全 文 ：化学试剂 ,2010 ,32(2),137 ～ 138;182
高效毛细管电泳法测定四味土木香散中
苦参碱和氧化苦参碱的含量
席海山a ,许良＊b ,娜仁花a ,孙乌日娜a
(内蒙古民族大学 a.分析测试中心;b.化学化工学院 , 内蒙古 通辽　028042)
摘要:提出了同时测定四味土木香散中苦参碱和氧化苦参碱含量的方法。采用高效毛细管电泳法。实验条件为:用缓冲
溶液 20 mmol/ L Tris-40 mmol/L NaH2PO4-20%异丙醇(用磷酸调到pH 5.5)作为电泳液 , 检测波长为200 nm。被测样品中苦
参碱和氧化苦参碱完全分离且被准确测定。 其平均加样回收率分别为 99.2%和 100.1%, RSD 分别为 2.31%和 1.57%
(n=9)。该方法操作简便 、准确 , 可作为四味土木香散及其制剂的质量控制方法。
关键词:高效毛细管电泳法;四味土木香散;苦参碱;氧化苦参碱
中图分类号:O657.8　　文献标识码:A　　文章编号:0258-3283(2010)02-0137-02
　　收稿日期:2009-01-23
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30760299)。
作者简介:席海山(1972-), 男 ,蒙古族, 内蒙古通辽人 , 学
士 ,副教授 ,从事分析化学教学与研究工作。
　　四味土木香散(查干汤)是由土木香(200 g)、
苦参(200 g)、珍珠杆(100 g)、山柰(50 g)组成 ,具
有清瘟解表 ,用于治疗瘟病初期 ,发冷发热 ,头疼
咳嗽 ,咽喉肿痛 ,胸胁作痛的常用蒙药之一[ 1] 。其
中苦参为豆科槐属植物苦参(Sophara flavescens
Ait.)的干燥根 ,苦 ,寒 ,归心 ,肝 ,胃 ,大肠 ,具有清
热 、祛湿 、杀虫 、利尿之效 ,用于热痢 、便血 、黄疸尿
闭 、赤白带下 、湿疹 、皮肤瘙痒等症 。苦参中主要
含生物碱 、黄酮类和醌类成分。其中苦参碱和氧
化苦参碱是含量较高的两种化合物 ,两者含有相
似的基本骨架 ,属于喹嗪啶类生物碱 。大量研究
表明 ,氧化苦参碱具有抗炎 、抗肿瘤 、抗病毒作
用[ 2] ;苦参碱具有抗病原体 、抑制变态反应 、正性
肌力的作用。氧化苦参碱具有抗炎 、抗肿瘤 、抗病
毒 、抗纤维化以及对心血管系统有调节作用[ 3] 。
以上药理作用说明苦参碱和氧化苦参碱分别是四
味土木香散的主要有效成分之一。参桂颗粒中苦
参碱的薄层-分光光度测定法[ 4] ,苦参碱的薄层扫
描法测定(TLC)[ 5] ,复方苦参注射液中氧化槐果
碱 、氧化苦参碱和苦参碱高效液相色谱测定法
(HPLC)[ 6] 和苦参中生物碱的毛细管电泳测定
法[ 7]等已有报道 。本文提出了同时测定四味土木
香散中苦参碱和氧化苦参碱的的毛细管电泳法 ,
为该药及其新制剂的质量控制提供了测定方法。
1　实验部分
1.1 　主要仪器与试剂
Capel-105高效毛细管电泳仪(俄罗斯 Lumex
公司);BP210S 型电子分析天平(德国 Satorious公
司);MilliQ Academic 型超纯水系统(美国 Millipore
公司)。
四味土木香(内蒙古蒙药股份有限公司 、产品
批号为 050302);苦参碱和氧化苦参碱对照品(中
国药品生物检定所);所用化学试剂均为分析纯;
四味土木香散(内蒙古民族大学附属医院蒙药制
剂室 ,批号为 050302 、050303)。
1.2 　溶液配制
1.2.1 　对照品溶液的制备
精密称取 3.7 mg 苦参碱 , 5.0 mg 氧化苦参
碱 ,分别加无水乙醇定容于10 mL容量瓶中 ,得质
量浓度分别为 0.37和 0.51 mg/mL的苦参碱和氧
化苦参碱对照品溶液 。
1.2.2 　供试品溶液的制备
精密称取 0.2 g 四味土木香散 ,至 50 mL 容量
瓶中加 25 mL 氯仿 、1 mL 浓氨试液 ,密塞后振摇
放置 24 h后超声萃取两次 ,每次超声 30min;过滤
后留下的残渣用 2%的 HCl再提取两次 ,过滤后
滤液中滴加氨水 ,溶液呈碱性;然后用氯仿萃取 2
次;合并氯仿液 。置 65 ℃水浴蒸干 。残渣用乙醇
溶液定容至10 mL的溶液 ,得供试品溶液 。
1.3 　实验条件
运行缓冲液为 20 mmol/L Tris-40 mmol/L
NaH2PO4-20%异丙醇(用磷酸调到 pH 5.5);柱温
30 ℃,检测波长 200 nm;分离电压为 12 kV ,进样
137第 32卷第 2 期 席海山等:高效毛细管电泳法测定四味土木香散中苦参碱和氧化苦参碱的含量
DOI :10.13822/j.cnki.hxsj.2010.02.025
压力为 0.3 Pa ,真空进样时间为 5 s。供试品溶液
和运行缓冲液均经过 0.45μm 微孔滤膜过滤 。每
次进样前 ,0.1 mol/L NaOH 冲洗 1min ,用水冲洗 2
min ,最后用运行缓冲溶液冲洗 3 min 。设定时间
为19 min。该实验条件下 ,对照品和样品的毛细
管电泳图如图 1所示 。
a.对照品;b.土木香散样品;c.阴性样品
1.苦参碱;2.氧化苦参碱
图 1　电泳图
Fig.1　Electrophoregrams
1.4 　线性关系考察
分别精密量取 1.2.1 项下对照品溶液适量 ,
置于同一 10 mL量瓶中 ,用乙醇稀释 ,制得苦参碱
浓度为 18.5 、37.0 、55.5 、74.0 、92.5 μg/mL和氧化
苦参碱浓度为 25.0 、50.0 、 75.0 、 100.0 、150.0
μg/mL的系列混合标准溶液。取混合标准溶液在
1.3项测定条件下测定 , 以峰面积 y 对浓度
c(μg/mL)进行线性回归 。苦参碱和氧化苦参碱的
回归方程 、相关系数和线性范围见表1 。
表 1 　化合物的回归方程 、相关系数 、线性范围
Tab.1　Regression equations , correlations coefficients ,
linear ranges of compounds (n=3)
组分 回归方程 r 线性范围/(μg·mL-1)
苦参碱　　 y =0.621 5 x+6.044 0.999 7 18.5～ 92.5
氧化苦参碱 y =0.742 3 x-3.471 0.999 8 25～ 150
1.5 　精密度试验
精密吸取 10.0 μL 土木香散(批号:050302)样
品溶液 ,在所选定的电泳条件下连续测定6次 ,苦
参碱和氧化苦参碱峰面积积分值的 RSD分别为
1.1%和 1.0%。
1.6 　稳定性试验
对土木香散(批号:050303)样品溶液在8 h内
每隔 1 h 进行一次测定 ,考察共时品溶液的稳定
性。结果显示 ,苦参碱和氧化苦参碱峰面积积分
值的 RSD分别为 2.1%和 1.3%。
1.7 　重复性试验
精密称取 0.2 g 土木香散(批号:050303)共 5
份 ,按 1.2.2项下制备供试品溶液 ,按样品测定条
件分别进样测定 ,苦参碱和氧化苦参碱峰面积积
分值的 RSD分别为 3.7%和 2.8%。
1.8 　加样回收试验
精密量取已知含量的同批土木香散 9份 ,分
成 3组 ,每组分别加入苦参碱和氧化苦参碱对照
品溶液 1 、2 、3 mL ,照“供试品溶液的制备”项下方
法制备供试品溶液 。按上述电泳条件下测定 ,记
录电泳图 ,计算回收率 。苦参碱和氧化苦参碱的
平均回收率分别为 99.2%和 100.1%, RSD 分别
为 2.31%和 1.57%(n=9)。
1.9 　样品含量测定
精密称取 5 份四味土木香散(批号为
050303),按供试品溶液的制备法操作 ,制备成被
测溶液 ,在选定的毛细管电泳条件下测定两种生
物碱的峰面积 ,以外标法分别计算苦参碱和氧化
苦参碱的含量 ,样品测定结果见表 2。
表 2 　样品测定结果
Tab.2　Results of sample determination (n=5)
样品号 苦参碱 氧化苦参碱含量/(mg·g -1) RSD/ % 含量/(mg·g-1) RSD/ %
1 0.756 0 1.0 2.521 1.8
2 0.751 0 1.9 2.510 0.9
3 0.754 1 0.6 2.523 0.3
4 0.757 4 1.7 2.526 1.1
5 0.755 4 1.4 2.516 1.7
2　结果与讨论
2.1 　生物碱的极性一般较大 ,易溶于水。在样
品提取中可以选择水作为提取溶剂 。但实验表
明 ,以水作提取溶剂时其他水溶性杂质也与生物
碱同时被提取 。这些水溶性杂质在苦参碱和氧化
苦参碱的电泳分析中产生干扰 。因此 ,本实验选
氯仿作提取溶剂 ,避免其他水溶性成份的同时被
提取而产生干扰。
2.2 　影响两种生物碱分离度和迁移时间的主要
因素是缓冲溶液的 pH。本实验中用磷酸调至
　　 (下转第 182页)
138 化　学　试　剂 2010年 2 月
表 1 实验 结果表明较佳反应 条件为:
n(HNO3)∶n(H2SO4)∶n(溴苯)=1∶3.9∶3.2(其中
硝酸质量浓度为 65%,硫酸质量浓度为 96%),
V(溴苯)∶V(H2O)=1∶1.6 ,回流反应 2 h , 所得
2 ,4-二硝基溴苯的产率为 94.8%,纯度质量分数
高于99.0%。与国内外现有 2 ,4-二硝基溴苯的制
备工艺相比 ,本工艺技术产率高 、成本低 、高效低
耗 、操作简单安全 ,易实现工业化。
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bromides and chlorides[ J] .Synthesis , 2001 , 14:2 180-
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Synthesis of 1-bromo-2 , 4-dinitrobenzene J I Xuan , HAN Yan-
hui , ZHANG Xin , WEI Hong-yu , ZHANG Zhao＊(School of
Chemistry and Chemical Engineering , Shanxi University , Taiyuan
030006 , China),Huaxue Shiji , 2010 , 32(2), 181～ 182
Abstract:1-Bromo-2 , 4-dinitrobenzene , used as the intermediate
of medicinal and pharmaceutical agents , organic dyes , organic
electroluminescent material , was synthesized from bromobenzene
by nitration in water.The yield of 1-bromo-2 , 4-dinitrobenzene
reached 94.8% and the product purity was higher than 99.0%.
The structure of target product was characterized by IR and NMR
spectrometry.
Key words:bromobenzene;1-bromo-2 , 4-dinitrobenzene;nitration
(上接第 138页)
缓冲溶液 pH 5.5 时得到较好的分离度和适宜的
迁移时间。在建立的实验条件下 ,使样品中的苦
参碱和氧化苦参碱在 15 min之内实现完全分离。
此测定方法简便 ,分离时间短 ,使用有机溶剂少 ,
可用于蒙药四味土木香散及其制剂的含量测定
方法 。
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Determination of matrine and oxymatrine in Siweitumuxiang
powder by HPCE XI Hai-shana , XU Liang＊b , Narenhuaa ,
SUN Wurinaa (Inner Mongolia University for Nationalities
a.Analysis and Testing Center;b.College of Chemistry and
Chemical Engineering , Tongliao 028042 , China), Huaxue Shiji ,
2010 , 32(2), 137～ 138;182
Abstract:An HPCE method for simultaneous determination of
matrine and oxymatrine in siweitumuxiangs powder was estab-
lished.A high performance capillary electrophoresis method was
utilized.The buffer solution used in this method composed of 20
mmol/ L of TRIS , 40 mmol/L of NaH2PO4 and 20% isopropyl al-
cohol(with the pH value being adjusted to 5.5 by phosphoric
acid), and the detection wavelength was 200 nm.Matrine and
oxymatrine in the sample were separated completely and deter-
mined accurately.The recoveries and the RSD were 99.2%,
2.31% for matrine and 100.1%, 1.57%(n =9) for oxyma-
trine , respectively.This method is simple and accurate , which can
be used for the quality control on siweitumuxiang powder and its
preparations.
Key words:high performance capillary electrophoresis(HPCE);
Siweitumuxiang powder;matrine;oxymatrine
182 化　学　试　剂 2010年 2 月