素缩合而成。它在葡萄属植物种子中含量很
高，葡萄类产品如红葡萄酒富含ＰＣ，有报道ＰＣ能降
低冠心病、高血压等心血管疾病的发生［１］，尽管如
此，常规应用葡萄酒预防心血管疾病还存在很多问
题。为探讨 ＰＣ对心血管疾病的影响，采用家兔离
体肺动脉环恒温灌流法，观察 ＰＣ对去甲肾上腺素
（ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎｅ，ＮＡ）、ＫＣｌ预收缩血管张力的影响，
并探讨其作用机制，为 ＰＣ进入临床的应用提供理
论依据。
１　材料
１．１　动物
清洁级健康家兔１２只，体重２５～３０ｋｇ，雌雄
不拘，由兰州生物制品研究所提供，合格证号医动字
第１４００４号。
１．２　药物与试剂
原花青素购自天津市尖峰天然产物研究开发
公司，批号 ２００２０９３０；多酚≥９５６％，双蒸水配制
成１２５，２５，５０ｇ·Ｌ－１备用。乙酰胆碱 ａｃｅｔｙｌ
ｃｈｏｌｉｎｅ（ＡＣｈ）和普萘洛尔 ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ（Ｐｒｏｐ）均为
北京第二制药厂产品；左旋硝基精氨酸 ＮωｎｉｔｒｏＬ
ａｒｇｉｎｉｎｅ（ＬＮＮＡ）和吲哚美辛 Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ（Ｉｎｄｏ）
均为 Ｓｉｇｍａ产品；甲烯蓝 ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｂｌｕｅ（ＭＢ）为
Ｍｅｒｃ产品；无 Ｃａ２＋ ＫｒｅｂｓＨｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液用
０２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ代替 ＣａＣｌ２；其他试剂均为
分析纯。
１．３　仪器
离体恒温灌流肌槽（兰州大学化学系玻璃仪器
厂）；ＩＢＭ电脑，内置Ｂｉｏｌａｐ４１０（ＢＬ４１０）智能型生物
信号处理系统（成都泰盟电子有限公司）；张力传感
器（ＪＨ２，中国北京航天医学工程研究所）。
２　方法
２．１　标本制备
健康家兔１２只，猛击头致昏后，迅速取出肺动
脉，放置于盛有 ＫＨ液培养皿中，并持续通入９５％
Ｏ２和 ５％ＣＯ２混合气体，剔去结缔组织后制成长
２５～３０ｍｍ动脉环［２］，置于３７℃恒温的灌流肌槽
中，持续通有９５％Ｏ２和５％ＣＯ２混合气体，经张力换
能器将其张力变化输入电脑，用ＢＬ４１０系统记录实
验数据，给予２０ｇ的前负荷。每２０ｍｉｎ更换１次
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ＫＨ液（３７℃），温育平衡 １５～２０ｈ。加入 １×
１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＡＣｈ后若血管舒张大于６０％［３］，视
为内皮完整，否则为去内皮的。
２．２　分组及处理
２．２．１　ＰＣ对ＮＡ预收缩血管张力的影响　记录静
息动脉环张力后，用ＫＣｌ６０ｍｍｏｌ·Ｌ－１刺激达峰值，
然后用ＫＨ液冲洗，重复３次，以诱发血管环的最
大收缩幅度。待血管环重新稳定后，用１×１０－６ｍｏｌ
·Ｌ－１ＮＡ收缩至最大值，以此为１００％效应。向浴
槽中累积加入０６２５，１２５和２５ｍｇ·Ｌ－１，记录ＰＣ
的量效曲线，计算其舒张率（％）；并以等量生理盐
水（ＮＳ）和１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＡＣｈ作为对照。冲洗
后在不同的浴槽中分别加入１×１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１Ｌ－
ＮＮＡ，１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＭＢ，１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１Ｉｎ
ｄｏ，１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１Ｐｒｏｐ温育１５ｍｉｎ或去除内皮
细胞后，加入１×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１ＮＡ收缩至最大，再
累积加入ＰＣ观察动脉环的变化。
２．２．２　ＰＣ对 ＮＡ，ＫＣｌ和 ＣａＣｌ２量效曲线的影响　
在去除内皮细胞的情况下，向浴槽分别累积加入
ＮＡ（１×１０－８～１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１），ＫＣｌ（６３～１００
ｍｍｏｌ·Ｌ－１）或ＣａＣｌ２（１×１０
－５～１×１０－２ｍｏｌ·Ｌ－１）
后，测量并计算其收缩率（％），此为对照组；冲洗后
加入ＰＣ（２０ｍｇ·Ｌ－１）温育１５ｍｉｎ后，再做ＮＡ，ＫＣｌ
和ＣａＣｌ２的量效曲线，方法同对照组。
２．２．３　ＰＣ对 ＮＡ和 ＣａＣｌ２双时相曲线的影响　将
标本置于无 Ｃａ２＋ ＫＨ液的浴槽中温育３０ｍｉｎ后，
加入１×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１ＮＡ收缩至最大值，再加入
１×１０－２ｍｏｌ·Ｌ－１ＣａＣｌ２描记最大反应，记录其张力
（ｇ），此为对照组；冲洗后向浴槽中加入２０ｍｇ·Ｌ－１
ＰＣ温育１５ｍｉｎ后，再重复上述方法。
２．３　观测指标
血管舒张率（％）＝（正常效应值 －药物效应
值）／正常效应值；血管收缩率（％）＝（效应值 －前
负荷值）／（最大效应值－前负荷值）；血管收缩张力
（ｇ）＝效应值 －前负荷值；亲和力指数（ｐＤ２）＝－
ｌｏｇＫＤ＝ｌｏｇ（１／ＫＤ）。
２．４　统计学分析
所有数据均以珋ｘ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ１１０软件进
行方差分析或ｔ检验，以Ｐ＜００５为有统计学意义。
３　结果
３．１　ＰＣ对ＮＡ预收缩血管张力的影响
ＰＣ可显著舒张内皮完整的肺动脉环，并有剂量
依赖关系（ｒ＝０６９，Ｐ＜００１）；且 ２５ｍｇ·Ｌ－１ＰＣ
（６９６８±１０６７）％ 与１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＡＣｈ（６５２３±
１０８８）％ 的舒张作用相似。用 ＬＮＮＡ，ＭＢ温育或
去除内皮细胞后，ＰＣ舒张血管的作用明显减弱；但
Ｉｎｄｏ和Ｐｒｏｐ对ＰＣ的舒张作用无影响（表１）。
表１　拮抗剂对ＰＣ舒张血管作用的影响（珋ｘ±ｓ）％　
组别 ｎ
ＰＣ／ｍｇ·Ｌ－１
０６２５ １２５ ２５０
ＮＳ ８ ４６５±２１９ ７２１±３０６ １２５４±３８３
ＰＣ １０１４０１±７１１） ５６８４±１３５２１）６９６８±１０６７１）
ＰＣ＋Ｉｎｄｏ ８１３４５±６９０ ４６９３±１７１５ ６２７８±１４４４
ＰＣ＋Ｐｒｏｐ ８ ８５９±４３５ ４０９９±１４２９ ６８５５±１２２３
ＰＣ＋Ｄｅｎｕｄ ８ ４２２±１０９２） ９５０±２２７２） １２７９±６０８２）
ＰＣ＋ＬＮＮＡ ８ ３２０±２４０２） ８１７±３４７２） １４７３±６０４２）
ＰＣ＋ＭＢ ８ １８５±２６１２） ９１８±３８８２） １２２５±４００２）
　　注：与ＮＳ比较１）Ｐ＜００１；与ＰＣ相比２）Ｐ＜００１。
３．２　ＰＣ对ＮＡ，ＫＣｌ和ＣａＣｌ２量效曲线的影响
ＰＣ能压低 ＮＡ，ＫＣｌ和 ＣａＣｌ２的量效收缩曲线，
其最大值分别降为（５５９４±１８３２）％，（７３２８±
１５９３）％，（６１７５±９８１）％，ｎ＝１０，Ｐ＜００１；且其
ｐＤ２分别由对照的（７５７±２４１），（１７４±１１９），
（３７２±１８８）降为（６４７±１４２），（１０７±１１２），
（３１７±１５５）（图１）。
与对照组（ＮＳ）比较１）Ｐ＜００１。
图１　ＰＣ对ＮＡ，ＫＣｌ和ＣａＣｌ２量效曲线的影响
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３．３　ＰＣ对ＮＡ和ＣａＣｌ２双时相曲线的影响
ＰＣ能明显抑制无钙液中 ＮＡ引起的第Ⅰ时相
收缩［对照组（２４８±０２４）ｇ，ＰＣ温育组（１６０±
０１６）ｇ，ｎ＝１０，Ｐ＜００１］，而对ＣａＣｌ２诱发的第Ⅱ时
相收缩无影响［对照组（１５２±０１４）ｇ，ＰＣ温育组
（１２０±０１１）ｇ，ｎ＝１０］。
４　讨论
ＰｒｅｕｓｓＨＧ等［４］认为 ＰＣ能降低大鼠因年龄增
加而升高的收缩压。在血管内皮完好的情况下，ＰＣ
与ＡＣｈ相似，可舒张ＮＡ预收缩的动脉环，并有浓度
依赖性。血管内皮细胞生成 ＥＤＲＦ等［５６］即 ＮＯ，通
过可溶性鸟苷酸环化酶受体激活血管平滑肌内的鸟
苷酸环化酶，使 ｃＧＭＰ浓度升高，引起胞浆内 Ｃａ２＋
的降低而舒张血管［７］。用 ＮＯＳ抑制剂 ＬＮＮＡ和鸟
苷酸环化酶抑制剂ＭＢ或去除内皮细胞后，发现 ＰＣ
舒张血管的作用明显减弱，说明其舒张血管效应是
内皮依赖性的，且与ＮＯ／ｃＧＭＰ介导途径有关。
血管内皮细胞使胞内ｃＡＭＰ含量增加而舒张血
管，通过环氧酶抑制剂吲哚美辛温育动脉环后，ＰＣ
舒张血管的作用无明显改变，说明 ＰＣ舒张血管作
用与前列腺素无关。血管平滑肌细胞的β肾上腺素
能受体也参与血管舒张，实验中用 β肾上腺素能受
体阻断剂普萘洛尔温育后，发现 ＰＣ舒张血管环的
作用与β肾上腺素能受体也无关。
胞浆中游离 Ｃａ２＋是引起平滑肌收缩的关键物
质。ＮＡ和高 Ｋ＋分别通过受体依赖性钙通道
（ＲＯＣ）和电压依赖性钙通道（ＰＤＣ），使细胞外Ｃａ２＋
内流和肌浆网 Ｃａ２＋释放增加，从而升高胞浆中
Ｃａ２＋，引起血管收缩。ＰＣ能使 ＮＡ的量效曲线右
移；也能抑制无钙液中ＮＡ诱发的第Ⅰ时相收缩（依
内钙性收缩），说明 ＰＣ能非竞争性的拮抗 ＲＯＣ，减
少ＩＰ３的生成，抑制肌浆网 Ｃａ
２＋的释放，降低胞内
Ｃａ２＋而使血管舒张。
细胞外Ｋ＋升高，使钾通道受到抑制［８］，引起细
胞膜去极化，从而使电压依赖性的钙通道开放，细胞
外Ｃａ２＋内流，导致平滑肌收缩。本实验通过 ＰＣ温
育无内皮的血管环后，抑制了ＫＣｌ和ＣａＣｌ２的量效收
缩曲线；说明 ＰＣ能非竞争性的拮抗电压依赖性的
钙通道（ＰＤＣ），减少细胞外 Ｃａ２＋内流而使血管舒
张。Ｋｉｍ等［９］从山楂中提取的 ＰＣ通过四乙铵敏感
性的Ｋ＋通道，缓解离体大鼠血管的紧张性。与本
实验的结果有所不同，可能与提取 ＰＣ的原料以及
所用的实验动物和条件不同有关。但又有报
道［１０１２］葡萄籽原花青素与维拉帕米相似可能与其
阻滞钙内流，减轻细胞内钙超载对心肌的损伤，尽管
是对心肌的研究，但提示 ＰＣ有拮抗钙通道，降低细
胞内Ｃａ２＋的作用。至于心肌细胞膜的钙通道与血
管平滑肌细胞膜的钙通道是否一致，ＰＣ抑制的钙通
道是否为同一类通道，其详细机制还有待于进一步
的研究。
本实验发现，ＰＣ可引起肺动脉血管舒张，可能
是内皮依赖性，且与 ＮＯ／ｃＧＭＰ介导有关；也可能是
通过拮抗ＲＯＣ和ＰＤＣ通道，抑制Ｃａ２＋内流和释放，
降低细胞内Ｃａ２＋引起血管舒张。
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　Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２００９
Ｖａｓｏｒｅｌａｘａｎｔｅｆｅｃｔｓｏｆｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｏｎｒａｂｂｉｔｐｕｌｍｏｎｉｃｒｉｎｇｉｎｖｉｔｒｏ
ＺＨＡＮＧＴｕａｎｘｉａｏ１，ＮＩＵＣａｉｑｉｎ２，ＬＡＮＨａｉｔａｏ１，ＬＩＵＨｏｎｇ１，ＪＩＮＧＨｕａｅ１
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＮｏｒｔｈＳｉｃｈｕａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，Ｎａｎｃｈｏｎｇ６３７００７，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌｉｎＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｃｈｏｎｇ６３７００７，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｖａｓｏｒｅｌａｘａｎｔｅｆｅｃｔｏｆｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎ（ＰＣ）ｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｇｒａｐｅｓｅｅｄｓｏｎｒａｂｂｉｔｔｈｏｒａｃｉｃｐｕｌ
ｍｏｎｉｃｒｉｎｇｓｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｒａｂｂｉｔｓｔｈｏｒａｃｉｃｐｕｌｍｏｎｉｃｒｉｎｇｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ，ｐｒｅｃｏｎｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎ（ＮＡ）ａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｓｐｏｎ
ｓｅｓｔｏｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＰＣｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．ＴｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍａｎｄｄｉｆｅｒｅｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｎＰＣｉｎ
ｄｕｃｅｄｒｅｌａｘａｔｉｏｎ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒＮωｎｉｔｒｏＬａｒｇｉｎｉｎｅ（ＬＮＮＡ），ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｂｌｕｅ（ＭＢ），ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓｙｎ
ｔｈａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ（Ｉｎｄｏ）ａｎｄｂｌｏｃｋａｇｅｏｆｔｈｅａｄｒｅｎｅｒｇｉｃβｒｅｃｅｐｔｏｒｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ（Ｐｒｏｐ），ｗｅｒｅａｌｓｏａｓｓｅｓｓｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＰＣ
ｃｈａｎｇｅｔｈｅｒｅｓｔｉｎｇｔｅｎｓｉｏｎｏｆｒａｂｂｉｔ＇ｓｐｕｌｍｏｎｉｃｒｉｎｇｓｂｕｔｃａｕｓｅｄａｎｏｂｖｉｏｕｓｄｏｓｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｌａｘａｔｉｏｎｉｎ１×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１ＮＡｐｒｅｃｏｎ
ｔｒａｃｔｅｄｐｕｌｍｏｎｉｃｒｉｎｇｓ（ｒ＝０６９，Ｐ＜００１）．ＴｈｅｒｅｌａｘａｎｔｅｆｅｃｔｏｆＰＣｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄｂｙｒｅｍｏｖａｌｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍｏｒｂｙ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｅｉｔｈｅｒ１×１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１ＬＮＮＡｏｒ１×１０－５ｍｏｌＬ－１ＭＢ，ｂｕｔｎｏｔｂｙｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓｙｎｔｈａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｒ
ｂｌｏｃｋａｇｅｏｆｔｈｅａｄｒｅｎｅｒｇｉｃβｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ＰＣ（２０ｍｇ·Ｌ－１）ｄｒｏｐｐｅｄｔｈｅｄｏｓｅｅｆｅｃｔｃｕｒｖｅｓｏｆＮＡ，ＫＣｌａｎｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｏｎ
ｐｕｌｍｏｎｉｃｒｉｎｇｓｄｅｎｕｄｅｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ．ＰＣｃａｎａｌｓｏｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｖａｓｏｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｏｎｃａｕｓｅｄｂｙＮＡｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｐｈａｓｅ，ｂｕｔｈａｓｎｏｉｍｐａｃｔｏｎ
ｔｈｅｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙＣａＣｌ２ｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄｐｈａｓｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＰＣｈａｓａｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍｄｅｐｅｎｄｅｎｔｖａｓｏｒｅｌａｘａｔｉｏｎｏｎｉｓｏｌａｔｅｄｒａｂｂｉｔ
＇ｓｐｕｌｍｏｎｉｃｒｉｎｇｓ，ｗｈｉｃｈｉｓｐｏｓｓｉｂｌｙｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ（ＮＯ）ｐａｔｈｗａｙｓａｎｄｂｌｏｃｋａｇｅｏｆｒｅｃｅｐｔｏｒｏｐｅｒａｔｅｄａｎｄｖｏｌｔａｇｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
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第３４卷第２１期
２００９年１１月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　２１
　Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２００９