全 文 ：ＨＰＬＣ测定新疆柴胡属４种植物中柴胡皂苷 ａ，ｃ，ｄ的含量
杨志业１，刘书芬２，晁 志３，潘胜利４
（１．广州市药品检验所，广东 广州 ５１０１６０；２复旦大学 生物医学研究院，上海 ２０００３２；
３．南方医科大学，广州 ５１０５１５；４．复旦大学 药学院，上海 ２０００３２）
［收稿日期］ ２００７０５０９
［基金项目］ 广州市科技计划（２００２ｊ１ｃ０１６１）
［通讯作者］ 潘胜利，Ｔｅｌ：（０２１）５４２３７４５４，Ｅｍａｉｌ：ｓｌｐａｎ＠
ｓｈｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
柴胡是我国常用中药，《中国药典》规定正品柴
胡为伞形科植物柴胡 ＢｕｐｌｅｕｒｕｍＣｈｉｎｅｓｅＤＣ或狭叶
柴胡 Ｂ．ｓｃｏｒｚｏｎｅｒｉｆｏｌｉｕｍＷｉｌｄ的干燥根［１］，其主要
成分为柴胡皂苷、挥发油、木脂素及多糖类等，因而
相关产品也在不断地开发、投产和扩大生产，致使柴
胡药材的使用量逐年增加。由于中国的药用柴胡绝
大多数为野生品，所以扩大柴胡的野生资源和变野
生为家种已到了非常迫切的地步。近年来，关于测
定柴胡皂苷的报道很多，但极少涉及新疆地区的品
种，为此本课题组特地到新疆维吾尔自治区调查当
地柴胡的使用情况，结果发现除了已知的３种柴胡
属植物外，还鉴定出了１个新种，喀纳斯柴胡Ｂ．ｋａ
ｎａｓｉＳ．Ｌ．ＰａｎｅｔＺｈＣｈａｏｓｐ．ｎｏｖ。本研究运用
ＨＰＬＣ同时对新疆维吾尔自治区的４种柴胡属植物
的柴胡皂苷ａ，ｃ，ｄ（简记为ｓｓａ，ｓｓｃ，ｓｓｄ）进行了含量
测定，为其日后进一步的开发和应用提供依据。
１ 仪器与试药
高效液相色谱仪（ＬＣ－１０ＡＴｖｐ，ＳＰＤ－１０ＡＴｖｐ
紫外检测器；日本岛津公司）；离心机（８０－２，上海
精科实业有限公司）。
甲醇、乙腈均为色谱纯，氨水为分析纯，水为本
实验室自制双蒸水。所有试剂使用前均过０２０μｍ
微孔滤膜。柴胡皂苷ａ，ｃ，ｄ对照品均由上海医药工
业研究院提供。４种柴胡属原植物采自新疆地区，
恒温干燥备用，均由复旦大学药学院潘胜利教授鉴
定，其中喀纳斯柴胡Ｂ．ｋａｎａｓｉ为拟新种。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 日本岛津 ＳｈｉｍａｄｚｕＣ１８色谱柱
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），Ｄｉｋｍａ６１０１保护柱；流
动相，乙腈水，流速 １ｍＬ·ｍｉｎ－１，梯度洗脱 ０～５
ｍｉｎ，乙腈比例 ３０％；５～１０ｍｉｎ，乙腈比例 ３０％ ～
４０％；１０～２０ｍｉｎ，乙腈比例４０％ ～６０％；柱温为室
温，检测波长２１０ｎｍ；进样量１０μＬ。该色谱条件下
对照品色谱图见图１。
图１ 柴胡ＨＰＬＣ图
Ａ．对照品；Ｂ．金黄柴胡；１．ｓｓｃ；２．ｓｓａ；３．ｓｓｄ
２．２ 对照品溶液及标准曲线制备 精密称定柴胡皂
苷ａ，ｃ，ｄ对照品适量，用甲醇溶解，定容，制成 ｓｓａ，
ｓｓｃ，ｓｓｄ１０ｍｇ·ｍＬ－１的混合对照品溶液。将混合
对照品溶液依次稀释配制成００１，００２，００５，０１，
０５，１０ｍｇ·ｍＬ－１的混合溶液。分别精密吸取１０
μＬ注入高效液相色谱仪中，按２．１项下色谱条件测
定峰面积。由峰面积Ｙ对进样量（Ｘ，μｇ）线性回归，
得柴胡皂苷ａ，ｃ，ｄ的回归方程分别为ｓｓａＹ＝３７５×
１０５Ｘ＋４３１×１０４（ｒ＝０９９９８）；ｓｓｃＹ＝３０８×１０５Ｘ－
９２７×１０３（ｒ＝０９９９９）；ｓｓｄＹ＝３７８×１０５Ｘ＋４７２×
１０２（ｒ＝１００００）。ｓｓａ在 ０４２～１０４μｇ，ｓｓｃ在
０１２～９９μｇ，ｓｓｄ在０３５～１３９μｇ线性关系良好。
２．３ 供试品溶液制备 取植物材料根部，用研钵研
磨成粗粉，于烘箱中（６０℃）干燥至恒重。称取粗粉
约０２ｇ，精密称定，置１０ｍＬ试管中，加５％氨水甲
醇溶液１０ｍＬ，浸泡０５ｈ，超声提取２０ｍｉｎ，离心
（３０００ｒ·ｍｉｎ－１）５ｍｉｎ，取上清液。如此重复提取
操作３次后，合并上清液与于旋转蒸发仪浓缩至干，
再用甲醇溶解，并转移至ｌ０ｍＬ量瓶中，定容，摇匀，
用０４５μｍ微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
２．４ 精密度实验 精密吸取质量浓度为１０ｍｇ·
·０６４·
第３３卷第４期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８
ｍＬ－１的对照品溶液１０μＬ，按上述色谱条件重复进
样６次，柴胡皂苷ａ，ｃ，ｄＲＳＤ分别为１６％，０６％，
１０％（ｎ＝６），表明仪器精密度较好。
２．５ 稳定性试验 取同一份供试品溶液，１，４，８，
１６，２４ｈ后按上述色谱条件进样分析，计算得柴胡
皂苷ａ，ｃ，ｄ的ＲＳＤ分别为 ４０％，４４０％，４５％，表
明供试品溶液在２４ｈ内稳定。
２．６ 重复性试验 取同一批样品按２．３项下供试
品溶液制备方法平行制备５份，按２．１色谱条件测
定含量，ＲＳＤ分别为４３％，３２％，１８％（ｎ＝５）。
２．７ 加样回收率试验 取同一批样品称取９份，每
份约 ０１ｇ，精密称定，分高、中、低３个浓度进行加
样回收（每一浓度３份），按２．３项方法制备供试品
溶液，再按２．１项下条件测定，计算结果见表１。
表１ 柴胡皂苷ａ，ｃ，ｄ加样回收率
指标
高浓度
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
平均回收率
／％
ＲＳＤ
／％
中浓度
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
平均回收率
／％
ＲＳＤ
／％
低浓度
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
平均回收率
／％
ＲＳＤ
／％
ｓｓａ １６８ １８７２ １０６３ ４１０ １７８ １４５６ １０４０ ４７０ １７４８ １０４００ １０１４ ４５０
１７５ １８７２ １７８ １４５６ １６７８ １０４００
１９４ １８７２ １７６ １４５６ １８１８ １０４００
ｓｓｃ ０４１ １４８５ ０９６１ ２００ ０３４ ０３９６ ０９６９ １７０ ０２９３ ０２３７６ １０４２ ４９０
０３６ １４８５ ０３３ ０３９６ ０３５７ ０２３７６
０３１ １４８５ ０３４ ０３９６ ０４２５ ０２３７６
ｓｓｄ ２０２ ３１９７ １００７ ３６０ ２０４ １８０７ １０９５ ４７０ ２１１６ １１８１５ ０９４７ ４６０
１９４ ３１９７ ２０５ １８０７ ２０６６ １１８１５
１７８ ３１９７ ２０５ １８０７ ２０３２ １１８１５
２．８ 样品测定 取各供试品适量，按２．３项下方法
和２．１项下色谱条件对新疆地区四种柴胡属植物样
品进行含量测定，每份样品平行测定２份，分别计算
其质量分数，见表２。
表２ 新疆地区四种柴胡属植物柴胡皂苷ａ，ｃ，ｄ的质量分数 ％
种名 采集地点 ｓｓａ ｓｓｃ ｓｓｄ ｓｓａ＋ｓｓｃ＋ｓｓｄ ｓｓａ＋ｓｓｄ
金黄柴胡 新疆布尔津县禾木乡 ０１５ ０２４ ０５７ ０９６ ０７２
天山柴胡 新疆特克斯县四乡科桑松树头子 ００５ ０１０ ２５５ ２７０ ２６０
阿尔泰柴胡 新疆布尔津县禾木乡 ０５０ ０１０ ０５９ １１９ １０９
喀纳斯柴胡 新疆卡喀纳斯 ０００ ０１３ ０００ ０１３ ０００
北柴胡［４］ 浙江临安 ０８７ ０３３ ０６４ １８４ １５１
狭叶柴胡［４］ 河北承德 ０４１ ０１５ ０３５ ０９１ ０７６
３ 讨论
本实验的ＨＰＬＣ方法参考了文献［３］而加以改
进，将ｓｓａ和前面相邻的小峰完全分开，分离度达到
１５，但由于柴胡皂苷苷元中１３位与２８位之间的环
氧醚键相对不是很稳定，比较容易开环而影响吸收
度，致使稳定性试验中的ＲＳＤ波动较大。本方法准
确可靠，适合同时对柴胡皂苷 ａ，ｃ，ｄ进行分析。从
实验的结果看，金黄柴胡、天山柴胡和阿尔泰柴胡３
种柴胡皂苷的总含量都比拟新种喀纳斯柴胡的总含
量高，而天山柴胡的 ｓｓｄ的含量是这４种柴胡中最
高的，达到了２５５％，拟新种喀纳斯柴胡基本上没
有检测ｓｓａ和ｓｓｄ。与《中国药典》收载的北柴胡和
狭叶柴胡相比，天山柴胡的 ｓｓｄ含量远远高于北柴
胡和狭叶柴胡，而金黄柴胡、阿尔泰柴胡的 ｓｓｄ含量
也与北柴胡与狭叶柴胡的相当。这为新疆品种的进
一步开发应用提供了依据。
对于拟新种喀纳斯柴胡的含量测定，虽然其３
种皂苷的含量极低，但是 ＨＰＬＣ谱１８ｍｉｎ以后还有
较明显的峰出现，这是其他３种所没有的。至于该
成分究竟是何种化合物，还有待于进一步研究。
［参考文献］
［１］ 中国药典．一部．２００５：１９８．
［２］ ＰａｎＳＬ．ＢｕｐｌｅｕｒｕｍＳｐｅｃｉｅｓ：ＳｃｉｅｎｃｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌＡｐ
ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｍ］．ＮｅｗＹｏｒｋ：ＵＳＡＣＲＣＰｒｅｓｓＴａｙｌｏｃ＆Ｆｒａｎｃｉｓ
Ｇｒｏｕｐ．２００６：４．
［３］ 潘胜利，李 颖，戴克敏，等．云南省柴胡属药用植物的分类及
其化学成分的研究［Ｊ］．上海第一医学院学报，１９８４，１１（１）：１．
［４］ 林东昊，茅仁刚，王智华，等．２３种国产柴胡属植物中柴胡皂苷ａ、
ｃ、ｄ含量的ＲＰＨＰＬＣ测定［Ｊ］．药物分析杂志，２００４，２４（５）：４７９．
［责任编辑 王亚君］
·１６４·
第３３卷第４期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８