全 文 :IgG
>Â×?@$,ABÚCcDE
FGl¢HI/0
*¦~
1,
?§§
1,
¨©
1,
bªv
2,
«¬m
1,
®a
1
(1
ëv¤k $«k%¾¿c
,
ªk% ¬kc ¬$¬`®4
,
ÿ!
100084;
2
!!ª«k% !¬®¯
,
ÿ!
100700)
[
z
]
Q
:
¤×()µõ#10ñc
G(IgG)
>Â×é겫lñc
(greenfluorescentprotein,GFP)
b
¨ª$%
,
¿=ë
IgG
¨ª%] >(WDEF$,ABÚCc \]
I
ñïT¢4/
。
¡¢
:
µõ
IgG
>Â×é겫lñc%b¨ª$%
,
Í#Î
,KCl,
Ê=vzûáÛfÃ÷4~
(
À·
80)
Cc/=
,
½¿=-*ôõöABnCcÐHI
,
#ËZml,;$bl$%B!G
。
£¤
:
è×%¢¡¢
ÚÀ·
80
IgG
%>ÂâãJuæù
,
Í#ÎT§F¡
IgG
¨ª%
,KCl
IgG
%Xù
。
1/*ôõöA
Bn
IgG
%JF¡ù
。
£V
:IgG
>Â×é겫lñc%$%öñT
IgG
%¸HI,å¢
,
À·
80
Tb¬û>^uæ
IgG
%
,
1/*ôõöABn
IgG
b¬¸^X\]
I
ñá¢
。
[
] IgG;I
ñÃ
;
ôõöABn
;
Í#Î
;
b¬éê
[
w)(
] 20090902
[
Q
]
%<&¨ÚÛÜ
(30801523);
%<
“
PJ
”
&
(³ K Z L
(2006BAI08B0309);
$ % \ » & ¨ Ú
(20080440418);“
6,æ
”
&(6¬Û
(2009ZX09103301,
2009ZX09502021)
[
d}
]
=o£
,Email:lijundu@mailtsinghuaeducn
$,ABÚÞ$-,æÚ¨,^bð]
Úñ
,
gzëH$-,½
,
~JS,AB
Ú]+
,
ù*ä½±
,
¶©ÁÂ
ú¢©
、
Oro©
、
â¾Wä©%w^
JðI
。
{©F%$,ABÚGl¢
HI/0Ô#
,
$,ABÚDEA.J
`ø
,
TåK
,
¾Cå={
、
àW³Y
g,DE¥ø,Þ$,ABÚGl¢/0²æ
1
[1]。
$,ABÚAëÃ>â
,
S
Aw
699%[2]。I
ñÃÞABÚâ
®AÒ
,
#Ãë#1$%ªp,
£¤½%¤dÔ
IgG
>⮽¦
[34]。
ôõöÞDE^s[©%wú#©,
。
®%<,âA/$Ow`ÄZ
,
.
xôõömôõöÎv
7
ABÚ]âå¢
c
、
lçâå
、
!{
、
OÅ
、
λÆYq,
Çä¶A
,
±²³à&#,âDE
,GlÈ
[5]。
®é/
,
ôõöABnAë
Ã>â
,
$ëâå¢cA>¶
,
Þ]H
â®Kª
[6]。2006
n
6
o
1
p
,
%<
SFDA
b!
ëû¿ôõöABnDE.`Ä
。
/0¨©
,]
I
ñÃ$,½k¢
IgG
F¡%
Kø
,
µõ
IgG
>Â×é겫lñcb¨ª
$%
,
¿=ÀëF¡
IgG
%>ååæAB
Ú
,
½ôõöABCcÔ²z{#Ë
。
1
0)Ó
11
,
ôõöABn
(
$6Ò,ªJK
LM
,
*A¤p>
0809091,0809092,0809093,
0809094)。
l,.$%¨S£Kn
、
n
÷
10
O
、
n÷
100
Oä
3
Ú!;
。
Ê=vzû
áÛfÃ÷4~
(
À·
80),KCl
YÍ#Î$%
¨S¶16eU
。
À·
80(
78G=ÚL
M
,
*A
940504);KCl(
787G¹$GâJKÕ
ÖLM
,
*A
20000320);
Í#Î
(
$%,âæ
âr1
,
*A
725200108)。
12
9:
OlympusSERIES120
«l(oò
;
DYY7C
ñWi9
(
78Ø9:_
);BIOERLitle
GeniusPCR
9
;SANYOMCO15ACCO2$%
[
;
Ùp&(
FR200A
ñlÂÓ¯J¤³
Co
。
13
IgG
>Â×
DNA
£ðT
yá!ÂÉ¢
£nlr
5mL,
¨ª;yà=Ú
(Tiangen)
·67·
u
35
Cu
1
w
2010
n
1
o
Vol.35,Issue 1
January,2010
î]²g0ùè¶àᨪ;
DNA。
ë¨
ª;
DNA
>öö
,
primerpremier50
;Zb
ø
IgG
>Â×ÑÅ>
sense:5′GGTTGATGTAG
GACGCCAAATGCT3′, antisense:5′TGACTGC
CCTGGTCAGCCAGAAT3′。
14 IgGpromoterGFP
%;Ð+µõ
v
IgGpromoter
PCR
Wi¤+G
T4
Ü
}R
(Fermentas)
Ü}âÊk
pUCmT
k^
,
EcoRI(Fermentas)
RÄÐ$³Ü}c
½/Ñ
。
v$³Ü}(/ÑXYÐ+
KpnI
(Fermentas)37℃
R
2h,
v
pEGFPN1
Ð+
AseI(Fermentas)37℃
R
2h
¤p
Klenow
fragment(Fermentas)37℃
>
10min,
v3
ëì
(Sangon)
yà
XhoI37℃
R
2h。
v
pEGFPN1
hR
BAPF(Worthington)55
℃
(¸4G
。
v
IgGpromoterpUCmT
Ð+Y
pEG
FPN1
Ð+hR
T4
Ü}RÜ}
。
vÜ
}×bGÆ
DH5αæÃ$%$,ÄáÃc½Sa
cI(Fermentas)
R4ÐÑx$³Ü}Ð+k
¬½6!àá+UÐ+
。
15
$%búÓ$%
x
20%
ËÌrG
(Gibico)DMEM
$%¨
(Gibico)
RPMI
8226
$%
(
$%-&.$%$O
)
ö×Ï
Ð
(Tiangen)
î]²gD=vµõ
IgGpromoterGFP
búÆ
RPMI8226
$%
。
bú
72
h
v$%}©
96
õöCc={
。
16
l,«lÍ]
zn:vb¨ª$%
D$ÎÊò
,
î]
6×105
/mL
$%
·U
96
õö=võ}¬
100μL$%=n。
$%[
1h
l,
。
m,x
20%
ËÌrG
DMEM
$%¨Sæ
。
v¬,n
î
10
OeUän÷£eUU
,
m,me
Uý
4
Ùõ
。
];lx
20%
ËÌrG
DMEM
$%¨
。
l,
30min
«lò
«
20
O
,10
OÜíÈÐáîÙÍ]
,
¬l.`K>
400ms。
võ=á
5
X
Ô-ÏÍ]îÙÍ]
。
17
B®5ø
ImageJ
o_väf£$¯
J±«l·U
,
ëo_{≥2000«l±ù
>«l$%
,
ZBväf£$«l$%
。
SPSS110
ýmB®5ø
,
êÎj¤³
,t
r
{
,
ë
P<005
>jkJ§¢
。
2
´
21
IgGpromoter
£ð
PCR
bø
TA
cÓ
¤³
먪;
DNA
>öö
,
sense
Y
an
tisense
60℃
Ã÷«Cc
35
PCR
ù
U
,
v
PCR
10%
ûÏüý$Wir/
,
0
T
284bp
6?½kò
,
ÓÜò6?
µ¥
。
v
EcoRI
R4ÐÑ$ãÜ}
TA
c
knqÿl^Pq()JKLM/Ñ
,
/
Ñ´ÓÜÑÅEâ
BLAST
ãÑCc
,
Ô
U>
100%。
22
IgGpromoterGFP
%Ð+4
Eco
RI
R4ÐÑbÆ$³Ü}
IgGpromoterGFP
%Ð+c
,
6!Ck½àáÐ+
。
ëÐ+>
öö
,
sense
Y
antisense,60℃
Ã÷«Cc
PCR
,
TbøGõ
284bp
6?Üò
。
23 RPMI8226
b¨ª$%%4
ö
×ÏÐv
IgGpromoterGFP
búÆ
RPMI8226
$
%
36h
«lò#Ë
,
J6!$%À %
²«lñc
(
f
1)。
v$%=nùöö
,
sense
Y
antisense
60℃
Ã÷«Cc
PCR
,
T
284bp
6?½kò
。
A
Fbl«b¨ª$%
:
²«lͱ
(
«l*U≥2000),>
IgGpromoterGFP
b¨ª
RPMI8226
$%
;B¯
Jl«-îÙ
$
RPMI8226
$%
。
f
1 IgGpromoterGFP
b¨ª
RPMI8226
$%
24
,
IgG
¨ª%>¦§
l,
30min
$%²«l$%CcZB
。
´%²
,
l,
30min
À·
80
IgG
>Â×Juæù
,
Í#Î
IgG
>Â×J§F¡ù
。KCl
/=
4
*AôõöABn
IgG
>Â×XF¡ù
(
f
2)。
3
ÜF±J/0,²,½k¢
IgG
F¡%
ÓABÚåJÔ²¢
[7]。
/0£SNµõ
ë
IgG
>Â×é겫lñc%b¨ª$%
öñ
。
öñ$Ð+
pEGFPN1
é겫lñ
c%
CMV
>Â×
IgG
>Â×·
,
ªWl,
·77·
u
35
Cu
1
w
2010
n
1
o
Vol.35,Issue 1
January,2010
A
À·
80;B
Í#Î
;CKCl;D
-*ôõöABn
;
Ó];Ô
P<005(珋x±s,n=4)。
f
2
-æ=,
IgG
>Â×éê¡¢
²«lñc%!G;}½öïë$
%æ,EF
IgG
¨ª%éê
。
z{ÍÐ$íåÐáîÙ
,
¬l.`è>
400ms,
blP$%¬l.`=
。
ë«l$%ZB>Q(Cc
IgG
>Â×éê
GFP
%jkËë^=j«l*U>Q
(ó
,¯
ë±V{©ömõjkò
«
l¯¡ë
96
õöX.$%Ñö.
ø!èUäÁ
。
>ëg,«l$%ZB
.#¢
,
z{$;K«l*U
(≥2000)
>³«l$%ZB±(W
。
{©
RPMI
8226
$%®Ò±
,
(±VX
rGmrG$%ÉÃë
IgG
>Â×@
,墯TT£]צ§
,
z{
RPMI8226
$%$á¨Sæx,
¨Ccl,={
。
J¤³QÍ#ÎDEAë
I
ñÃ
]ër¢Ór>â
[8]。
>ër{§
½k¢
,
¤p
KCl、
Í#ÎCc/
=
。
´&
KCl
IgG
>Âס¢Xù
,1μg
·L-1
Í#ÎTF¡
IgG
%
。
à&Í#Îâå
Ó
IgG
%_J²
,
-.|%²
I
ñÃåKJ½k¢
。
/0¿=ôõöABn ±`øå
£¤À·
80
CcÐHI
[9]。
z{«1
r/
4
*ôõöABnè]s
IgG
>Â
%F¡ù
,
ù>ABÚëÚÀ·
80
(500μg·L-1)IgG%Z&uæù。
à&DE`øôõöABnå¯TÓ
I
ñÃX²
。
J`øôõöABnå¯
TÓ Ç)À·
80
#âåJ²
[9],
/0ý
Ó¢³5ô=;
。
ùÂ$.¨ª>Â×ù>¤×ݱµõ
E!>Kн$,Ùijkß,+ݱ
TPH2
>Â×qùCcë`ø
[10]。
/0ù®
IgG
%Ó
I
ñÃÔ²¢µõë
IgG
promoterGFP
bú
RPMI8226
$%öñ
。RPMI
8226
$%
îb¢}ÔW
,
>V$%W$%
,
$%J¤dST
,
+ù>
IgG
k
öñTNöï
I
ñÃ$
IgG
F¡%
。
/0¨©
IgG
F¡%Ó®X\]
I
ñÃ
Ò`Ô²¢
,
$%öñ>E!
Ð,
I
ñÃåKHI,åË
Õ()>K¯c¢õOCcëJI{?W
,
@
öñ,Ðà¢6ÀîB®uå
。
[
]
[1]
#Ü
,
#Öv
,
äÚ
$,ABÚGl¢/0²æ
Á
[J]
×>$-
,2008,28(1):1
[2]
vCz
,
æx>
,
9§Ø
$,ABÚAFúéÀ
Ó¤³
[J]
$%-.,23
,2003,23(8):486
[3] RebeccaGruchalaUnderstandingdrugalergies[J]JAlergy
ClinImmunol,2000,105(6):S637
[4] AnnaZawodniak,WernerJPichlerImmunologicalprinciplesof
drughypersensitivity[M]//AlergyFrontiers:clinicalmanifesta
tions.Tokyo:SpringerJapan,2009:393
[5]
«
,
F9A
,
Ð|:
ôõöABnAÉ?
[J]
$,,ÓDE,ø
,2006,17(5):383
[6]
#Pö
,
ñÙé
,
©ò
ôõöABn%wùÓA
·87·
u
35
Cu
1
w
2010
n
1
o
Vol.35,Issue 1
January,2010
[J]
-,`ø
,2006,25(3):267
[7] QiaoHailing,GaoNa,JiaLinjing,etalSpecificIgGantibodies
inserainpatientswithpenicilinalergy[J]ClinExperimMed,
2009,9:105
[8]
9Ú
,
#ÿ
,
é
,
ä
Í#ÎABÚA ¦
§ªÎ¤³
[J]
,Ïc23
,2005,14(1):14
[9]
äÛ
,
#Ü
,
#Öv
,
ä
ôõö~nÓ¼¬øëÚSÜ
å¢
[J]
Þø23
,2009,23(1):47
[10]
,C
,
ìÝ
,
,8
,
ä
ijkß m;¤
TPH2
>
Âס¢¦§/0
[J]
$%$,23
,2009,34(17):
2261
StudyonIgGpromoterasprobetoevaluatesafety
ofinjectionsinpreclinic
WANGYugang1,LILele1,LEIFan1,LIANGAihua2,XINGDongming1,DULijun1
(1LaboratoryofPharmaceuticalScience,DepartmentofBiologicalSciencesandBiotechnology,Departmentof
PharmacologyandPharmaceuticalScience,SchoolofMedicine,TsignghuaUniversity,Beijing100084,China;
2InstituteofChineseMaterialMedica,ChineseAcademyofTraditionalChineseMedicine,Beijing100700,China)
[Abstract] Objective:Toconstructanefectivesystemscreeningandevaluatingpossibleinjectionsandcomponentsinducing
alergytypeIMethod:TransfectIgGpromoterregulatedgreenfluorescentproteinexpressingplasmidintoRPMI8226celThe
numberoffluorescentcelsafterdrugtreatmentwascalculatedandstatisticalyevaluatedResult:Tween80cansuppresstheexpres
sionofIgGefectively,andpuerarinhasactivityofstimulatingIgGexpression,andthesystemhasnoresponsetoKCltreatment.No
efectofYuxingcao(HerbaHoutuyniae)injectiononthissystemisobservedConclusion:IgGpromoterdrovegreenfluorescentpro
teinexpressingcellinecanbeusedassystemscreeninginjectionsandcomponentsinducingalergytypeIbasedonstimulatingIgG
promoteractivity.Tween80cansuppresstheexpressionofIgGatthetranscriptionallevel.FourbatchesofYuxingcaoinjectioncannot
inducealergytypeIbyactivatingIgGexpression
[Keywords] IgG;alergytypeI;HerbaHoutuyniae;puerarin;transcriptionalregulation
doi:10.4268/cjcmm20100116
[
-0
¿ÀÀ
]
·97·
u
35
Cu
1
w
2010
n
1
o
Vol.35,Issue 1
January,2010