全 文 ：金银花不同干燥技术 ＨＰＬＣ指纹图谱研究
熊　艳，高慧敏，王智民，朱晶晶
（中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００）
［摘要］　目的：对不同干燥技术所得金银花进行 ＨＰＬＣ指纹图谱的比较研究。方法：ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ），乙腈０４％的磷酸水溶液梯度洗脱，检测波长２３８ｎｍ，柱温３０℃，流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１。结果：建立了不同干燥技术
处理的金银花高效液相指纹图谱，确定了１７个共有峰，但是成分的相对含量有明显差异。结论：利用 ＨＰＬＣ指纹图谱分析法
可较全面的反映不同干燥技术处理的金银花间的差异。
［关键词］　金银花；干燥技术；绿原酸；木犀草苷；ＨＰＬＣ指纹图谱
［收稿日期］　２００８０９２１
［基金项目］　国家“十一五”科技支撑计划项目（２００６ＢＡＩ０９Ｂ０５９）；
国家自然科学基金项目（３０６７２６０１）
［通信作者］　王智民，Ｔｅｌ／Ｆａｘ：（０１０）８４０１４１２８，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｍｗ１２３＠
２６３．ｎｅｔ
［作者简介］　熊艳，湖南中医药大学药学院２００６级研究生
　　金银花（ＦｌｏｓＬｏｎｉｃｅｒａｅ）为忍冬科植物忍冬
ＬｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａＴｈｕｎｂ．的干燥花蕾［１］，是药食两用
的大宗中药材，富含绿原酸等有机酸类，木犀草苷等
黄酮类，环烯醚萜及其苷类化合物等多种有效成
分［２］。在忍冬生长发育过程中，金银花的最佳采收
时间的确定和初加工方法的选择是花类药材 ＧＡＰ
实践中的关键问题之一。由于忍冬品种多、开花次
数多（可达４～６次）、花期长，采摘鲜运困难，因此
金银花的产地加工，直接影响到药材的产量、品质以
及深度开发。目前金银花的干燥方法以晒干或阴晾
干最为常见，但其理论依据是什么，以上２种技术是
否为最佳干燥方法，不同干燥技术对金银花有效成
分究竟有多大影响，这些问题亟待解决。鉴于此，本
研究以二白期金银花为材料，通过 ＨＰＬＣ指纹图谱
和绿原酸、木犀草苷等成分含量测定，比较不同干燥
技术对山东、河南２个道地产地金银花品质的影响，
在此基础上对其内在质量进行比较分析，以期筛选
适于金银花产地加工的干燥技术，为提高和控制金
银花药材质量提供理论依据。
１　仪器与试剂
ＷａｔｅｒｓＡｌｉａｎｃｅ高效液相色谱仪（包括 ２６９５
ＳｅｐａｒａｔｉｏｎｓＭｏｄｕｌｅ四元泵、在线真空脱气机、自动进
样器、柱温箱、２９９６型光电二极管阵列检测器，Ｅｍ
ｐｏｗｅｒ色谱工作站）。ＭＥＴＴＬＥＲＡＥ２４０分析天平；
ＫＱ１００型超声波清洗器。
对照品绿原酸（批号 １１０７５３２００４１３）、木犀草
苷（批号１１１７２０２００６０４）购自中国药品生物制品检
定所，芦丁为本实验室所分离得到，并经波谱分析鉴
定结构。乙腈（色谱纯，美国 Ｆｉｓｈｅｒ），水为屈臣氏
蒸馏水，其余试剂均为分析纯。４４批金银花分别于
２００７年５月采自山东平邑；２００７年６月采自河南封
丘（表１），经中国中医科学院中药研究所何希荣老
师鉴定为忍冬科植物忍冬Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ的干燥花蕾或
带初开的花。
表１　金银花药材样本
Ｎｏ． 干燥方法 产地
Ｓ１～Ｓ４ 阴干　　 山东
Ｓ５～Ｓ８ 晒干　　 山东
Ｓ９～Ｓ１２ 蒸晒　　 山东
Ｓ１３～Ｓ１６ 硫熏　　 山东
Ｓ１７～Ｓ２０ 微波　　 山东
Ｓ２１～Ｓ２４ 杀青烘干 山东
Ｓ２５～Ｓ２８ 阴干　　 河南
Ｓ２９～Ｓ３２ 晒干　　 河南
Ｓ３３～Ｓ３６ 蒸晾　　 河南
Ｓ３７～Ｓ４０ 蒸烘　　 河南
Ｓ４１～Ｓ４４ 烘干　　 河南
２　方法与结果
２．１　色谱条件　ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ）；流动相为乙腈（Ａ）０４％（Ｂ）的磷酸水
溶液梯度洗脱，洗脱时间６０ｍｉｎ。０～２０ｍｉｎ，３％～
１５％ Ａ；２０～４５ｍｉｎ，１５％ ～２４％ Ａ；４５～５５ｍｉｎ，
２４％～４０％ Ａ；５５～６０ｍｉｎ，４０％ ～３％ Ａ。检测波
长２３８ｎｍ；柱温３０℃；流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１；进样量１０
μＬ［３］（图１）。
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Ａ．对照品；Ｂ．山东金银花药材（从上至下依次为杀青烘干、
微波、硫熏、蒸晒、晒干、阴干等干燥方法）；Ｃ．河南金银花
药材（从上至下依次为阴干、晒干、烘干、蒸烘、蒸晾等干燥
方法）；１．绿原酸；２．芦丁；３．木犀草苷。
图１　对照品和样品的ＨＰＬＣ图
２．２　供试品溶液的制备　称取山东金银花粉末约
０４ｇ，置于１００ｍＬ锥形瓶中，加５０％甲醇５０ｍＬ，
超声处理２０ｍｉｎ，放冷，滤纸滤过，取续滤液过０２２
μｍ滤膜，取续滤液进样。
２．３　样品测定　精密吸取对照品溶液与供试品溶
液各１０μＬ，分别注入液相色谱仪，记录６０ｍｉｎ的色
谱图，即得。
２．４　精密度考察　取同一供试品溶液，连续测定６
次，将 ６次测定图谱转化为 ＡＩＡ格式后依次导入
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统２００４Ａ版》软
件，输出 １７个共有峰保留时间的 ＲＳＤ０１１％ ～
０２６％，峰面积 ＲＳＤ为０４％ ～２８％，仪器精密度
良好。
２．５　稳定性考察　取同一供试品溶液，于０，２，６，
１０，１６，１８ｈ测定，测定图谱转化为 ＡＩＡ格式后依次
导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统 ２００４Ａ
版》软件，输出１７个共有峰面积的ＲＳＤ为０５３％～
２８％，证明样品在１８ｈ内稳定。同时６次分析所
得色谱图相似度大于０９９。
２．６　重复性考察　取同一批样品６份，按供试品溶
液的制备方法操作，测定，测定图谱转化为 ＡＩＡ格
式后依次导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
２００４Ａ版》软件，输出１７个共有峰的保留时间和峰
面积的 ＲＳＤ分别为 ０１９％ ～０３１％和 ０４１％ ～
２６％，证明方法的重复性良好。６个样品分析所得
色谱图相似度大于０９５，证明分析方法和提取工艺
的稳定性和可靠性。
２．７　聚类分析　利用《中药色谱指纹图谱相似度
评价系统２００４Ａ版》软件将河南各样品的所有峰面
积导入 ＳＰＳＳ１３０软件，然后采用系统聚类的 Ｑ型
聚类法，可将样品划分为３大类（图２），即阴干为一
类；烘干、晒干为一类；蒸晾、蒸烘为一类。该聚类结
果显示晒干和烘干，蒸晾和蒸烘之间差异表现不明
显；所划分的３类样品间差异较大。
图２　河南产不同加工方法金银花样品聚类图
３　讨论
分别比较了甲醇、５０％甲醇、７５％乙醇３种溶剂
对金银花药材的提取效果，结果表明５０％甲醇提取
后，色谱峰较多，效果较佳，故选择５０％甲醇为提取
溶剂。
根据 ＤＡＤＵＶ１９０～４００ｎｍ扫描结果，选择
２１０，２３８，２５４，２６０，３２７，３５５ｎｍ等金银花中主要成
分的特征吸收波长比较，发现选取２３８ｎｍ下，检测
到的色谱峰最多，基线平缓，干扰峰少，基本能够反
应组分的全貌，故选择２３８ｎｍ为检测波长。
对实验中山东６种干燥方法处理后的金银花进
行绿原酸（峰１）、芦丁（峰４）、木犀草苷（峰５）含量
测定。杀青烘干者绿原酸含量最高（６９０％），蒸晒
（５７６％）、晒干（４９７％）、硫熏（４７１％）、微波
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（４１０％）、阴干（１９３％）依次降低。芦丁含量在
０４４％ ～０７１％。木犀草苷含量在 ０２８％ ～
０５３％。金银花中的主要有效成分之一是绿原酸，
它的分子结构中具邻位酚羟基，易在多酚氧化酶的
作用下氧化缩合成高分子有色物质。因此，在一定
温度范围内，随干燥温度的升高，多酚氧化酶活性增
强，绿原酸的氧化与缩合加速，其含量不断降低。当
温度进一步升高，干燥时间相应缩短，促使多酚氧化
酶快速变性，结果绿原酸氧化缩合受到抑制，含量不
再降低；但绿原酸是多酚羟基酸性物质，热稳定性
差，也会因温度过高而分解损失［４］。杀青烘干较其
他３种条件下使金银花鲜样在短时间内快速升温，
多酚氧化酶迅速失活，从而使这种技术加工而成的
金银花成品中绿原酸含量较高，而其他干燥技术，如
晒干等是缓慢升温，多酚氧化酶活性先增强而后再
被灭活，使金银花中绿原酸被氧化，绿原酸分解损失
较大，因而绿原酸含量相对较低。芦丁、木犀草苷为
黄酮类，结构较稳定且含量较低。因此不同干燥方
法对芦丁、木犀草苷含量影响不是很大。
通过２４批山东金银花样品的 ＨＰＬＣ图和２０批
河南金银花样品的 ＨＰＬＣ图发现，同一产地同一品
种同一时间采收不同干燥方法的金银花成分之间既
有相关性，又有区别。其中所含化学成分较相似；但
由于干燥方法因素的影响，各色谱峰（峰２，３）的相
对峰面积相差很大，即成分的相对含量有明显差异，
特别是山东硫熏法较其他几种干燥方法在１５ｍｉｎ之
前出现了许多新的色谱峰，部分色谱峰含量明显变
大，提示硫熏法可能会导致金银花样品中成分的改
变。因此在金银花药材的利用上，要注意产地加工
对药材质量的影响。
金银花药材质量受产地、采收期、品种及干燥方
法的影响较大。本研究建立了山东、河南２个道地
产地，同一采收期同一品种不同干燥方法金银花药
材的高效液相指纹图谱分析方法，方法稳定、可靠，
重现性好，为筛选适于金银花产地加工的干燥技术，
提高和控制金银花药材质量提供理论与技术依据。
［参考文献］
［１］　中国药典．一部［Ｓ］．２００５：１５２．
［２］　石　钺，石任兵，陆蕴如．我国药用金银花资源、化学成分及药
理研究进展［Ｊ］．中国药学杂志，１９９９，３４（１１）：７２４．
［３］　王跃飞，文红梅，程建明．金银花药材 ＨＰＬＣ指纹图谱研究
［Ｊ］．南京中医药大学学报，２００６，２２（３）：１２８．
［４］　彭菊艳，龚月桦，王俊儒，等．不同干燥技术对金银花药用品质
的影响［Ｊ］．西北植物学报，２００６，２６（１０）：２０４４．
ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｎＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｐｒｏｆｉｌｅｓｏｆＬｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａｂｕｄ
ｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｖａｒｉｏｕｓｄｒｙｎｅｓｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
ＸＩＯＮＧＹａｎ，ＧＡＯＨｕｉｍｉｎ，ＷＡＮＧＺｈｉｍｉｎｇ，ＺＨＵＪｉｎｇｊｉｎｇ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆＬｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａｂｕｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄｂｙｄｉｆｅｒｅｎｔｄｒｙｎｅｓｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．
Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆＬ．ｊａｐｏｎｉｃａｂｙｖａｒｉｏｕｓｄｒｙｎｅｓｓｐｒｏｃｅｓｓ．Ｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄ
ｏｎａＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）．Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌａｎｄｗａｔｅｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０４％ Ｈ３ＰＯ４ｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｓｗｉｔｈｇｒａｄｉ
ｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓｓｅｔａｔ１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓｓｅｔａｔ３０℃，ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓａｔ
２３８ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｐｒｏｆｉｌｅｓｏｆＬ．ｊａｐｏｎｉｃａｆｒｏｍｓｉｘｄｉｆｅｒｅｎｔｄｒｙｎｅｓｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ａｔｏｔａｌｏｆ１７
ｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄ，ｂｕｔｔｈｅｉｒｃｏｎｔｅｎｔｓｆｒｏｍｖａｒｉｏｕｓｄｒｙｎｅｓｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｅｒｅｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒ
ｐｒｉｎｔｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗａｓｏｎｅｏｆｐｏｔｅｎｔｉａｌＰｒｏｃｅｓｓＡｎａｌｙｔｉｃａｌＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（ＰＡＴ）ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｄｒｙｎｅｓｓｐｒｏｃｅｓｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｌｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａ；ｄｒｙｎｅｓｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅ；ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄ；ｌｕｔｅｏｌｏｓｉｄｅ；ＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｐｒｏｆｉｌｅｓ
［责任编辑　王亚君］
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