全 文 ：ＨＰＬＣ同时测定番荔枝子中３种番荔枝内酯的含量
李建华１，２，邹节明１，２，云　强２，钟小清２
（１．北京中医药大学 中药学院，北京 １００１０２；
２．桂林三金药业股份有限公司，广西 桂林 ５４１００４）
［收稿日期］　２００９０１１４
［基金项目］　国家（８６３）高技术研究发展计划项目
［通信作者］　邹节明，Ｔｅｌ：（０７７３）５８４２５８８，Ｅｍａｉｌ：ｚｊｍ＠ｓａｎｊｉｎ．
ｃｏｍ．ｃｎ
　　番荔枝子为番荔枝科植物番荔枝 Ａｎｎｏｎａｓｑｕａ
ｍｏｓａＬ．的干燥成熟种子。作为消积杀虫类药材收
载于《广东省中药材标准》２００４年版，主要用于恶疮
肿痛，驱虫。标准中只有性状鉴别、显微鉴别和薄层
色谱鉴别，尚缺乏对主要指标性成分的含量控制标
准［１］。
近年来，国内外学者对番荔枝子的化学成分进
行了深入研究，从中分离得到３０多个番荔枝内酯类
化合物［２］。由于此类化合物具有极强的抗肿瘤活
性和独特的作用机制，因此，被认为是新型抗肿瘤药
物的希望之所在，成为抗癌活性化合物研究的热
点［３］。莫垂林、阿诺宁Ⅰ和阿诺宁Ⅵ均属番荔枝内
酯类化合物，为番荔枝子的主要抗肿瘤活性成
分［４］。参照ＨＰＬＣ测定番荔枝科植物中番荔素含量
的测定方法［５］，采用梯度洗脱方式的反相高效液相
色谱法同时测定了番荔枝子中上述３种番荔枝内酯
类成分的含量，为更全面地评价其质量提供依据。
１　仪器与试药
美国Ｗａｔｅｒｓ２６９０型高效液相色谱仪，９９６ＤＡＤ
检测器，Ｅｍｐｏｗｅｒ液相色谱工作站；乙腈为色谱纯；
水为超纯水，甲醇为分析纯。
对照品莫垂林、阿诺宁Ⅰ和阿诺宁Ⅵ（自制，
ＨＰＬＣ检测纯度 ＞９８％，归一化法）；番荔枝子药材
于２００８年９月分别采自广东、广西和海南的不同种
植基地，经桂林三金药业股份有限公司邹节明教授
鉴定为番荔枝科植物番荔枝 Ａ．ｓｑｕａｍｏｓａ的干燥成
熟种子。
２　方法与结果
２．１　色谱条件　色谱柱：ＷａｔｅｒｓＣ１８（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ）；以流动相乙腈Ａ，以水Ｂ，进行梯度洗
脱，０～１５，６７％Ａ；１５～３５ｍｉｎ，６７％ ～８７％Ａ流速
１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温３０℃；检测波长２１０ｎｍ；进样
量５μＬ；对照品及样品的ＨＰＬＣ图见图１。
Ａ．混合对照品；Ｂ．番荔枝种子；
１．莫垂林；２．阿诺宁Ⅰ；３．阿诺宁Ⅵ。
图１　混合对照品（Ａ）及样品的ＨＰＬＣ图
２．２　对照品溶液制备　精密称取对照品莫垂林
２３５ｍｇ、阿诺宁Ⅰ３２２７ｍｇ和阿诺宁Ⅵ３８８ｍｇ置
于５０ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，配制成
莫垂林 、阿诺宁Ⅰ和阿诺宁Ⅵ分别为 ００４７，
０６４５４，００７７６ｇ·Ｌ－１的混合对照品溶液。
２．３　供试品溶液的制备　精密称取番荔枝子干燥
粉末１ｇ，加２０ｍＬ的石油醚（３０～６０℃）回流提取
２ｈ，滤过，取药渣，加氯仿２０ｍＬ回流提取２次，每
次１ｈ，滤过，合并提取液，蒸干，用甲醇溶解，并定容
为５０ｍＬ，作为供试品溶液。
２．４　线性关系的考察　精密吸取混合对照品溶液
０５，１，２，３，４，５μＬ分别进样测定，以对照品的进样
量（μｇ）为横坐标Ｘ，峰面积（Ａ）为纵坐标 Ｙ，绘制标
准曲线，分别得莫垂林回归方程 Ｙ＝４８７７×１０５Ｘ＋
２６４１×１０３（ｒ＝０９９９９）、阿诺宁Ⅰ回归方程为Ｙ＝
１０１９×１０６Ｘ＋１４１×１０３（ｒ＝０９９９９）、阿诺宁Ⅵ
回归方程 Ｙ＝５７３７×１０５Ｘ＋３０９３×１０３（ｒ＝
０９９９９）。
结果表明莫垂林在００２３５～０２３５μｇ、阿诺宁
Ⅰ在０３２３～３２３μｇ、阿诺宁Ⅵ在００３８８～０３８８
μｇ与峰面积呈良好的线性关系。
２．５　精密度试验　取同一混合对照品溶液连续进
·５４０１·
第３４卷第８期
２００９年４月
　　　　　　 　 　 　 　 　　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　８
　Ａｐｒｉｌ，２００９
样６次，每次５μＬ，测其峰面积，结果莫垂林、阿诺
宁Ⅰ和阿诺宁Ⅵ的 ＲＳＤ分别为 ０２９％，０５４％，
０６０％，表明仪器精密度良好。
２．６　重复性试验　取同一批号样品约１ｇ，６份，精
密称定，按供试品溶液的制备方法制备样品，测定。
结果莫垂林、阿诺宁Ⅰ和阿诺宁Ⅵ的平均含量分别
为０１２７１％，１０２０１％，０１８２０％，ＲＳＤ分别为
１４７％，１９６％，１２２％。
２．７　稳定性试验　取同一供试品溶液分别在１，２，
４，８，１６，２４ｈ进样测定，测得莫垂林、阿诺宁Ⅰ和阿
诺宁Ⅵ的 ＲＳＤ分别为１２６％，１３０％，１５８％。表
明样品溶液在２４ｈ内稳定性良好。
２．８　加样回收率试验　取已知含量的样品，约０５
ｇ，平行６份，精密称定，分别精确加入混合对照品溶
液１ｍＬ（莫垂林、阿诺宁Ⅰ和阿诺宁Ⅵ分别为
０６２１，５１７２，０９４８ｇ·Ｌ－１），按２．３项供试品溶液
制备方法操作和２．１项色谱条件进行测定，计算回
收率，见表１。
表１　混合对照品的加样回收率
对照品
取样量
／ｇ
样品中量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
莫垂林 ０５１０４ ０６４８７ １２６０４ ９８５ ９９３ １８
　 ０５０２７ ０６３８９ １２６３０ １００５ 　 　
　 ０４９９８ ０６３５２ １２５５６ ９９９ 　 　
　 ０５１８０ ０６５８４ １２６０８ ９７０ 　 　
　 ０５０４６ ０６４１３ １２７４１ １０１９ 　 　
　 ０５１３９ ０６５３２ １２６０５ ９７８ 　 　
阿诺宁Ⅰ ０５１０４ ５２０６６ １０２８５５ ９８２ ９８８ １１
　 ０５０２７ ５１２８０ １０２５３４ ９９１ 　 　
　 ０４９９８ ５０９８５ １０１６１９ ９７９ 　 　
　 ０５１８０ ５２８８８ １０４９７０ １００７ 　 　
　 ０５０４６ ５１４７４ １０２４７０ ９８６ 　 　
　 ０５１３９ ５２４２３ １０３１０９ ９８０ 　 　
阿诺宁Ⅵ ０５１０４ ０９２８９ １８７４１ ９９７ ９９６ １１
　 ０５０２７ ０９１４９ １８６４８ １００２ 　 　
　 ０４９９８ ０９０９６ １８４１５ ９８３ 　 　
　 ０５１８０ ０９４２８ １８８８０ ９９７ 　 　
　 ０５０４６ ０９１８４ １８７７８ １０１２ 　 　
　 ０５１３９ ０９３５３ １８６９１ ９８５ 　 　
　　注：加入莫垂林为０６２１ｍｇ，阿诺宁Ⅰ为５１７２ｍｇ，阿诺宁Ⅵ为
０９４８ｍｇ。
３　讨论
使用９９６ＤＡＤ检测器对３种番荔枝内酯进行全
波长扫描，结果发现它们的最大紫外吸收波长均为
２１０ｎｍ，故选择２１０ｎｍ为３种成分含量测定的最佳
测定波长。
在筛选流动相时，选择了梯度洗脱方式对样品
进行含量测定，实验结果表明所选的色谱条件不仅
缩短了各组分的保留时间，而且该方法重现性好、灵
敏度高、分离度好。
样品测定 取１０个不同种植基地的的番荔枝子
样品适量，按２．３项供试品溶液制备方法操作和２．
１项色谱条件进行含量测定，见表２。
表２　不同种植基地的番荔枝种子样品的质量分数
％　
产地 莫垂林 阿诺宁Ⅰ 阿诺宁Ⅵ
广东湛江　 ０１２７１ １０２０１ ０１８２０
广东惠州　 ００６０４ ０８８５１ ０１２４８
广东东莞　 ００７２５ ０７５２４ ０１６５６
广东汕头　 ００８５９ ０９７８２ ０１０２２
海南海口　 ０１２８８ １４６７２ ０２０２３
海南文昌　 ００６６２ １７８１７ ０１００９
海南三亚　 ００７５８ １１０５０ ０１２０７
海南儋州　 ００７０４ １２２１７ ０１５４６
广西北海　 ００９７８ ０６２７３ ０１８０５
广西防城港 ００５８１ ０７０２８ ００８４９
　　番荔枝种子中含油脂量很高，需进行脱脂处理，
试验中筛选了石油醚（３０～６０℃）、石油醚（６０～９０
℃）和正己烷 ３种试剂，结果发现石油醚（３０～６０
℃）既有良好的脱脂效果，又能保留目标成分。
本实验采用ＲＰＨＰＬＣ对１０个不同种植基地的
番荔枝子中莫垂林、阿诺宁Ⅰ和阿诺宁Ⅵ ３种化学
成分进行含量测定，结果发现不同种植基地的番荔
枝子中３种成分的含量存在较大的差异。
［参考文献］
［１］　广东省食品药品监督管理局．广东省中药材标准［Ｓ］．２００４：
１９３．
［２］　余竞光，罗秀珍，孙　兰，等．番荔枝种子化学成分研究［Ｊ］．药
学学报，２００５，４０（２）：１５３．
［３］　李艳芳．番荔枝内酯抗肿瘤作用研究进展［Ｊ］．中国药理学通
报，２００４，２０（３）：２４５．
［４］　谢冰芬，冯公侃，朱孝峰，等．阿诺宁的抗瘤作用研究［Ｊ］．癌
症，２００２，２１（４）：３７９．
［５］　孙　兰，余竞光，等．ＨＰＬＣ法测定番荔枝科植物中番荔素含量
［Ｊ］．药学学报，２００１，３６（９）：６８３．
［责任编辑　鲍　雷］
·６４０１·
第３４卷第８期
２００９年４月
　　　　　　 　 　 　 　 　　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　８
　Ａｐｒｉｌ，２００９