全 文 ：麋鹿角醇提液对正常小鼠 ＩＬ２和 ＩＦＮγ的影响
杨朝晔１，秦红兵２，朱清３
（１．盐城卫生职业技术学院 免疫学教研室，江苏 盐城 ２２４００６；
２．盐城卫生职业技术学院 药理学教研室，江苏 盐城 ２２４００６；
３．南通大学 医学院 药理学教研室，江苏 南通 ２２６００１）
［摘要］ 目的：观察麋鹿角醇提液对正常小鼠细胞因子白介素２（ＩＬ２）和 γ干扰素（ＩＦＮγ）的影响。方法：３０只 ＩＣＲ小
鼠随机分成３组：正常组、麋鹿角醇提液低剂量组（２ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１）、高剂量组（４ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１），灌胃给药，连续７ｄ。采用
ＥＬＩＳＡ法检测血清中细胞因子 ＩＬ２，ＩＦＮγ的浓度，ＲＴＰＣＲ法检测脾淋巴细胞 ＩＬ２，ＩＦＮγｍＲＮＡ的表达。结果：麋鹿角醇提
液高剂量组小鼠血清中ＩＬ２和ＩＦＮγ的浓度升高，脾淋巴细胞ＩＬ２，ＩＦＮγｍＲＮＡ的表达增强。结论：麋鹿角醇提液能促进正
常小鼠细胞因子ＩＬ２，ＩＦＮγ的分泌与表达，增强其细胞免疫功能。
［关键词］ 麋鹿角醇提液；细胞因子；细胞因子白介素２；γ干扰素
［收稿日期］ ２００８１２１０
［基金项目］ 盐城市科技局资助项目（２００３４６２）
［通信作者］ 杨朝晔，盐城卫生职业技术学院，副教授，主要从事
中药免疫研究、微生物学与免疫学教学工作。Ｔｅｌ：（０５１）５８８１５９０３２，
Ｅｍａｉｌ：ｙｗｙｚｙ２００５＠１２６．ｃｏｍ
麋鹿角为鹿科动物麋鹿 Ｅｌａｐｈｕｒｕｓｄａｖｉｄｉａｎｕｓ
ＭｉｌｎｅＥｄｗａｒｄｓ的骨化老角，又称麋角。麋鹿角属于
传统补益类名贵中药，具有壮阳补精、强筋益血等扶
正固本功能［１２］。研究表明，麋鹿角内含有益于人体
健康的多种氨基酸、无机元素等，有利于合成人体
必需蛋白质、激素等［３４］。现代药理学研究发现麋鹿
角醇提液对正常小鼠体液免疫、细胞免疫功能都有
一定的促进作用［５］。这提示了传统医学理论中麋
鹿角“壮阳补精、强筋益血”的作用可能和其良好的
调节机体免疫功能有关。细胞因子是由细胞分泌的
具有生物活性的小分子蛋白物质的统称，在介导机
体的多种免疫效应方面发挥重要作用［６］。麋鹿角
对于正常小鼠细胞因子是否有影响未见文献报道。
本实验观察麋鹿角醇提液对正常小鼠细胞因子白介
素２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ２，ＩＬ２）和γ干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｇａｍ
ｍａ，ＩＦＮγ）的影响。
１ 材料
１．１ 动物 ＩＣＲ小鼠３０只，体重（１８±２）ｇ，雌雄
兼用，由南通大学动物实验中心提供［合格证 ＳＹＸＫ
（苏）２００７００２１］。
１．２ 药物 麋鹿角，由江苏大丰麋鹿保护区提供，
将麋鹿角刨片、粉碎成约１００目粉末，准确称取麋鹿
角粉末２００ｇ，加入７０％乙醇溶液浸泡３次，每次４８
ｈ，合并浸泡液并过滤，然后减压蒸馏，浓缩至 ８０
ｍＬ，即为麋鹿角乙醇提取浓缩液，生药含量２５ｇ·
ｍＬ－１。用０５％羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ）溶液配制
成所需浓度的麋鹿角醇提液备用。
１．３ 试剂 ＩＬ２与 ＩＦＮγ的 ＥＬＩＳＡ试剂盒（ｅＢｉｏ
ｓｃｉｅｎｃｅ公司）。ＴＲＩＺＯＬＲｅａｇｅｎｔ（加拿大 ＢＢＩ公
司）。ＤＮＡ酶（ＤＮａｓｅＩ）（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ公司原装）。
Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５，ＭＭＬＶ逆转录酶，ｄＡＴＰ，ｄＴＴＰ，ｄＣＴＰ，
ｄＧＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）。ＴａｑＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＢＢＩ公
司）。ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ（ＴａＫａＲａ公司）。
１．４ 仪器 ＰＴＣ１００ＰＣＲ仪（美国 ＭＪ．ＲＥ
ＳＥＡＲＣＨ．ＩＮＣ）。小源凝胶图像分析系统（上海小
源科技有限公司）。核酸蛋白分析仪（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ基
因有限公司）。
２ 方法
２．１ 分组与给药 ３０只ＩＣＲ小鼠，随机分成３组，
每组１０只：正常组，麋鹿角醇提液高、低剂量给药组
（２，４ｇ·ｋｇ－１，给药容积００１ｍＬ·ｇ－１），正常组给
予相同容积的０５％羧甲基纤维素钠，连续７ｄ。
２．２ 检测血清中细胞因子 ＩＬ２，ＩＦＮγ的浓度 小
鼠末次灌胃给药后２４ｈ，眼眶采血，２０００ｒ·ｍｉｎ－１
离心１５ｍｉｎ取血清，置于 －２０℃冰箱待测。根据
ＥｌＩＳＡ试剂盒中的方法，取９６孔板设标准孔８孔，
２～８孔中加入样品稀释液１００μＬ，第１，２孔中均加
对照品１００μＬ，第２孔混匀后取１００μＬ至第３孔，
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此对倍稀释至第７孔，最后从第７孔中吸出１００μＬ
弃去，第８孔为空白对照孔。取待测血清加入样品
孔，每孔１００μＬ，上封板纸，与标准曲线孔共置 ３７
℃，５％ＣＯ２孵育箱孵育９０ｍｉｎ。洗涤液洗板５次，
除空白孔外，每孔加入稀释的生物素化抗体工作液
１００μＬ，封住板孔，置３７℃，５％ＣＯ２孵育箱避光孵
育６０ｍｉｎ。洗涤液洗板５次，每孔加入稀释好的酶
结合物工作液１００μＬ，封住板孔，置３７℃，５％ＣＯ２
孵育箱避光孵育 ３０ｍｉｎ。洗板同前，加入显色剂
１００μＬ／孔，３７℃避光孵育１５ｍｉｎ。每孔加入终止
液１００μＬ，混匀后即刻在４５０ｎｍ测吸光度（Ａ），根
据标准曲线方程得出对应的浓度。
２．３ 检测脾淋巴细胞ＩＬ２，ＩＦＮγｍＲＮＡ的表达 处
死小鼠后无菌取小鼠脾脏，按常规无菌操作制备成脾
细胞悬液，Ｔｒｉｚｏｌ法常规提取各组脾淋巴细胞的总
ＲＮＡ［７］，用无 ＲＮＡ酶的 ＤＮａｓｅＩ处理后，参照 Ｐｒｏ
ｍｅｇａ公司提供方法合成ｃＤＮＡ。然后ＰＣＲ扩增ＩＬ２，
ＩＦＮγ基因，用βａｃｔｉｎ作为内参基因。其引物序列如
下：ＩＬ２上游引物５′ａａｃｃｔｇａａａｃｔｃｃｃｃａｇｇａｔ３′，下游引
物５′ｔｃｃａｃｃａｃａｇｔｇｃｔｇａｃｔｃ３′预期扩增长度 ２５４ｂｐ；
ＩＦＮγ上游引物５′ａｃｔｇｇｃａａａａｇｇａｔｇｇｔｇａｃ３′，下游引物
５′ｔｇａｇｃｔｃａｔｇａａｔｇｃｔｇｇ３′预期扩增长度２３７ｂｐ；βａｃｔｉｎ
（β肌动蛋白）上游引物５′ｇａｇａｇｇｇａａａｔｃｇｔｇｃｇｔｇａ３′，下
游引物 ５′ａｇｔａｃｔｇｃｇｃｔｃａｇｇａｇｇａ３′预期扩增长为 ４００
ｂｐ。ＰＣＲ总反应体系为２５μＬ：１０×ＰＣＲＢｕｆｅｒ２５
μＬ，ｃＤＮＡ模板（１ｇ·Ｌ－１）１μＬ，引物（上下游混合，
各１０μｍｏｌ·Ｌ－１）１μＬ，ｄＮＴＰｍｉｘ（１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）０５
μＬ，ＭｇＣｌ２（２５ｍｍｏｌ·Ｌ
－１）２０μＬ，Ｔａｑ酶（５Ｕ·
μＬ－１）０２μＬ，ｄｄＨ２Ｏ１７８μＬ混匀后稍离心，执行
ＰＣＲ程序。ＰＣＲ反应参数如下：ＩＬ２基因扩增参数为
９４℃４ｍｉｎ，９４℃３５ｓ，５４℃３０ｓ，７２℃３０ｓ，循环３１
次后，７２℃延伸７ｍｉｎ，每管适时加入内参引物，内参
扩增２６次。ＩＦＮγ基因扩增参数退火温度为５３℃，
其余同前所述。ＰＣＲ产物于１５％琼脂糖电泳，电泳
结束后拍照，ＳｃｉｏｎＩｍａｇｅ图像分析软件分析 ＰＣＲ产
物条带。为减少误差，以目的基因与内参的比值代替
目的基因进行计算分析。
目的基因条带灰度相对值＝（背景灰度值 －目的基因
条带灰度值）／（背景灰度值－内参基因条带灰度值）。
２．４ 统计方法 数据用珋ｘ±ｓ表示，用ＳＰＳＳ１１０统
计软件，采用方差分析，组间比较采用 ｔ检验。Ｐ＜
００５为有显著性差异。
３ 结果
３．１ 血清中细胞因子 ＩＬ２，ＩＦＮγ的浓度 与正常
组相比较，麋鹿角醇提液低剂量组对小鼠细胞因子
ＩＬ２，ＩＦＮγ影响不明显，而高剂量组能升高小鼠血
清中 ＩＬ２和 ＩＦＮγ的水平，且均有统计学意义
（Ｐ＜００５）（表１）。
表１ 对小鼠细胞因子ＩＬ２，ＩＦＮγ的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
ＩＬ２
／μｇ·Ｌ－１
ＩＦＮγ
／μｇ·Ｌ－１
正常 － ２１１９±１９３５ ２０６±０９９
麋鹿角醇提液 ２ ２４１８±１８７０ ３０８±１７７
４ ４８９２±２６６２１，２） ３７１±２１４１）
注：与正常组比较１）Ｐ＜００５；与麋鹿角醇提液低剂量组比较
２）Ｐ＜００５。
３．２ 脾淋巴细胞 ＩＬ２，ＩＦＮγｍＲＮＡ的表达 ＩＬ２
ｍＲＮＡ表达如图１所示，麋鹿角醇提液低剂量组与
正常组比较有升高趋势但没有显著性差异，高剂量
组与正常组比较，ＩＬ２水平升高１３８倍，差异有统
计学意义（Ｐ＜００５）。ＩＦＮγ基因表达如图２所示，
低剂量组与正常组比较有升高趋势但没有显著性差
异，高剂量组能显著增强ＩＦＮγ基因的表达，丰度比
值为４３７倍，有显著性差异（Ｐ＜００５）。
１．正常组；２．麋鹿角醇提液低剂量组；３．麋鹿角醇提液高剂量组（图２同）；与正常组比较１）Ｐ＜００１。
图１ 麋鹿角醇提液对正常小鼠淋巴细胞ＩＬ２ｍＲＮＡ的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
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与正常组比较１）Ｐ＜００１；与麋鹿角醇提液低剂量组比较２）Ｐ＜００５。
图２ 麋鹿角醇提液对正常小鼠淋巴细胞ＩＦＮγｍＲＮＡ的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
４ 讨论
传统中医认为麋角属于补益类名贵中药材，具
有“强筋骨，益血脉”的功效。现代生药学研究证实
其含有丰富的氨基酸，维生素以及矿物质，具有抗疲
劳、增强免疫功能等保健作用的物质基础［８］，药理
学研究也证实，麋鹿角醇提液能增强正常小鼠的单
核吞噬细胞功能，提高免疫器官的指数，增强小鼠溶
血素形成的能力，提高经ＰＨＡ诱导的小鼠Ｔ淋巴细
胞转化率，具有增强正常小鼠体液免疫以及细胞免
疫功能的作用［５］。细胞因子（ｃｙｔｏｋｉｎｅ，ＣＫ）是由免
疫活性细胞及其相关细胞（巨噬细胞、成纤维细胞
和内皮细胞）产生，为具有多种重要生物活性的细
胞调节蛋白。ＣＫ作为细胞间接传递信息的分子语
言，参与免疫应答的全过程，包括感应阶段，淋巴细
胞活化，增殖、分化阶段以及免疫效应阶段，在免疫
调控中起着重要作用［６］，而麋鹿角对细胞因子是否
有影响还不清楚。本实验观察了麋鹿角醇提液对正
常小鼠细胞因子ＩＬ２和ＩＦＮγ的影响。
ＩＬ２和ＩＦＮγ都是主要由活化的Ｔ淋巴细胞产
生的细胞因子，具有强大的免疫调节作用。ＩＬ２具
有促进 Ｔ细胞增殖分化，增强 Ｔ细胞、ＮＫ细胞活
性，诱导干扰素生成的作用。ＩＦＮγ可增强抗原提
呈细胞与 Ｔ细胞的相互作用，进而增强 Ｔ细胞辅助
抗体产生，可活化巨噬细胞，促进其杀伤病原体和肿
瘤的能力，并可活化 ＮＫ细胞，提高其杀伤能力。
ＩＬ２和ＩＦＮγ水平的高低是机体细胞免疫的重要标
志［９１０］。
本研究发现麋鹿角醇提液低剂量组虽有升高趋
势，但未能达到统计学意义，而高剂量组能够升高小
鼠血清中ＩＬ２和ＩＦＮγ的浓度，并增加小鼠脾淋巴
细胞因子 ＩＬ２，ＩＦＮγｍＲＮＡ的水平。结果说明麋
鹿角醇提物能基于分子转录水平增加正常小鼠脾淋
巴细胞ＩＬ２，ＩＦＮγ基因的表达，从而促进ＩＬ２以及
ＩＦＮγ的蛋白合成，使其分泌增加，故其在血清中浓
度升高。麋鹿角醇提物增强Ｔ淋巴细胞转化功能可
能与ＩＬ２水平的增加有关，也可能互为因果，互相促
进，所以导致虽然 ＩＬ２基因表达水平升高幅度并不
高（１３８倍），但其血清中浓度增幅较高（２３１倍）。
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［责任编辑 古云侠］
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第３４卷第１５期
２００９年８月
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