全 文 ：毛细管区带电泳法测定麻黄及麻杏石甘汤中
麻黄碱和伪麻黄碱的含量
景浩然，郭怀忠，王子君，王　敏，张　斌
（河北大学 药学院 河北省药物质量研究重点实验室，河北 保定 ０７１００２）
［摘要］　目的：采用毛细管区带电泳法测定麻黄及麻杏石甘汤中麻黄碱和伪麻黄碱。方法：电泳缓冲液为５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１
硼砂／２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１苏氨酸缓冲溶液（１ｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＯＨ溶液调ｐＨ至９２７）；紫外检测波长２１０ｎｍ，分离电压１５ｋＶ；以苯巴比
妥为内标物，采用压力进样（１０ｃｍ×２０ｓ），柱温 室温。结果：麻黄碱与伪麻黄碱的线性范围分别为２１３～２１３，８４～８４ｍｇ·
Ｌ－１，相关系数分别为０９９９６，０９９９５，检测限分别为１４５，１４８ｍｇ·Ｌ－１，定量限分别为４８１，４９３ｍｇ·Ｌ－１。将该法用于麻
黄中麻黄碱与伪麻黄碱的含量测定，平均回收率分别为９７５，９８６％。结论：本法操作简便、快速、经济、灵敏度高，麻黄及麻
杏石甘汤中麻黄碱及伪麻黄碱可获得满意的分离，可作为麻黄和麻杏石甘汤中麻黄碱和伪麻黄碱的含量测定方法。
［关键词］　高效毛细管电泳法；麻黄；麻杏石甘汤；麻黄碱；伪麻黄碱
［收稿日期］　２００８１０２０
［通信作者］　郭怀忠，副教授，主要从事中药分析方面的研究，
Ｔｅｌ：１３４６３６９５２３７，Ｅｍａｉｌ：ｇｈｕａｉｚｈ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
［作者简介］　景浩然，Ｔｅｌ：１３８３１２２３５６１，Ｅｍａｉｌ：ｈａｏｒａｎｊｉｎｇ１９８０＠ｙａ
ｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
　　麻黄为麻黄科植物草麻黄ＥｐｈｅｄｒａｓｉｎｉｃａＳｔａｐｆ
的干燥草质茎，始载于《神农本草经》。临床上用于
治疗呼吸道疾患，具有发汗散寒、宣肺平喘、利水消
肿的功效［１］。麻杏石甘汤出自《伤寒论》，由麻黄、
杏仁、生石膏和甘草４味中药组成，具有解热、抗炎、
镇咳、祛痰等药理作用，主治肺热炽盛的肺炎和热邪
犯肺的哮喘，临床应用广泛［２］，其中麻黄是本方的
主药，主含麻黄碱和伪麻黄碱，２００５年版《中国药
典》的麻黄药材的质控标准中采用测定麻黄碱的含
量来控制麻黄药材的质量。麻黄碱与伪麻黄碱是一
对理化性质极其相似的差向异构体，一般条件下不
易分离，目前同时测定麻黄药材及其制剂中的麻黄
碱和伪麻黄碱大多采用薄层扫描法［３］和高效液相
色谱法［４６］，但以上两种方法普遍具有分离效果差或
分析时间长的缺点。毛细管电泳（ｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏ
ｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＣＥ）作为一种高效分离分析方法，具有分
析速度快、分离效率高、运行成本低等优点，目前已
在药物质量控制、手性拆分及体内药物分析等方面
获得了成功的应用［７］。本研究采用毛细管区带电
泳法（ＣＺＥ），以苯巴比妥为内标，分离了麻黄碱和伪
麻黄碱，建立了麻黄药材的测定和质量评价方法，为
麻杏石甘汤中麻黄碱类成分含量测定提供了参考。
１　仪器与试药
ＣＬ１０２０高效毛细管电泳仪（北京彩陆科学仪器
有限公司）；未涂层熔融石英毛细管柱（内径 ５０
μｍ，总长６０ｃｍ，有效长度５０ｃｍ，河北永年锐沣色
谱器件有限公司）；ＨＷ２０００色谱工作站；ｐＨＳ３Ｃ型
酸度计（上海理达仪器厂）；分析天平（ＡＧ２０４，瑞士
ＭＥＴＴＬＥＲＴＯＬＥＤＯ）；超声波清洗仪（ＤＳ２０６０，天津
市东康科技有限公司）。
甲醇（色谱纯及分析纯），其他所用氯仿、氨水、
硼砂和氢氧化钠等均为分析纯；苏氨酸和苯巴比妥
（药用）、盐酸麻黄碱对照品（中国药品生物制品检
定所，批号 １７１２４２２００４０４）、盐酸伪麻黄碱对照品
（国家麻醉品实验室，批号 １２３７２００１０３）；麻黄、甘
草、杏仁、生石膏（均经保定市药品检验所副主任药
师张建英鉴定合格，其中麻黄为草麻黄 Ｅｓｉｎｉｃａ）
（市售）；重蒸馏水。
２　方法与结果
２．１　电泳条件
新毛细管在使用前依次用 １ｍｏｌ·Ｌ－１，０１ｍｏｌ
·Ｌ－１ＮａＯＨ溶液、水各冲洗２０ｍｉｎ，再用分离缓冲
溶液冲洗１０ｍｉｎ。每天使用前依次用０１ｍｏｌ·Ｌ－１
ＮａＯＨ溶液、水、分离缓冲溶液冲洗１０ｍｉｎ，２次测定
之间用分离缓冲溶液冲洗５ｍｉｎ，样品采用重力进
样，进样高度１０ｃｍ，进样时间２０ｍｉｎ，电压１５ｋＶ，
紫外检测波长２１０ｎｍ（图１）。
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Ａ．溶剂甲醇电泳谱图；Ｂ．对照品电泳谱图；Ｃ．麻黄供试液电泳谱图；Ｄ．麻杏石甘汤供试液电泳谱图；
１．麻黄碱；２．伪麻黄碱；３．苯巴比妥。
图１　对照品与样品电泳谱图
２．２　缓冲溶液的配制
称取硼砂０９５ｇ至５０ｍＬ水中，搅拌溶解，称
取苏氨酸０１１９ｇ，加上述溶液１２５ｍＬ溶解并稀释
至５０ｍＬ，用１ｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＯＨ溶液调 ｐＨ至９２７，
即得５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１硼砂／２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１苏氨酸缓冲
溶液。
２．３　对照品溶液的制备
盐酸麻黄碱对照品溶液：精密称取盐酸麻黄碱
对照品００２１３ｇ，置５０ｍＬ量瓶中，加甲醇３５ｍＬ，
振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀。
盐酸伪麻黄碱对照品溶液：精密称取盐酸伪麻
黄碱对照品００２１８ｇ，置１００ｍＬ量瓶中，加甲醇８０
ｍＬ，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀。
苯巴比妥（内标）溶液：称取苯巴比妥原料药
００５０８ｇ，置５０ｍＬ量瓶中，加入甲醇３５ｍＬ，振摇
使溶解，并稀释至刻度，摇匀。
２．４　供试品溶液的制备
２．４．１　麻黄供试品溶液　精密称取麻黄适量（约
０１ｇ），研细，置圆底烧瓶中，加入２０ｍＬ氯仿、４ｍＬ
氨水，精密称定，浸渍过夜，再精密称重，用氯仿补足
减失质量，精密加入４ｍＬ甲醇，加热回流２ｈ，放冷，
摇匀滤过，残渣用氯仿洗３次，每次３ｍＬ，合并氯仿
液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至１０ｍＬ量瓶中，
精密加入内标溶液１ｍＬ，用甲醇稀释至刻度，摇匀
滤过，取续滤液作为供试品溶液。
２．４．２　麻杏石甘汤供试品溶液　按处方称取药材
麻黄１ｇ、苦杏仁１５ｇ、甘草１ｇ和生石膏４ｇ，加１０
倍量水常温浸渍３０ｍｉｎ，煎煮，保持微沸３０ｍｉｎ，趁
热过滤，滤渣加 ７倍量水继续煎煮，保持微沸 ２０
ｍｉｎ，趁热滤过，合并２次滤液，药渣水洗３次［８］，与
滤液合并，旋转蒸干，残渣加入２０ｍＬ氯仿、４ｍＬ氨
水，称重，浸渍过夜，再称重，用氯仿补足减失质量，
精密加入４ｍＬ甲醇，加热回流２ｈ，放冷，摇匀滤过，
残渣用氯仿洗３次，每次３ｍＬ，合并氯仿液，蒸干，
残渣用甲醇溶解并转移至１０ｍＬ量瓶中，精密加入
内标溶液１ｍＬ，加甲醇至刻度，摇匀滤过，取续滤液
作为麻杏石甘汤供试品溶液。
２．５　线性范围、检测限及定量限
精密量取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品溶
液及内标溶液适量，置１０ｍＬ量瓶中，加甲醇制成系
列浓度的标准溶液，在上述所选电泳条件下进行测
定，以对照品溶液的浓度为横坐标，相应的峰面积比
值ＡＩ／ＡＳ（ＡＩ代表对照品的峰面积，ＡＳ代表内标物的
峰面积）为纵坐标，进行线性回归。
结果在２１３～２１３，８４～８４ｍｇ·Ｌ－１，麻黄碱
和伪麻黄碱溶液的浓度与峰面积比值呈良好的线性
关系，回归方程分别为 Ｙ＝０００４６Ｘ＋０００９９（ｒ＝
０９９９６），Ｙ＝０００５３Ｘ＋０００３１（ｒ＝０９９９５）。
以３倍信噪比确定麻黄碱和伪麻黄碱的检测限
分别为１４５，１４８ｍｇ·Ｌ－１，以１０倍信噪比确定麻
黄碱和伪麻黄碱的定量限分别为４８１，４９３ｍｇ·
Ｌ－１。
２．６　日内精密度试验
分别精密量取２．３项下盐酸麻黄碱及盐酸伪麻
黄碱对照品溶液 ２，３ｍＬ与苯巴比妥对照品溶液
０５ｍＬ置１０ｍＬ量瓶中，用甲醇稀释至刻度，重复
进样５次。测得麻黄碱与内标峰面积比值及伪麻黄
碱与内标峰面积比值的ＲＳＤ分别为０９％，１５％。
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２．７　日间精密度试验
连续５ｄ重复进样２．６项下对照品溶液，测得
麻黄碱与内标峰面积比值的 ＲＳＤ１２％；伪麻黄碱
与内标峰面积比值的ＲＳＤ１６％。
２．８　重复性试验和稳定性试验
取同１批号麻黄药材，照２．４．１项下方法制备
５份供试品溶液，分别进样，记录峰面积，结果麻黄
碱与内标峰面积比值及伪麻黄碱与内标峰面积比值
基本不变，ＲＳＤ分别为０９％，１６％，表明本方法的
重复性较好。
取上述制备的１份供试品溶液分别于０，２，４，
６，８，１２ｈ进样，记录峰面积，结果麻黄碱和伪麻黄
碱峰面积比值基本不变，ＲＳＤ分别为 １５％和
１３％，表明供试品溶液至少在１２ｈ内稳定。
２．９　回收率的测定
麻黄碱及伪麻黄碱的回收率分别为 ９５７％ ～
９７９％，９５２％ ～１０４８％，ＲＳＤ分别为 １６％，
４１％。结果表明方法的准确度良好。
２．１０　含量测定
麻杏石甘汤的色谱图中，在麻黄碱、伪麻黄碱及
内标物的出峰位置，未见杂质峰干扰，因此在麻黄药
材方法学研究的基础上，对不同来源的２批麻黄药
材及麻杏石甘汤中的麻黄碱及伪麻黄碱，依法测定
含量。结果见表１。
表１　麻黄及麻杏石甘汤中主成分测定
样品
麻黄碱
／ｍｇ·ｇ－１
ＲＳＤ
／％
伪麻黄碱
／ｍｇ·ｇ－１
ＲＳＤ
／％
麻黄　 ６６８９ ０４ ２５６２ ２９
　 ４９８１ １０ １７３５ ０６
麻杏石 ０８７４ ２２ ０２７９ ０４
甘汤　 ０６１３ ３５ ０２１９ ３２
３　讨论
３．１　背景缓冲溶液 ｐＨ对分离度的影响
缓冲液ｐＨ对麻黄碱和伪麻黄碱的分离效果影
响很大，选取 ｐＨ３０，７０，１００，１２０进行测定，发
现随着ｐＨ的增加，两峰分离度先增大后减小，迁移
时间逐渐增加，在 ｐＨ１０左右分离度最大。进而在
ｐＨ１０附近选取若干个点进行 ｐＨ筛选，发现在 ｐＨ
９２～９３，峰形较好，分离度最佳。分析其原因，主
要是 ｐＨ过低时，麻黄碱（Ｐｋａ９５８）和伪麻黄碱
（Ｐｋａ９７４）在酸性条件下不能很好地游离出来，故
分离效果较差，ｐＨ过高，峰形变差，发现分离效果也
不好。本实验选择ｐＨ９２７作为缓冲液的ｐＨ。
３．２　缓冲溶液组成的影响
由于麻黄药材成分复杂，干扰主成分测定的杂
质较多，一般条件下不易分离，目前分离麻黄碱和
伪麻黄碱常用的缓冲系统有异亮氨酸［９］、缬氨
酸［１０］，作者在此基础上还尝试了组氨酸、甲硫氨
酸、苏氨酸、盐酸赖氨酸等９种水溶性氨基酸缓冲
系统，结果发现苏氨酸较其他几种氨基酸分离效果
更好。作者考虑将氨基酸加入缓冲液中增加分离
度的主要原因为此９种氨基酸均为Ｌ氨基酸，对麻
黄碱和伪麻黄碱的选择性程度不同，均可以增加２
个生物碱的分离度。在此９种氨基酸中苏氨酸结
构较简单，相对分子质量较小，相同质量的苏氨酸
摩尔数高，对分离度的影响更明显。通过对加入不
同浓度苏氨酸的考察，发现增大浓度能够改善分
离，但是由于检测波长为２１０ｎｍ，浓度过高会增加
背景吸收，降低灵敏度，故最终选用苏氨酸为 ２０
ｍｍｏｌ·Ｌ－１。
３．３　内标的选择
由于毛细管电泳仪无定量环进样，绝对进样量
不容易控制，故选用内标法测定。在选择内标物时，
作者选择了在２１０ｎｍ波长处有较大吸收的物质，如
硫脲、水杨酸、苯巴比妥、赖氨酸、精氨酸、组氨酸等，
鉴于供试液成分复杂，最终选取其他成分无干扰并
与待测组分峰迁移时间最接近的苯巴比妥（迁移时
间为５４ｍｉｎ）作为内标物。
３．４　麻黄供试液提取方法选择
本实验曾尝试如下提取方法：酸水超声提取
法，即以酸水（用盐酸调 ｐＨ３５）为溶剂，取适量麻
黄，加８倍量酸水浸泡过夜，分别超声 ４０，３０，２０
ｍｉｎ，合并３次滤液作为供试液，此法对待测成分的
干扰较多，分离度较差；回流提取法，即取适量麻黄，
加浓氨溶液４ｍＬ，浸渍过夜，再加甲醇适量，回流
若干小时，结果发现此法干扰成分较少，对待测成分
的测定无干扰。而后，笔者又对分别加入甲醇２，３，
４，５，６ｍＬ进行试验，结果发现加入甲醇４ｍＬ时即
可提取完全；通过回流０５，１，１５，２，２５，３ｈ进行
试验，发现回流２ｈ时提取完全，故选用回流提取
法。
在上述操作条件下，麻黄碱和伪麻黄碱分离度
较好，空白溶液与样品溶液峰没有重叠。
［参考文献］
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ＭａｘｉｎｇＳｈｉｇａｎＴａｎｇｂｙｃａｐｉｌａｒｙｚｏｎｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
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ｆｏｒｅｐｈｅｄｒｉｎｅａｎｄｆｒｏｍ８４ｔｏ８４ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９５）ｆｏｒｐｓｅｕｄｏｅｐｈｅｄｒｉｎｅ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｓ（Ｓ／Ｎ＝３）ｏｆｅｐｈｅｄｒｉｎｅａｎｄ
ｐｓｅｕｄｏｅｐｈｅｄｒｉｎｅｗｅｒｅｓｈｏｗｎｔｏｂｅ１４５ａｎｄ１４８μｇ·ｍＬ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，Ｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｌｉｍｉｔｓ（Ｓ／Ｎ＝１０）ｏｆｅｐｈｅｄｒｉｎｅａｎｄ
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ｗｅｒｅ９７５％ ａｎｄ９８６％ ｗｉｔｈＲＳＤｌｅｓｓｔｈａｎ５０％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ｃｏｓｔｅｆｅｃｔｉｖｅａｎｄｐｒｅｃｉｓｅｗｉｔｈｓａｔｉｓ
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