全 文 ：夏枯草总黄酮提取方法及其在居群间
分布特征研究
廖 丽，郭巧生，刘 丽，刘 敏
（南京农业大学 中药材研究所，江苏 南京 ２１００９５）
［摘要］ 目的：探讨夏枯草总黄酮的最佳提取工艺及其在不同居群、不同部位间分布情况。方法：应用响应面
法确定最佳提取工艺，并对不同居群、不同部位中总黄酮含量进行测定。结果：液固比为２５∶１，以３５％的乙醇在８６
℃水温下回流提取３５ｈ，可获得夏枯草总黄酮的最佳提取效果。不同居群总黄酮含量变异幅度为 ２１６％ ～
１０２９％；叶片中总黄酮含量最高，根中最低；果穗去除种子后总黄酮含量平均高出２７６％。结论：响应面法对夏枯
草总黄酮的提取条件优化合理可行；不同居群间总黄酮含量表现出明显的地理分布差异。
［关键词］ 夏枯草；居群；总黄酮；响应面；分布特征
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０６０６５１０３
［收稿日期］ ２００７１１２８
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０７７２７３０）
［通讯作者］ 郭巧生，Ｔｅｌ：（０２５）８４３９６５９１，Ｅｍａｉｌ：ｇｑｓ＠
ｎｊａｕｅｄｕｃｎ
夏枯草 ＰｒｕｎｅｌａｖｕｌｇａｒｉｓＬ．为唇形科多年生草
本植物，干燥果穗入药，有清肝明目，消肿散结之功
效［１，２］。夏枯草主要含有三萜及其苷类、黄酮类、甾
醇及其苷类、香豆素、有机酸、挥发油及糖类等成分，
作者已对夏枯草不同居群间熊果酸和齐墩果酸含量
进行测定，结果将另文发表。为进一步评价夏枯草
药材质量及探讨夏枯草黄酮类化合物在居群间分布
规律，本研究利用响应面法对夏枯草总黄酮提取工
艺进行优化，在此基础上，对不同野生居群、不同植
株部位中夏枯草总黄酮含量进行测定和比较分析。
１ 材料与试剂
提取工艺试验所用夏枯草果穗源自江苏南京横
溪镇，其他来自全国１２个省（市），共３７份野生种
质资源，均为同一时期采收，经南京农业大学郭巧生
教授鉴定为夏枯草 Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ。材料来源见表 １。
对照品芦丁购于中国药品生物制品检定所（批号
１００８０２２００３０６）。
２ 方法
采用分光光度法［３４］，在５１０ｎｍ波长下测定吸光
度。按含量与吸光值相关关系求得芦丁对照品的标
准曲线回归方程，Ｙ＝０９６０Ｘ＋００５６，ｒ＝０９９９４。
表１ 供试材料来源表
Ｎｏ 样品来源 Ｎｏ 样品来源 Ｎｏ 样品来源
１ 南京高淳 １４ 云南文山 ２６ 安徽潜山
２ 南京汤山 １５ 江西吉安 ２７ 安徽合肥
３ 南京玄武 １６ 江西乐安 ２８ 安徽天长
４ 南京江浦 １７ 浙江湖州 ２９ 安徽滁州
５ 江苏仪征 １８ 甘肃成县 ３０ 安徽舒城
６ 江苏盱眙 １９ 福建建瓯 ３１ 安徽广德
７ 江苏溧阳 ２０ 福建武夷山 ３２ 安徽庐江
８ 江苏镇江 ２１ 广西桂林 ３３ 安徽贵池
９ 江苏宜兴 ２２ 湖南长沙 ３４ 安徽旌德
１０ 四川雅安 ２３ 贵州贵阳 ３５ 安徽和县
１１ 四川绵阳 ２４ 重庆丰都 ３６ 安徽安庆
１２ 四川甘孜 ２５ 安徽铜陵 ３７ 安徽含山
１３ 云南昆明
３ 结果与分析
３．１ 响应面实验确定最佳提取工艺
根据乙醇、提取时间、提取温度、液固比４单因
素试验结果，应用软件 ＤｅｓｉｇｎＥｘｐｅｒｔ（６０），选用中
心复合模型（ＣＣＤ），以夏枯草总黄酮得率为响应
值，进行四因素三水平共 ３０个试验点的响应面实
验。响应面实验因素与编码值见表２。结果表明，
不同因素水平下，夏枯草总黄酮得率差异显著，最高
可达５５０％，最低则为２６６％。经回归方差分析检
验，该模型达到极显著水平（Ｐ＜０００１），失拟项不
显著（Ｐ＝００９５），模型的 ｒ＝０９９５９，说明该模型
与实测值能较好地拟合，自变量与响应值之间线性
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第３３卷第６期
２００８年３月
中 国 中 药 杂 志
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Ｍａｒｃｈ，２００８
关系显著，可用于夏枯草总黄酮提取试验的预测。
提取温度、时间、乙醇浓度对总黄酮得率的影响较
大，达到极显著水平，液固比对其有显著影响。在总
作用因素中，一次项影响较大，而平方项和交互项影
响较小，说明因素间交互作用不显著。
表２ 夏枯草总黄酮提取响应面实验因子
乙醇浓度／％ 时间／ｈ 液固比 温度／℃
２０ １ １０∶１ ６０
３０ ２ １５∶１ ７０
４０ ３ ２０∶１ ８０
５０ ４ ２５∶１ ９０
６０ ５ ３０∶１ １００
通过上述软件分析，得出最优提取工艺为：乙醇
浓度３４７％、提取温度８６３９℃、提取时间３６４ｈ、
液固比２３８３∶１，此时黄酮得率可达５５１％。考虑
到实际操作的可行性，将乙醇浓度改为３５％，提取
时间变为３５ｈ，液固比为２５∶１，提取温度为８６℃。
为检验结果的可靠性，采用修正条件进行提取实验，
进行 ３次重复试验得到的响应值分别为 ５３７％，
５３１％和５２９％。与理论顶测值基本吻合，比单因
素试验最高提取率高出３３６％。
３．２ 不同居群夏枯草果穗中黄酮含量比较
由表３可知，夏枯草中黄酮含量在居群间存在
极显著差异，南京高淳所产含量最高，江西乐安最
低，样品中最高总黄酮含量是最低含量的４７６倍。
变异幅度为２１６％～１０２９％，平均值６９１％，变异
系数２７７％，说明夏枯草中总黄酮含量较高，且种
质筛选潜力巨大。
表３ 夏枯草不同居群总黄酮含量多重比较分析 ％
Ｎｏ 总黄酮得率 Ｎｏ 总黄酮得率 Ｎｏ 总黄酮得率
１ １０２９ａ １４ ４９９ｑ ２６ ７５０ｇｈ
２ ８３２ｄ １５ ４０７ｒ ２７ ７１５ｉｊｋｌ
３ ８８７ｃ １６ ２１６ｕ ２８ ７１１ｊｋｌｍ
４ ７６９ｆｇｈ １７ ３４８ｓ ２９ ６８３ｌｍ
５ ８９２ｃ １８ ８８０ｃ ３０ ６４３ｎｏ
６ ７４５ｈｉｊ １９ ２８５ｔ ３１ ５７６ｐ
７ ７３２ｈｉｊｋ ２０ ６７７ｍｎ ３２ ９２６ｂ
８ ８６８ｃ ２１ ７１１ｊｋｌｍ ３３ ５６６ｐ
９ ８１０ｄｅ ２２ ８０３ｄｅｆ ３４ ７０４ｋｌｍ
１０ ６３７ｏ ２３ ７８５ｅｆｇ ３５ ５１５ｑ
１１ ９５３ｂ ２４ ５２４ｑ ３６ ５０７ｑ
１２ ９３８ｂ ２５ ７９５ｅｆ ３７ ５００ｑ
１３ ７５３ｇｈ
注：差异显著性分析取α＝００５水平，同一列中含有不相同字母
者为差异显著
３．３ 夏枯草不同部位中黄酮含量的比较
３．３．１ 夏枯草各植株部位中黄酮含量 以福建武
夷山所产夏枯草为原料，对夏枯草根、茎、叶、果穗和
全草中黄酮含量进行测定，其结果分别为６４３０％，
６７３２％，１２１７％，６８７６％，１１０８％。说明叶片中
含量最高，其次是全草，根中含量最低。
３．３．２ 夏枯草果穗去除种子前后黄酮含量变化
以江苏南京、安徽合肥、贵池、铜陵所产夏枯草为原
料，对夏枯草果穗去除种子前后总黄酮含量进行比
较研究。去除种子前果穗中黄酮含量分别为
６３６％，５４２％，４１８％和５４４％，去除种子后总黄
酮含量依次变为８３７％，７１５％，５６６％和７９５％，
明显高于去除种子前含量，且平均高出２７６％。若
对夏枯草中黄酮类成分进行工业化提取，建议去除
果穗中种子。
４ 讨论
响应面法主要研究因子与响应值之间、因子与
因子之间的相互关系，并进行优化。它克服了正交
实验仅能处理离散的水平值，而无法找出整个区域
上最佳组合的缺陷。本研究应用响应面法优化出夏
枯草总黄酮最佳提取工艺，其结果为乙醇浓度
３５％，提取时间 ３５ｈ，液固比 ２５∶１，提取温度 ８６
℃，为工业化利用夏枯草资源，提取总黄酮奠定了理
论和实践依据。
有关夏枯草中黄酮提取与测定研究，已有零星
报道［５，６］，但仅限于采用分光光度法测定市售夏枯
草中黄酮含量，并未探讨夏枯草中黄酮提取工艺及
其在不同野生居群、部位间分布情况。谢鸣［５］等认
为甲醇提取效果优于乙醇，但本实验结果与之相反，
这可能是夏枯草微丸在炮制过程中某些性质发生变
化，使黄酮成分易溶于甲醇。同时，本实验测定的黄
酮含量均高于前人所测得结果［５，６］，这可能是实验
材料和提取方法不同造成的结果。由此可见，采用
响应面法能较好地提高黄酮提取率。
夏枯草广泛分布于我国各地，受气候、土壤等环
境因素影响，表现出明显的地理分布差异。随地理
纬度从南到北分布，平均气温逐步降低，光照变长，
总黄酮含量总体呈逐渐升高的趋势。甘肃、江苏、安
徽所产含量较高，而江西、福建所产含量偏低，这与
大豆种子中异黄酮积累相类似［７］。云贵地区虽纬
度较低，黄酮含量却不低，这可能是该地区有较多漫
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射光，可促进黄酮类化合物的积累，而后期降解作
用减缓［８］。除环境因素外，遗传因素也可能是造成
夏枯草黄酮含量差异显著的主要原因，对此可从分
子生物学水平进一步研究。
２００５年版药典规定夏枯草以果穗入药，本实验
结果表明，叶片中黄酮含量远高于果穗中黄酮含量，
若对夏枯草中黄酮进行开发利用，可以考虑采收一
定成熟度的叶片，并可进一步探讨不同部位、不同生
长时期叶片中总黄酮含量的变化，以确定最佳采收
期和采收叶片部位。
［参考文献］
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势［Ｊ］．大豆科学，１９９７，１６（４）：２９８．
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响［Ｊ］．植物资源与环境，１９９８，７（３）：１．
ＳｔｕｄｙｏｎｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｉｎｖａｒｉｏｕｓｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｏｆＰｒｕｎｅｌａｖｕｌｇａｒｉｓ
ＬＩＡＯＬｉ，ＧＵＯＱｉａｏｓｈｅｎｇ，ＬＩＵＬｉ，ＬＩＵＭｉｎ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎａｌＭａｔｅｒｉａｌｓ，ＮａｎｊｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｏｆＰｒｕｎｅｌａｖｕｌｇａｒｉｓ．ｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｐｏｐ
ｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｂｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄ（ＲＳＭ）．Ｔｈｅａｍｏｕｎｔｓｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｗｅｒｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗａｓｕｓｉｎｇ３５％ ｅｔｈａｎｏｌａｔ２５ｔｉｍｅｓｏｆｓａｗｐｌｅｖｏｌｕｍｅ，
ｒｅｆｌｕｘｉｎｇａｔ８７℃ ｆｏｒ３５ｈ．Ｔｈｅａｍｏｕｎｔｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｗａｓ２１６％１０２９％ ｉｎＰ．ｖｕｌｇａｒｉｓ．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ
ｉｎｌｅａｆｗｈｉｌｅｔｈａｔｉｎｒｏｏｔｗａｓｔｈｅｌｏｗｅｓｔ．Ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｓｐｉｋｅａｆｔｅｒｒｅｍｏｖｅｄｓｅｅｄｓｗａｓ２７６％ ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｅｏｎｅｒｅ
ｓｅｒｖｅｄｓｅｅｄｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅＲＳＭｗａｓｆｅａｓｉｂｌｅｆｏｒｏｐｔｉｍｕｍｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｎｄｔｈｅａｍｏｕｎｔｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｓｈｏｗｅｄａｓｉｇｎｉｔｉｃａｎｔ
ｒｅｇｉｏｎａｌｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｐａｔｅｒｎｉｎｕａｒｉｏｕｓｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｏｆＰ．ｖｕｌｇａｒｉｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｐｒｕｎｅｌａｖｕｌｇａｒｉｓ；ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄ；ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ
［责任编辑 王亚君］
［收稿日期］ ２００７０８１６
［基金项目］ 国家重点基础研究发展计划（２００６ＣＢ５０４７００）；国家高新技术研究发展计划（２００７ＡＡ０２Ｚ１０４）
［通讯作者］ 黄璐琦，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１２９５５，Ｅｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｌｕｑｉ＠２６３．ｎｅｔ
丹参毛状根化学成分稳定性研究
吕冬梅１，袁 媛１，张 东１，黄璐琦１，梁日欣１，邱德有２
（１．中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００；２．中国林业科学院，北京 １０００９１）
［摘要］ 目的：研究丹参毛状根的化学物质稳定性，为进一步探索丹参毛状根作为原料药的可行性提供研究
基础。方法：ＰＣＲ扩增１０批丹参毛状根的ｒｏｌＡ基因，ＨＰＬＣ指纹图谱分析１０批丹参毛状根的化学成分稳定性。结
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第３３卷第６期
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