全 文 ：决明子炒制前后指纹图谱比较研究
李桂柳，肖永庆，张 村，李　丽，逄　镇
（中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００）
［摘要］　目的：研究建立决明子不同饮片的 ＨＰＬＣ指纹图谱鉴别方法，比较生、炒决明子化学成分的差别。方法：采用
ＲＰＨＰＬＣ，流动相乙腈０．１％磷酸水溶液梯度洗脱，研究生、炒决明子饮片指纹图谱的区别，作相似度分析，并对其主要色谱峰
进行指认。结果：生、炒决明子饮片的ＨＰＬＣ指纹图谱有明显差异，并指认了１２个主要色谱峰。结论：采用ＨＰＬＣ图谱比较法
可作为生、炒决明子饮片的一项质控鉴别指标。
［关键词］　决明子；指纹图谱；高效液相
［收稿日期］　２００８０９０４
［基金项目］　国家“十一五”科技支撑计划项目（２００６ＢＡＩ０９Ｂ
０６０１１）
［通信作者］　肖永庆，Ｔｅｌ：（０１０）８４０４０２２１，Ｅｍａｉｌ：ｘ．ｈｅｑｉ＠
１６３．ｃｏｍ
　　决明子为豆科植物决明 ＣａｓｉａｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａＬ．或
小决明ＣｔｏｒａＬ．的干燥成熟种子［１］。具有清热明
目、润肠通便的功能，临床上常以不同的炮制品组方
入药。生决明子长于清肝热，润肠燥，用于目赤肿
痛，大便秘结。炒后能缓和寒泻之性，有平肝养肾的
功效，可用于头痛、头晕、青盲内障。现代研究表明，
决明子主要药效成分为蒽醌类化合物、萘并吡喃酮
类化合物等。药理学研究也证明决明子有降血压，
降血脂，保肝及抑菌等活性［２］。生、炒决明子功效
各异，在于炒制后其内在的化学成分在组成和含量
上发生了变化。为全面、有效地控制决明子饮片的
质量，作者在对决明子进行系统化学成分研究的基
础上，以ＨＰＬＣ进行了决明子炒制前后的指纹图谱
研究，同时指认了主要蒽醌类、萘并吡喃酮类共１２
个化合物，以期为饮片的质量评价提供科学依据。
１　仪器与试药
Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪（Ｗａｔｅｒｓ２６９５Ｓｅｐａｒａ
ｔｉｏｎｓＭｏｄｕｌｅ，Ｗａｔｅｒｓ２９９６ＰＡＤ检测器，Ｍｉｌｅｎｎｉｕｍ３２
数据处理软件）；超声清洗器 ＫＱ５００ＤＢ（昆山市超
声仪器有限公司）；乙腈为色谱纯，水为纯净水，使
用前均经０．４５μｍ滤膜滤过；其他试剂均为分析
纯。色谱峰指认用对照品为本研究组从决明子中分
离鉴定，经ＨＰＬＣ分析，其含量达到９８％以上。
决明子药材分别购于安徽、河南、广西等地。经
中国中医科学院中药研究所胡世林教授鉴定均为
Ｃ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ的干燥成熟种子；以上样品由安徽沪谯
中药饮片厂依法［１］炮制，分别制备成１０批生决明子
饮片、１０批炒决明子饮片。供试品来源详见表１。
表１　 样品产地
Ｎｏ 产地 编号 产地
Ｓ１ 安徽－１ Ｓ６ 河南－１
Ｓ２ 安徽－２ Ｓ７ 河南－２
Ｓ３ 安徽－３ Ｓ８ 河南－３
Ｓ４ 安徽－４ Ｓ９ 广西－１
Ｓ５ 安徽－５ Ｓ１０ 广西－２
２　方法与结果
２．１　色谱条件
ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动
相乙腈（Ａ）０．１％磷酸溶液（Ｂ）梯度洗脱，０～２５
ｍｉｎ，１９％～２０％Ａ；２５～３５ｍｉｎ，２０％～３２％；３５～４５
ｍｉｎ，３２％Ａ～４１％；４５～６０ｍｉｎ，４１％Ａ～７０％；７０
ｍｉｎ后，１９％Ａ；检测波长４３０ｎｍ。柱温３０℃；流速
１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１。在此条件下不同决明子饮片能检
出２３个峰。分析时间８０ｍｉｎ。供试品溶液和对照
品溶液进样量均为１０μＬ。
２．２　供试品溶液、对照品溶液的制备
精密称取决明子粉末（过４０目筛）１．００００ｇ，
置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇２５ｍＬ，密塞，称定
质量，超声提取１５ｍｉｎ后，放冷，密塞，再称定质量，
以甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，以微
孔滤膜（０．４５μｍ）滤过，即得供试品溶液。
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取各对照品适量，加甲醇溶解，以微孔滤膜
（０４５μｍ）滤过，即得对照品溶液。
２．３　参照峰的选择
以选择的流动相进行梯度洗脱，从色谱图上可
以看出，８号峰保留时间适中，峰面积稳定，峰形较
好；且峰面积大于１０％，故选择８号峰为参照峰进
行各饮片相对保留时间和相对峰面积的计算。
２．４　方法学考察
２．４．１　精密度试验　取同一供试品溶液，连续进样
５次，检测指纹图谱，计算各色谱峰的相对保留时间
和相对峰面积的相对标准偏差。结果各色谱峰相对
保留时间 ＲＳＤ在０％ ～０．３％，相对峰面积的 ＲＳＤ
在０．９％～４．７％，ＲＳＤ均小于５．０％，说明仪器性能
良好，符合有关要求。
２．４．２　重复性试验　取同一批样品５份，依法制备
成供试品溶液，检测指纹图谱，计算各色谱峰的相对
保留时间和相对峰面积的相对标准偏差，结果各色
谱峰的相对保留时间的ＲＳＤ在０％～０．４％，相对峰
面积的 ＲＳＤ在１．１％ ～４．８％，均小于５．０％，符合
有关要求。
２．４．３　稳定性试验　取同一供试品溶液，分别在
０，２，４，８，１２，２４ｈ检测指纹图谱，计算各色谱峰的
相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差。结果
各色谱峰相对保留时间的ＲＳＤ在０％～０．９％，相对
峰面积的 ＲＳＤ在１．１％ ～４．８％，均小于５．０％，表
明样品在２４ｈ内基本稳定，符合有关要求。
２．５　指纹图谱分析与评价
２．５．１　共有峰的标定　参考《中药注射剂指纹图
谱研究的技术要求（暂行）》，根据决明子不同饮片
ＨＰＬＣ色谱峰状况，选择 ＨＰＬＣ中可以用于反映决
明子不同饮片内在质量的共有峰来进行测定，生决
明子确定共有峰２３个，所选择的共有峰面积之和占
总峰面积的９０％以上，可以较为全面的反映样品的
内在质量。
炒品共有峰的测定均以生片为参照进行，确定
共有峰２４个；与生决明子相比，炒决明子缺少 １，
１０，１３，１６～１７号等５个色谱峰，但同时ａ～ｆ等６个
色谱峰出现或相对峰强度明显增强。
２．５．２　各饮片各饮片指纹图谱的测定、标准指纹图
谱的建立及相似度评价　根据建立的指纹图谱方
法，依法将生、炒各１０批次样品进样分析，根据测定
结果，以中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件进
行匹配分析后，按照中位数法建立各饮片的标准指
纹图谱（图１～３）。
图１　１０批次生决明子的指纹图谱
图２　１０批次炒决明子的指纹图谱
Ａ．生决明子；Ｂ．炒决明子；８．红镰霉素６Ｏβ龙胆二糖苷；９．１
去甲基橙钝叶决明素２ＯβＤ吡喃葡萄糖苷；１０．橙钝叶决明素
２ＯβＤ吡喃葡萄糖苷；１２．红镰霉素６ＯβＤ芹糖（１→６）Ｏ
βＤ葡萄糖苷；ａ．去甲基红镰霉素６ＯβＤ（６′Ｏ乙酰基）吡喃
葡萄糖苷；ｂ．钝叶素２ＯβＤ（６′Ｏ乙酰基）吡喃葡萄糖苷；１８．
大黄素１，６二甲醚；２０．钝叶决明素；２１．８甲氧基大黄酚；２２．大
黄素；２３．大黄酚；ｆ．大黄素甲醚，其他峰未标注。
图３　生、炒决明子标准指纹图谱
以８号峰为参照峰，计算各饮片的相对保留时
间和相对峰面积，结果共有峰的相对保留时间的
ＲＳＤ值均小于０．５％，相对峰面积ＲＳＤ差别较大，其
平均值和ＲＳＤ值见表２，３。
从１０个批次生、炒决明子指纹图谱的测定结果
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　　表２　生、炒决明子指纹图谱测定结果（相对峰面积）
峰号 平均值 ＲＳＤ／％ 峰号 平均值 ＲＳＤ／％
１ ００６７ ２１ １３ ０５７９ ３１１
２ ０１３９ １１５８ １４ ０１０１ ５１２
３ ０３３６ ５０８ １５ ０２２２ ４３２
４ ０２７４ ７１９ １６ ００６５ ２４８
５ １１９７ ５４３ １７ ００９７ ２５３
６ ０６７９ ６４ １８ ０１５４ ２７３
７ ０７８ ７３２ １９ ０１６３ ４２８
（Ｓ） １ ０ ２０ ００４１ ２１６
９ ０７６１ ３０５ ２１ ００７１ ３１４
１０ ００８４ ３０ ２２ ００４ ３４９
１１ ０１５４ １１２ ２３ ００７ ５０６
１２ ０１６４ ４３４
表３　炒决明子指纹图谱测定（相对峰面积）
峰号 平均值 ＲＳＤ／％ 峰号 平均值 ＲＳＤ／％
２ ０１２ １２２５ ａ ０５８９ ２５２
３ ０１９９ ６４ ｂ ０１３４ １７２
４ ０２１６ ５７４ ｃ ０１２８ ２５
５ ０９０２ ６５３ １８ ０４１７ ３３８
６ ０４４５ ２５３ １９ ００５４ ２９７
７ ０７７３ ７１２ ２０ ０１ ２９６
（Ｓ） １ ０ ２１ ０１６２ ３６
９ ０７８７ ３７４ ２２ ０１６８ ４３７
１１ ０１２４ ４１ ｄ １１２４ ３５１
１２ ０２５６ ３５８ ｅ ０１７８ ３１１
１４ ０１２２ ４７７ ２３ １３３４ ６６５
１５ ０２５３ ２６４ ｆ ０３６６ ４０２
来看，各批次的色谱图基本一致，分别指定共有峰
２３，２４个。各样品的相对峰面积差异较大，ＲＳＤ分
别为６．４％ ～１１５．８％、１７．２％ ～１２２．５％。除了广
西产决明子外，生决明子标准指纹图谱与１０批样品
的相似度为０．９３１以上；炒决明子标准指纹图谱与
１０批样品的相似度为０．８１８以上，说明得到的标准
指纹图谱具有代表性，可反映生、炒决明子饮片的指
纹特征。因此规定生决明子样品指纹图谱与其标准
指纹图谱相对照，应出现１～２３号等２３个共有峰
（图２）。炒决明子样品指纹图谱与其标准指纹图谱
相对照，应出现２～１２，１３～１５，１８～２３以及 ａ～ｆ等
２４个共有峰（图３）。
决明子饮片指纹图谱中主要色谱峰的指认，根
据建立的指纹图谱方法，依次各对照品进行测定，并
根据保留时间对标准指纹图谱的主要色谱峰进行指
认（图３）。
３　讨论
通过对样品的制备方法、检测波长考察，对决明
子不同饮片的测定结果表明，在４３０ｎｍ下，能够得
到决明子不同饮片中大部分化学成分的信息，且基
线平稳、分离度较好，故选择４３０ｎｍ为检测波长；甲
醇、乙醇提取的色谱峰相似，但以甲醇提取的峰面积
大，故选用甲醇作为提取溶剂。
参考文献［３４］并进行考察比较，发现乙腈－０．
１％磷酸水溶液系统的流动相进行梯度洗脱分离效
果较好。对决明子的 ＨＰＬＣ指纹图谱方法的精密
度、稳定性和重现性进行分析，结果表明此法稳定、
可靠、重现性好，符合指纹图谱分析测试的要求。通
过生、炒决明子饮片各１０批次的测定分析，建立了
生、炒决明子标准指纹图谱，并对生、炒饮片进行了
比较分析，为决明子饮片的质量控制研究提供了科
学依据。
由于产地之间存在一定的差异，使得各饮片间
相对峰面积变化幅度较大。但不同产地生、炒决明
子饮片指纹图谱中主要色谱峰的整体图貌一致。炒
决明子除了产地因素外，可能由于炮制过程不完全
一致的影响，使得标准指纹图谱与１０批样品的相似
度较低。生、炒决明子的 ＨＰＬＣ指纹图谱有明显变
化。炒制后，色谱图上０～３８ｍｉｎ主要表现为部分
色谱峰的缺失或峰面积的明显减小。５６ｍｉｎ以后则
表现为新色谱峰的出现或原色谱峰峰面积的增加。
经ＨＰＬＣ色谱峰指认，０～３８ｍｉｎ的多为苷类成分，
５６ｍｉｎ以后的多为游离类成分。由此推测，炒制使
得决明子中苷类成分有向游离苷元转化的趋势。
迄今为止，对决明子炒制的研究主要进行了炮
制工艺的研究对比［５］，以不同指标测定不同炮制品
的总蒽醌或水解后的蒽醌类成分的含量［６８］。本研
究较全面的揭示了决明子炒制前后其成分组成及其
量比关系的变化，为揭示决明子炒制的科学内涵奠
定了基础。
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ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｎｔｈｅＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆＣａｓｓｉａｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ
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第３４卷第６期
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