全 文 ：收稿日期:2007-06-01;　修订日期:2007-09-12
基金项目:福建中医学院科研基金(No.X20040019)
作者简介:林久茂(1975-),男(汉族),福建尤溪人 ,现任福建中医学院中
西医结合研究院实验师 ,硕士学位 ,主要从事中药药理研究工作.
田基黄对小鼠急性肝损伤的防治作用
林久茂 1, 2 , 赵锦燕 1, 2 , 周建衡 3 , 陈小峰 3 , 叶蕻芝 1, 2 , 王瑞国 3
(1.福建中医学院中西医结合研究院 ,福建 福州　350108;
2.福建中西医结合研究院重点实验室 ,福建 福州　350108;　3.福建中医学院 ,福建 福州　350108)
摘要:目的 探讨田基黄对急性肝损伤防治作用的药理机制。方法 以四氯化碳(CCl4)制备小鼠急性肝损伤的模型 , 田
基黄水煎剂灌胃 , 检测小鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活力
以及一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6的含量 ,观察肝组织的病理损伤程度。结果 不同浓度的
田基黄能不同程度地降低 CCl4所致异常升高的小鼠血清中的 ALT, AST, NO, TNF-α, IL-6含量 , 升高 SOD活性 ,并且
改善肝脏组织的病理损伤。结论 田基黄对 CCl4所致小鼠肝损伤具有防治作用 , 其作用机制可能与降转氨酶 、提高抗氧
化能力和抑制 NO, TNF-α, IL-6过量生成等有关。
关键词:田基黄;　四氯化碳;　肝损伤;　抗氧化;　细胞因子
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)03-0550-02
TheProtectiveEffectofHypericumjaponicumagainstAcuteLiverInjuryinMice
LINJiu-mao1, 2 , ZHAOJin-yan1, 2 , ZHOUJian-heng3 , CHENXiao-feng3 , YEHong-zhi1, 2 , WANGRui-guo3(1.FujianColegeofTraditionalChineseMedicine＆ FujianAcademyofIntegrativeMedicine, Fuzhou, Fujian
350108, China;2.FujianColegeofTraditionalChineseMedicine, Fuzhou, Fujian350108, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheprotectiveeffectofHypericumjaponicumagainstacuteliverinjuryinmiceanditsmechanism.
MethodsAfteracateliverinjurymodelwasinducedbycarbontetrachloride(CCl4), micewereadministratedintragastricalywithHypericumjaponicum.TheserumALT, AST, SOD, NO, TNF-α, IL-6weredeterminedandpathologicalchangeofliver
wasobserved.ResultsHypericumjaponicumcouldsignificantlydecreasetheelevationofserumALT, AST, NO, TNF-α, IL-6
inducedbyCCl4 , andincreaseSODactivity, amelioratethepathologicalinjuryofliver.ConclusionHypericumjaponicumshowsprotectiveeffectagainstexperimentalliverinjuryinmice.DecreasetheserumALTandAST, increaseinganti-peroxide, restrai-
ningproduceoftheserumNO, TNF-αandIL-6, maybeoneofitsmechanisms.
Keywords:Hypericumjaponicum;　Carbontetrachloride;　Hasteliverinjury;　Antioxidation;　Celfactor
　　田基黄原名地耳草 , 系藤黄科金丝桃属植物地耳草 Hyperi-
cumjaponicumThumb的干燥全草。味甘 、微苦 , 性凉 ,归肝 、胆 、大
肠经。具有清热利湿 、散淤止痛 、消肿解毒的功效 [ 1] 。生于田野
较湿润处 ,广布于长江流域及其以南各地 , 主产于江西 、福建 、广
东 、广西 、四川 、贵州等地。含有黄酮类 、内酯类 、色原烯类 、缩二
氨酸衍生物 、咕吨酮类 、间环己三醇衍生物等化合物 [ 2] 。现代药
理研究表明 , 田基黄具有抑菌 、抗病毒 、保肝 、抑制癌细胞 、增强免
疫 、抗氧化 、止血以及对心血管的双向调节等多种药理学功
效 [ 3] 。为探讨田基黄保肝降酶的作用机制 , 本实验采用了 CCl4
诱导小鼠急性肝损伤的动物模型 ,对其进行研究观察。现将田基
黄保护 CCl4所致小鼠急性肝损伤的药理作用机制的研究结果报
道如下。
1　器材
1.1　动物 清洁级昆明种健康小鼠 60只 , 体重 18 ～ 22 g, 雌雄各
半 , 动物由福建中医学院实验动物中心提供 , 许可证号:SYXK
(闽)2005-0003,正常喂养 ,置实验室适应环境 3 d后进行实验。
1.2　药材与试剂 田基黄购自福建中医学院国医堂医院 , 并经鉴
定为藤黄科植物田基黄的全草;四氯化碳(CCl4), 上海中国联化
化工试剂有限公司产品 , 批号 20051022, 分析纯;生理盐水注射
液 , 福州福药制药有限公司产品 , 批号 050103A07;AST, ALT, NO,
SOD, MDA测试药盒 ,南京建成生物工程研究所产品;TNF-α、IL
-6试剂盒 ,解放军总医院科技开发中心放免所产品。
1.3　仪器 LXJ-2B低速大容量离心机 、DDL-5低速冷冻离心
机 , 上海安亭科学仪器厂产品;HH.W21>600电热恒温水浴箱 ,
上海医疗器械厂产品;AB204 -N电子天平 , 梅特勒公司产品;
BT224半自动生化分析仪 , 意大利仪器;FJ-2008PSg放射免疫
计数器 ,西安核仪器厂产品;BH-2系统显微镜 , OLYMPUS公司
产品。
2　方法
2.1　药物及试剂配制 田基黄用冷水浸泡 , 煎煮 2次 , 过滤 ,合并
滤液 , 浓缩成含生药 2 g/ml的水煎液 , 用前配成 0.5, 1.0, 2.0 g/
ml溶液 ,各以低 、中 、高剂量标之;将联苯双酯(BPD)滴丸配制成
20 mg/ml的溶液;0.2%CCl
4
花生油溶液是用新鲜纯花生油作为
溶剂按体积比配制。其他测试试剂按相关的药盒说明书进行
配制。
2.2　动物造模给药 取小鼠 50只 , 称重 , 按性别 、体重随机分为
5组(即空白组 、CCl4模型组 、田基黄低剂量组 、田基黄中剂量组 、
田基黄高剂量组),每组 10只 ,雌雄各半。空白组和 CCl4模型组
予以生理盐水灌胃 ,余各组予以田基黄低 、中 、高剂量提取物溶液
灌胃 , 各组均按 0.1 ml/10 g体重灌胃量给药 , 1次 /d。于第 1, 4
天在给药 30 min后 , 空白组腹腔注射生理盐水 ,余各组腹腔注射
CCl4溶液 ,各组按 0.1 ml/10 g体重注射 , 正常喂养 ,连续 7 d。
2.3　取材 于末次给药 24h后取材 , 摘眼球法取血约 1ml, 4℃ 3
000r/min离心 10min分离血清 ,于 -20℃保存待测;取血后处死
小鼠 , 立刻剖开腹腔 , 暴露肝脏 , 剪取小块右叶中央部位肝脏组
织 , 约 0.5cm×0.5 cm×0.5 cm,迅速投入 10%福尔马林溶液中
固定 , 常规切片 , HE染色 ,光镜下作组织病理学检查。
2.4　指标检测 各指标分别按相关的试剂盒操作说明书进行;肝
组织病理学检查 ,在光镜下观察肝组织切片的病理形态学变化。
肝组织病理学改变分为 5级:正常肝细胞 “ -”;肝细胞点状坏死
“ +”;肝细胞灶状坏死 “ ++”;肝小叶不足 1/3肝细胞坏死 “ +
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 3期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.3　
++”;肝小叶超过 1/3肝细胞坏死 “ ++++”。
2.5　数据统计处理 采用 SPSS12.0软件进行分析 , 计量资料 ,采
用 F检验 , 结果用 x±s表示;计数资料 , 应用 Ridit检验。
3　结果
3.1　田基黄对小鼠血清中 ALT, AST活性的影响 模型组小鼠血
清中的 ALT和 AST含量明显高于空白组(P<0.01), 表明模型
制作成功;田基黄低 、中 、高不同剂量对 CCl4所致转氨酶(ALT和AST)的升高具有显著的降低作用(与模型组比较 , P<0.01);而
田基黄低剂量组降低 ALT的作用尤为突出 , 但降 AST的作用不
同剂量间没有显著区别。结果见表 1。
表 1　各组小鼠血清中 ALT, AST活性的比较( x±s)
U· L-1
组别 ALT AST
空白对照 22.82±2.97 35.59±5.19
模型对照 78.10±12.661) 87.13±11.781)
田基黄低剂量 26.14±5.932) 53.29±13.452)
田基黄中剂量 37.89±9.362) 54.77±8.682)
田基黄高剂量 42.15±12.782) 55.76±11.902)
　　与空白组比较 , 1)P<0.01;与模型组比较 , 2)P<0.01;n=10
3.2　田基黄对小鼠血清中 SOD活性与 NO含量的影响 模型组
小鼠血清中 SOD含量明显低于空白组(P<0.01), NO含量明显
高于空白组(P<0.01)。田基黄高 、中剂量对 CCl4所致的 SOD
活性降低具有显著的升高作用(与模型组比较 , P<0.01), 而田
基黄低剂量对 CCl4所致的 SOD活性降低无显著性作用(与模型
组比较 , P>0.05)。 田基黄低 、中 、高剂量对 CCl4所致 NO的升
高具有显著降低作用(与模型组比较 , P<0.05)。结果见表 2。
表 2　各组小鼠血清中 SOD活性与 N0含量的比较( x±s)
组别 SOD/NU· ml-1 NO/μmol· L-1
空白对照 286.17±32.00 5.81±0.58
模型对照 220.57±11.341) 9.32±2.381)
田基黄低剂量 236.27±42.584) 6.22±1.153)
田基黄中剂量 260.02±20.892) 6.42±1.243)
田基黄高剂量 275.27±28.802) 6.07±1.393)
　　与空白组比较 , 1)P<0.01;与模型组比较 , 2)P<0.01, 3)P<0.05, 4)
P>0.05;n=10
3.3　田基黄对小鼠血清中 TNF-α, IL-6含量的影响 模型组
小鼠血清中 TNF-α, IL-6含量明显高于空白组 , 提示肝脏受损
伤时可导致血清 TNF-α, IL-6含量增高。田基黄高剂量组对
CCl4所致的 TNF-α的升高具有明显降低作用(与模型组比较 ,P<0.05);而中 、低剂量也有一定的降低作用趋势 , 但没有显著
性意义(与模型组比较 , P>0.05)。田基黄低 、中 、高不同剂量对
CCl4所致 IL-6的升高具有显著的降低作用(与模型组比较 , P<0.01)。结果见表 3。
表 3　各组小鼠血清中TNF-α, IL-6含量的比较( x±s)
组别 TNF-α/ng· ml-1 IL-6/pg· ml-1
空白对照 0.49±0.15 60.35±11.48
模型对照 0.85±0.281) 76.23±10.771)
田基黄低剂量 0.71±0.064) 60.74±3.172)
田基黄中剂量 0.67±0.264) 54.39±4.972)
田基黄高剂量 0.55±0.103) 58.43±5.862)
　　与空白组比较 , 1)P<0.01;与模型组比较 , 2)P<0.01, 3)P<0.05, 4)
P>0.05;n=10
3.4　田基黄对小鼠肝组织病理学损伤的影响 组织病理学观察
结果表明 , 空白组小鼠肝组织未出现明显病理变化。肝组织以中
央静脉为中心向四周呈放射状排列且吻合成网 ,肝细胞之间的肝
窦亦吻合成网 ,可见多个肝小叶及结缔组织构成的汇管区 , 肝细
胞较大呈多边形 , 胞质嗜酸性。模型组小鼠肝细胞变性坏死严
重 , 肝索排列紊乱 , 肝细胞广泛变性坏死 , 胞浆疏松化和气球样
变;汇管区与中央静脉区肝细胞坏死相连呈桥接坏死 , 伴有大量
炎性细胞浸润。模型组小鼠肝损伤严重程度与空白组比较有非
常显著差异(P<0.01), 提示造模成功。各用药组肝细胞变性坏
死程度明显减轻 ,与模型组比较有显著差异;与模型组比较 ,田基
黄低剂量组有显著性差异(P<0.05),余组均有非常显著性差异
(P<0.01)。结果见表 4。
表 4　田基黄对各组小鼠肝组织病理学损伤的影响
组别 - +
空白对照 10 0 0 0 0
模型对照 1) 0 0 0 1 9
田基黄低剂量 1)3) 0 2 5 2 1
田基黄中剂量 1)2) 1 3 2 4 0
田基黄高剂量 1)2) 2 5 2 1 0
　　与空白组比较 , 1)P<0.01;与模型组比较 , 2)P<0.01, 3)P<
0.05;n=10
4　讨论
本实验采用最常用的 CCl4肝损伤的动物模型 ,指标明确 , 重
复性好。 CCl4进入机体后 ,产生一系列的化学反应 ,使肝细胞坏
死 , 同时 ,肝脏由于 CCl4 攻击而受到损伤 , 使得转氨酶(ALT和AST)、炎症介质(NO, TNF-α和 IL-6等)异常增高 、SOD活性
降低。其中 , ALT和 AST是诊断肝胆系统疾病中应用最广泛的
酶 , 是判断肝细胞受损害程度的敏感指标;SOD可阻止 CCl4进入
机体后生成三氯甲基自由基破坏肝细胞;在肝损伤中 , 各种炎症
物质可诱导肝细胞产生并释放各种细胞因子 , TNF-α, IL-6是
重要的炎症反应介质 ,占有非常重要的地位 ,而 TNF-α在体内
也能诱导肝细胞合成 IL-6, 参与了肝炎的发病机制 [ 4 , 5] 。过量
的 NO本身可作为自由基或通过与自由基反应生成毒性更强的
自由基等造成肝损伤 ,表现为细胞毒作用。已有大量的研究表明
NO, TNF-α和 IL-6在多种原因引起的肝损伤中起重要作用 ,
因此抑制 NO, TNF-α和 IL-6的过量产生在肝损伤的防治过程
中有重要的意义。
实验研究结果表明 ,田基黄能明显抑制 CCl4 引起的小鼠血
清 ALT, AST活性的升高 , 增强机体抗氧化能力 , 加速自由基的清
除 , 抑制 NO, TNF-α和 IL-6的过量分泌 , 抑制 NO的细胞毒作
用 , 并对细胞因子介导的免疫性炎症反应性损伤具有保护作用 ,
可保护和修复肝细胞病理学损伤 , 从而保护肝脏的结构和功能。
提示这些可能是田基黄对 CCl4所致肝组织损伤具有防治作用的
部分药理作用机制。同时 , 本实验填补了田基黄在保肝 、抗肝炎
作用过程中 , 对一些细胞因子(NO, TNF-α和 IL-6)影响的相
关性研究的空白 ,同时为临床应用提供相关实验理论依据。
参考文献:
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科学技术出版社 , 1999:598.
[ 2 ] 　傅　芃 ,李廷钊 ,柳润辉 ,等.田基黄黄酮类化学成分的研究 [ J] .中
国天然药物 , 2004, 2(5):283.
[ 3 ] 　林久茂 ,陈小峰 , 林明和.田基黄的现代研究进展 [ J] .福建中医
药 , 2004, 35(6):64.
[ 4 ] 　任　红 ,张定风.病毒性肝炎肿瘤坏死因子和自细胞介索 6的改变
[ J] .中华内科杂志 , 1992, 31(6):344.
[ 5 ] 　黄健生 ,郭明秋.肿瘤坏死因子与乙型肝炎 [ J] .国外医学·流行病
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