全 文 ：指纹图谱在中药６０Ｃｏγ射线辐照灭菌研究中的应用
韦建荣，李 劲，董 明
（云南白药集团股份有限公司，云南 昆明 ６５０１１８）
［收稿日期］ ２００７０５３０
［通讯作者］ 韦建荣，Ｔｅｌ：（０８７８）８８２２１１６，Ｅｍａｉｌ：ｊｒｗｅｉ＠１２６．
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卫生学指标是衡量药品质量的重要因素，涉及
到药品生产的每一个环节。现行生产实践中常用的
灭菌方法有热压灭菌法、微波灭菌法、６０Ｃｏγ射线辐
照灭菌法等。其中６０Ｃｏγ射线辐照灭菌法由于方
便、高效等特点而逐步得到关注和重视。用于食品、
医药产品的辐射灭菌，通常采用６０Ｃｏ辐照源发射的
γ射线，频率为３×１０１８～３×１０２１Ｈｚ，其能量大于分
子键能，故可使分子电离和断键而杀菌［１］。灭菌的
目的是免受药品被细菌、霉菌、大肠杆菌等微生物的
污染，保证药品的安全与有效，灭菌的效果取决于所
需杀灭的菌种及数量、中药的剂型、辐照剂量等因
素。辐照剂量大，灭菌效果好，但辐照剂量过大，对
药品的某些成分可能会造成影响甚至破坏，改变中
药的物质成分群的构成，从而可能导致药品安全、有
效问题的产生。因此将辐照灭菌的效果和导致物质
结构的改变这一矛盾体进行综合考虑，以确定最佳
辐照剂量至关重要。有众多的文献报道６０Ｃｏγ射线
辐照灭菌对中药成分的影响［２４］，普遍只针对个别典
型成分进行考察，由于中药成分的复杂性，通过个别
成分的考察很难说明问题，采用指纹图谱技术，以重
楼提取物为示例，对中药辐射灭菌前后多成分的变化
进行系统比较研究，以期更全面、客观地进行评价。
１ 仪器与试药
ＷＡＴＥＲＳ５１０泵，７１７自动进样器，９９６二极管
阵列检测器，Ｍｉｌｅｎｎｉｕｍ２０１０色谱管理系统；甲醇为
分析纯，乙腈为色谱纯；重楼提取物为自制。
２ 方法与结果
２．１ 供试品溶液的制备 取重楼提取物粉末约
２０ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇５０
ｍＬ，称定质量，超声处理（功率２５０Ｗ，频率２５ｋＨｚ）
１ｈ，称量，用甲醇补足提取过程中损失的质量，充分
振摇，滤过，即得。
２．２ 检测方法 参照文献［５，６］测定方法，色谱条
件为色谱柱 ＳｙｍｍｅｔｒｙＣ１８分析柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ）；流动相乙腈水（４０∶６０）；检测波长２０３
ｎｍ；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温４０℃。
２．３ 方法学考察 稳定性试验：取同一供试品溶
液，分别放置０，３，６，１２，２４ｈ检测指纹图谱。精密
度试验：取同一供试品溶液，连续进样５次，检测指
纹图谱。重复性试验：取同一供试品５份，精密称
定，按供试品溶液的制备方法分别制备供试品溶液，
检测指纹图谱。结果表明，各色谱峰的相对保留时
间和相对峰面积比值基本没有明显变化，ＲＳＤ均在
３％以内，符合指纹图谱要求。
２．４ 重楼提取物指纹图谱 按上述方法检测同一
批重楼提取物不同辐照剂量下的指纹图谱，典型指
纹图谱峰见图１。
图１ 重楼提取物指纹图谱
２．５ 测定结果 将同一重楼提取物，分成均匀的４
份，给予０，６，８，１０ｋＧｙ等不同剂量的辐照，然后进
行供试品溶液的制备及指纹图谱的测定，每个剂量
水平下重复６次，以指纹图谱中的１２个成分峰的单
位取样量峰面积为指标即所代表的含量进行计算，
分别与未进行辐照的样品对应的峰进行比较，采用ｔ
检验进行分析，以判别各个成分含量的变化情况，结
果见表１，２。
３ 讨论
色谱条件的选择 重楼提取物是以重楼为原料
经过提取、分离制成，可作为宫血宁胶囊等的原料
药，其中皂苷类为主要有效成分，考察以该类成分为
主要目标，由于该类成分无紫外吸收峰，故选择紫外
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第３３卷第５期
２００８年３月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３３，Ｉｓｓｕｅ ５
Ｍａｒｃｈ，２００８
表１ 单位供试品量的峰面积测定结果
峰号
单位供试品量的峰面积
０ｋＧｙ ６ｋＧｙ ８ｋＧｙ １０ｋＧｙ
１ １５８×１０６ １６３×１０６ １４４×１０６ １４５×１０６
２ ２９９×１０５ ２６３×１０５ １６０×１０５ １８３×１０５
３ ４０８×１０５ ４０３×１０５ ３４０×１０５ ３３６×１０５
４ ６３３×１０５ ６２５×１０５ ５３８×１０５ ５３７×１０５
５ １３６×１０６ １３５×１０６ １２１×１０６ １２１×１０６
６ １９８×１０６ １９９×１０６ １７４×１０６ １７２×１０６
７ ２２７×１０５ ２２７×１０５ １９８×１０５ １９５×１０５
８ ４１９×１０５ ４１３×１０５ ３６２×１０５ ３６０×１０５
９ ２９２×１０６ ２９１×１０６ ２５９×１０６ ２５５×１０６
１０ ３７４×１０５ ３７２×１０５ ３２９×１０５ ３２３×１０５
１１ ３０５×１０６ ３０２×１０５ ２６９×１０５ ２６６×１０５
１２ ２４９×１０６ ２４７×１０６ ２２０×１０６ ２１８×１０６
表２ ｔ检验显著性概率值
峰号 ６ｋＧｙ ８ｋＧｙ １０ｋＧｙ
１ ０１１６ ＜００１ ＜００１
２ ０５２８ ０００８ ００１５
３ ００７１ ＜００１ ＜００１
４ ０１３５ ＜００１ ＜００１
５ ０１４３ ＜００１ ＜００１
６ ０８６２ ＜００１ ＜００１
７ ０９２３ ＜００１ ＜００１
８ ０１５９ ＜００１ ＜００１
９ ０４４２ ＜００１ ＜００１
１０ ０４９０ ＜００１ ＜００１
１１ ００９６ ＜００１ ＜００１
１２ ０２２５ ＜００１ ＜００１
吸收末端２０３ｎｍ作为检测波长。在试验中也曾试
图采用梯度洗脱方法，由于灵敏度低、干扰大、重复
性差，故选用等梯度进行洗脱，结果比较满意。
由于所分离的１２个成分多数为未知成分或对
照品不易获得，故采用单位取样量峰面积调整在一
个水平上，以此来代表成分的含量进行比较。所设
定的３个辐照剂量水平均达到灭菌要求，但从表２
可以看出，剂量为６ｋＧｙ时，各个成分均没有明显变
化，而较大的２个辐照剂量则使所考察的１２个成分
明显降低，在指纹图谱上没有发现新的成分出现，其
变化情况有待进一步研究。
以未辐照样品的指纹图谱作为参照，不同辐照
剂量下样品得到的指纹图谱分别与未辐照样品的指
纹图谱进行相似度评价，采用夹角余弦法或相关系
数法计算相似度，相似度均在０９９９以上，可见该类
研究如果采用相似度进行评价变化情况，很难得到
合理的结论，而采用两组ｔ检验法进行评价，精度更
高。
本方法稳定、可靠、重复性好，所确定的方法思
路可用于中药提取、分离工艺改进，以及中药材、中
成药制剂６０Ｃｏγ射线辐照灭菌深度研究中。在成分
较为复杂的情况下，可采用多张指纹图谱来考察不
同类型的成分的变化情况甚至追踪失、得的变化过
程，以更全面、客观地进行系统评价。当然，在成分
变化研究的基础上，为了更好地保证药品的安全、有
效，尚需结合药效研究和毒理研究来综合判定辐照
的可行性。在重楼提取物的系统研究中，在不同剂
量下，药效研究和毒理研究均未发现明显的变化，综
合认为在辐照剂量为６ｋＧｙ时是完全可行的。
［参考文献］
［１］ 哈 斯．中成药钴６０灭菌试验总结［Ｊ］．内蒙古农业科技，
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［６］ 韦建荣．ＲＰＨＰＬＣ法测定重楼中甾体皂甙的含量［Ｊ］．药学学
报，１９９８，３３（６）：４６５．
［责任编辑 鲍 雷
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第３３卷第５期
２００８年３月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３３，Ｉｓｓｕｅ ５
Ｍａｒｃｈ，２００８