全 文 ：甜菜碱促进小鼠脾淋巴细胞增殖作用的
钙通道机制研究
季宇彬１，２，高世勇１，２，冯小燕１，２，何立巍１，２
（１．哈尔滨商业大学 生命科学与环境科学研究中心 药物研究所 博士后科研工作站，黑龙江
哈尔滨 １５００７６；２．国家教育部 抗肿瘤天然药物工程研究中心，黑龙江 哈尔滨 １５００７６）
［摘要］ 目的：研究甜菜碱促进小鼠脾淋巴细胞的增殖作用与钙通道的关系。方法：采用清洁级 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠分离小鼠
脾淋巴细胞后体外培养的方式获得小鼠脾淋巴细胞，分为阴性对照组、ＣｏｎＡ组、甜菜碱００４，０４，４，２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１组。分别
采用ＭＴＴ法观察甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞增殖的作用，流式细胞术测定甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞周期的变化，激光共聚焦扫
描显微镜观察甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞内钙浓度的变化及加入不同钙通道阻滞剂后细胞内钙浓度的变化。结果：４，２０ｍｍｏｌ
·Ｌ－１甜菜碱体外作用于小鼠脾淋巴细胞１２ｈ促进小鼠脾淋巴细胞增殖，００４，０４，４，２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１甜菜碱分别体外作用于
小鼠脾淋巴细胞２４，４８ｈ均促进小鼠脾淋巴细胞增殖，以４ｍｍｏｌ·Ｌ－１甜菜碱作用２４ｈ效果最好；４ｍｍｏｌ·Ｌ－１甜菜碱作用小
鼠脾淋巴细胞４，６，１８，２４ｈ能促使小鼠脾淋巴细胞由Ｇ０／Ｇ１期进入Ｓ期，并以１８ｈ效果最为明显；４ｍｍｏｌ·Ｌ
－１甜菜碱作用于
淋巴细胞６，１２，１８ｈ，脾淋巴细胞内Ｃａ２＋浓度明显升高（Ｐ＜００１），以６ｈ效果最明显；钙通道阻滞剂硝苯地平、地尔硫卓、咪
贝地尔、金雀异黄素对甜菜碱升高小鼠脾淋巴细胞内钙离子浓度没有影响，而维拉帕米、新霉素、肝素、普鲁卡因能阻断甜菜
碱升高小鼠脾淋巴细胞内钙离子浓度。结论：甜菜碱通过升高小鼠脾淋巴细胞内钙离子浓度而促进小鼠脾淋巴细胞由Ｇ０／Ｇ１
期进入Ｓ期，促小鼠脾淋巴细胞增殖的作用。细胞内钙离子浓度升高主要通过２个途径：影响Ｇ蛋白介导的Ｌ型电压门控钙
通道的α１亚单位而引起外钙内流；影响胞内钙库的ＩＰ３Ｒ钙通道和ＲｙＲ钙通道而引起内钙释放。
［关键词］ 甜菜碱；小鼠脾淋巴细胞；细胞周期；细胞内Ｃａ２＋；钙通道
［收稿日期］ ２００８１１１０
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０４００３５２）；教育部重点项目
（２０５０４５）；黑龙江省自然科学基金（Ｄ２００６１１）；黑龙江省研究生创新
基金（ＹＪＳＣＸ２００６００７７ＨＳＤ）
［通信作者］ 季宇彬，教授，博士生导师，研究方向为肿瘤药理学
的研究。Ｅｍａｉｌ：ｓｙｇａｏ２００２＠１６３．ｃｏｍ
甜菜碱本身是动物体内的代谢中间产物，经大
量试验证明，甜菜碱及其盐类无毒、无害、无污
染［１］，其小鼠半数致死量（ＬＤ５０）在 １１０００ｍｇ·
ｋｇ－１，对动物无致畸、致癌、致突变作用，是公认的安
全物质［２］，且能促进脂肪代谢，促进蛋白质的合
成［３］，有关报道指出甜菜碱有增强机体免疫力的作
用［４］。淋巴细胞（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）是免疫系统中较重要
的细胞，在免疫应答中起关键作用。但是淋巴细胞
在体外不能自行增殖，只有在某些有活性的有丝分
裂原刺激下才能增殖，如美洲商陆丝裂原（ＰＷＭ）、
刀豆蛋白（ＣｏｎＡ）、脂多糖（ＰＡＳ）等［５］。甜菜碱作为
一种有增强机体免疫力作用的物质，是否与促进淋
巴细胞增殖有一定的关系，目前还未见相关报道。
本研究从促进淋巴细胞增殖角度探讨甜菜碱的免疫
增强作用，从淋巴细胞内Ｃａ２＋浓度的变化及Ｃａ２＋来
源于哪些离子通道角度深入揭示甜菜碱免疫增强作
用的分子机制。
１ 材料
１．１ 动物 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，雌雄兼用，体重（２０±
２０）ｇ，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供，
动物合格证号ＳＣＸＫ（黑）２００６００９。
１．２ 药物 甜菜碱（纯度９５％，浙江绿成生物技术
有限公司，批号 １０８５２０）；皂素（ｓａｐｏｎｉｎ）（Ｆｌｕｋａ公
司）；胎牛血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司）；ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ公
司）；ＣｏｎＡ，ＭＴＴ，核糖核酸酶，ＰＩ，Ｆｌｕｏ３／ＡＭ，硝苯
地平（Ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ），地尔硫卓（Ｄｉｌｔｉａｚｅｍ），维拉帕米
（Ｖｅｒａｐａｍｉｌ），咪贝地尔（Ｍｉｂｅｆｒａｄｉｌ），金雀异黄素
（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ），普鲁卡因（Ｐｒｏｃａｉｎｅ），均为 Ｓｉｇｍａ公司
产品；肝素（ｈｅｐａｒｉｎ），新霉素（Ｎｅｏｍｙｃｉｓｕｌｆａｔｅ），均
为ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ公司产品。
１．３ 药品的配制 ＣｏｎＡ配制：称取 ＣｏｎＡ２５ｍｇ
溶于５０ｍＬＲＰＭＩ１６４０中，微孔滤膜过滤，作为母液
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备用。取５ｍＬ母液用 ＲＰＭＩ１６４０稀释到５０ｍＬ作
为工作液用于实验。甜菜碱配制：取甜菜碱５０ｍｇ，
溶于１０ｍＬＲＰＭＩ１６４０中，微孔滤膜过滤，作为母液
备用。使用时做适当稀释。
１．４ 仪器 ＣＯ１５０型 ＣＯ２培养箱（美国 ＮＢＳ公
司）；ＬｅｉｃａＳＰ２型激光共聚焦显微镜（德国 Ｌｅｉｃａ公
司）；ＥＰＩＣＳＸＬＭＣＬ型流式细胞仪（美国 Ｂａｃｋｍａｎ
Ｃｏｕｌｔｅｒ公司）；ＯｌｙｍｐｕｓＩＸ７０型倒置显微镜（Ｏｌｙｍ
ｐｕｓ公司）；Ｂｉｏ６８０型酶标仪（美国ＢｉｏＲａｄ公司）。
２ 方法
２．１ 小鼠脾淋巴细胞分离制备 以颈椎脱臼法处
死小鼠，用７５％乙醇浸泡小鼠１５ｍｉｎ，沿腹腔中线
剪开小鼠胸腔，取出脾脏置于培养皿中，剪去脂肪和
筋膜组织，用ＲＰＭＩ１６４０培养液漂洗，用注射器芯轻
轻挤压，用２００目尼龙网过滤到玻璃离心管中，无菌
ＰＢＳ，１５００ｒ·ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ洗涤细胞２次，加入
０８３％的氯化胺到洗过的细胞中，静置５ｍｉｎ，以除
去血红细胞，用 ＲＰＭＩ１６４０培养液离心洗涤细胞２
次，以除去剩余的氯化胺，将上述收集到的脾脏细胞
置于玻璃培养瓶中，在３７℃，５％ＣＯ２培养箱中静止
培养２４ｈ，以除去贴壁细胞，收集未贴壁的细胞悬液
即获得脾淋巴细胞。计数接种培养，台盼蓝染色计
数，活细胞数应大于９５％。
２．２ 甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响 取小
鼠脾淋巴细胞。调整细胞密度为１５×１０６个／ｍＬ，
每孔１００μＬ加入９６孔细胞培养板，每孔加入１００
μＬ不同浓度的甜菜碱，甜菜碱的最终浓度分别为
００４，０４，４，２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，阳性对照组加入促细胞
有丝分裂原刀豆球蛋白（ＣｏｎＡ），终浓度为１×１０－４
ｍｍｏｌ·Ｌ－１。设阴性对照孔（加等体积细胞培养
液），同时设无细胞对照，以排除假阳性。每一浓度
６个复孔。置于３７℃，５％ＣＯ２的饱和湿度培养箱
中培养１２，２４，４８ｈ后，每孔加２２μＬ新鲜配制的１２
ｍｍｏｌ·Ｌ－１的 ＭＴＴ，继续培养４ｈ，轻轻吸取培养液
上清１５０μＬ，每孔加１５０μＬＤＭＳＯ，微型振荡器振
荡混匀，酶标仪于 ５７０ｎｍ波长读取各孔吸光度
（Ａ）。
２．３ 甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞周期分布的影响
取小鼠脾淋巴细胞，调整细胞密度为１５×１０７个／
ｍＬ，每孔１ｍＬ加入２４孔培养板，然后加入甜菜碱
使其终浓度为４ｍｍｏｌ·Ｌ－１，设 ＲＰＭＩ１６４０培养基
为阴性对照组。于４，６，１８，２４ｈ收集细胞。１５００ｒ
·ｍｉｎ－１离心１５ｍｉｎ，细胞沉淀用７０％乙醇悬浮，４
℃冰箱放置１２ｈ以上。固定后的细胞用 ＰＢＳ洗２
遍并悬浮，加入０８ｍＬＰＩ染液（生理盐水３２４ｍＬ，
核糖核酸酶 ０５ｍｇ，ＴｒｉｔｏｎＸ１０００２５ｍＬ，ＰＩ２５
ｍｇ，枸橼酸钠５０ｍｇ，加蒸馏水至５０ｍＬ，４℃避光保
存），混匀后于４℃，避光放置１ｈ，经３００目尼龙网
过滤，在流式细胞仪上计数１００００个细胞，分别测
定各个时间段各期细胞数，分析细胞周期。每组均
重复３次。
２．４ 甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞内 Ｃａ２＋浓度的影响
取小鼠脾淋巴细胞，调整细胞密度为 １５×１０７
个／ｍＬ，以每孔１ｍＬ接种于２４孔培养板上，加入甜
菜碱使其终浓度为４ｍｍｏｌ·Ｌ－１，设 ＲＰＭＩ１６４０培
养基为阴性对照组。于０，２，６，１２，１８ｈ收集细胞。
Ｆｌｕｏ３／ＡＭ荧光标记：无钙台氏液离心洗涤２遍，１
倍体积的６×１０－３ｍｍｏｌ·Ｌ－１的 Ｆｌｕｏ３／ＡＭ与细胞
悬液混合，３７℃下孵育３０ｍｉｎ。激光共聚焦扫描显
微镜检测，将标记后的细胞用激光共聚焦扫描显微
镜对其进行扫描观察，激发波长４８８ｎｍ，发射波长
５１５ｎｍ，用Ｌｅｉｃａｃｏｎｆｏｃａｌｓｏｆｔｗａｒｅｌｉｔｅｖｅｒｓｉｏｎ软件对
扫描图像进行分析。
２．５ 小鼠脾淋巴细胞相关通道及蛋白抑制剂对甜
菜碱升高细胞内 Ｃａ２＋浓度的影响 取小鼠脾淋巴
细胞，调整细胞密度为 １５×１０７个／ｍＬ，以每孔 １
ｍＬ接种于２４孔培养板上。共分２组，第１组ＲＰＭＩ
１６４０组，各孔分别加入钙通道抑制剂：硝苯地平、地
尔硫卓、维拉帕米、咪贝地尔、金雀异黄素、肝素、新
霉素、普鲁卡因及阴性对照 ＲＰＭＩ１６４０各０５ｍＬ，
在３７℃ 条件下孵育 ２０ｍｉｎ后，每孔加入１ｍＬＲＰ
ＭＩ１６４０，使各抑制剂终浓度分别为 ２×１０－３，１×
１０－３，５×１０－３，２×１０－３，５×１０－３，１×１０－３，１×
１０－３，０５ｍｍｏｌ·Ｌ－１；第２组甜菜碱组，各孔分别加
入硝苯地平、地尔硫卓、维拉帕米、咪贝地尔、金雀异
黄素、新霉素、肝素、普鲁卡因及对照组ＲＰＭＩ１６４０，
在３７℃条件下孵育２０ｍｉｎ后，加入甜菜碱使其终
浓度为４ｍｍｏｌ·Ｌ－１，此时各抑制剂终浓度与第 １
组相同。培养６ｈ后收集细胞，Ｆｌｕｏ３／ＡＭ荧光标
记，激光共聚焦对其进行扫描，方法同上。
其中硝苯地平、地尔硫卓、维拉帕米是细胞膜
Ｌ型电压门控钙通道抑制剂，它们分别与 Ｌ型钙通
道的３个独立位点相结合，具有药理学配体和受体
结合的特性；咪贝地尔是细胞膜 Ｔ型电压门控钙通
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道抑制剂；金雀异黄素是酪氨酸蛋白激酶抑制剂，可
抑制激酶的磷酸化位点，抑制包括自身磷酸化在内
的磷酸化；肝素是三磷酸肌醇受体拮抗剂；新霉素是
磷脂酶 Ｃ（ＰＬＣ）的抑制剂，它可阻断由 ＰＬＣ催化的
磷脂肌醇代谢，从而抑制 ＩＰ３的生成；普鲁卡因是胞
内内质网（ｒｙａｎｏｄｉｎｅ）受体钙通道的抑制剂。
２．６ 统计学处理 所有数据用 珋ｘ±ｓ表示，组间差异
比较采用Ｅｘｃｅｌ软件中的ｓｔｕｄｅｎｔｔｔｅｓｔ进行ｔ检验。
３ 结果
３．１ 甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响 甜菜
碱终浓度０４，４，２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１均可促进淋巴细胞
增殖，以４ｍｍｏｌ·Ｌ－１效果最为明显。在２４，４８ｈ均
可显著增殖，以２４ｈ效果更好。因此甜菜碱４ｍｍｏｌ
·Ｌ－１作用２４ｈ促淋巴细胞增殖效果明显。见表１。
表１ 甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞增殖（Ａ）的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
分组 浓度／ｍｍｏｌ·Ｌ－１ １２ｈ ２４ｈ ４８ｈ
阴性对照 － ０２５６±０００６ ０２５４±０００５ ０２５０±０００８
ＣｏｎＡ １×１０－４ ０３１３±００２１１） ０３６８±００１０２） ０３７７±０００４２）
甜菜碱 ００４ ０２６０±００２４ ０２８０±００１２２） ０２８４±０００９２）
０４ ０２７２±００１９ ０３１２±００１２２） ０３２３±０００５２）
４ ０２８３±００１１１） ０３４５±０００７２） ０３６４±０００４２）
２０ ０２７４±００１１１） ０３１３±００１３２） ０３２６±０００７２）
注：与阴性对照组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１。
３．２ 甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞周期分布的影响
由不同时间点淋巴细胞周期与甜菜碱作用０ｈ比较
表明，甜菜碱有促进淋巴细胞由 Ｇ０／Ｇ１期进入 Ｓ期
的作用，且作用 １８ｈ效果最明显，其 Ｇ０／Ｇ１期由
９７０３％下降到 ８９９９％，Ｓ期由 ２５８％升高到
９０８％。到２４ｈ后，其诱导作用反而有些下降。见
表２。
３．３ 甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞内Ｃａ２＋浓度的影响
表２ 甜菜碱作用不同时间对小鼠脾淋巴细胞周期的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６） ％
作用时间／ｈ 浓度／ｍｍｏｌ·Ｌ－１ Ｇ０／Ｇ１ Ｓ Ｇ２／Ｍ
０ ４ ９７０５０±０２５２ ２５８２±０３８６ ０３６８±０１３５
４ ４ ９６５９６±０２７７１） ２８５１±０４２８１） ０５５３±０１５８
６ ４ ９４５４０±０４０４２） ４８３２±０２８３２） ０６２８±０１４０
１８ ４ ９０２２６±０３５７２） ９００２±０４５６２） ０７７２±０２１０
２４ ４ ９４７５５±０５９７１） ４３３７±０３０８１） ０５７４±０２７５
注：与０ｈ比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１。
加入甜菜碱不同时间后，淋巴细胞内 Ｃａ２＋浓度与
同期对照组相比显著升高，其中加药６ｈ后最高，１２
ｈ后有所下降。见表３。
表３ 甜菜碱作用不同时间对小鼠脾淋巴细胞内
［Ｃａ２＋］ｉ的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６） ＦＡ
作用时间
／ｈ
浓度
／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
阴性对照 甜菜碱
２ ４ ３１７９７±４０９３ ３４０９３±７６３２
６ ４ ３２６３１±９１０５ ４６８３６±７８８１１）
１２ ４ ３１６５２±３４８４ ３７９１１±４６２８１）
１８ ４ ３２４２８±２４０３ ３７７６０±４４３７１）
注：与阴性对照组比较１）Ｐ＜００１。
３．４ 不同钙通道抑制剂对小鼠脾淋巴细胞内 Ｃａ２＋
浓度的影响 ＲＰＭＩ１６４０组加入阻断剂后钙离子浓
度与其相应的阴性对照相比均无变化，说明各通道
蛋白阻滞剂对小鼠脾淋巴细胞本身钙离子浓度没有
影响。甜菜碱组加入不同阻断剂后钙离子浓度与其
相应的阴性对照比较，其中硝苯地平、地尔硫卓、咪
贝地尔、金雀异黄素对甜菜碱诱导的淋巴细胞内钙
离子浓度没有影响，而维拉帕米、肝素、新霉素、普鲁
卡因能显著抑制甜菜碱诱导的淋巴细胞内钙离子升
高的作用。相同条件下，甜菜碱组的阴性对照与
ＲＰＭＩ１６４０阴性对照相比有显著性差异，与前面所
做的甜菜碱能升高淋巴细胞内钙离子浓度的结果相
符。见表４。
４ 讨论
本实验发现甜菜碱在体外能促进小鼠脾淋巴细
胞增殖，且浓度在４ｍｍｏｌ·Ｌ－１以内，当浓度大于４
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表４ 不同钙通道抑制剂对小鼠脾淋巴细胞内Ｃａ２＋浓度的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝２０） ＦＡ
抑制剂 抑制剂浓度／ｍｍｏｌ·Ｌ－１ 甜菜碱／ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＲＰＭＩ１６４０组 甜菜碱组
阴性对照 － － ３２０１６±６３３１ ４６５０７±７６８３２）
硝苯地平 ２×１０－３ ４ ３２１９６±４７６２ ４６６０９±８８７１
地尔硫卓 １×１０－３ ４ ３２００９±３８７９ ４６６９９±９２９４
维拉帕米 ５×１０－３ ４ ３０９３７±３９７６ ３１３０６±５０７４１）
咪贝地尔 ２×１０－３ ４ ３１８３３±３００１ ４３７３８±８０５２
金雀异黄素 ５×１０－３ ４ ３０９７２±３７６２ ４２９５０±４３９２
肝素 １×１０－３ ４ ３２０５３±４１５８ ３０６３９±５０２９１）
新霉素 １×１０－３ ４ ３１６８２±４９１６ ３２４９９±４３７８１）
普鲁卡因 ５×１０－１ ４ ３１８３４±３８７３ ３１５６５±５０３２１）
注：与甜菜碱阴性对照组比较１）Ｐ＜００１；与对应的ＲＰＭＩ１６４０组比较２）Ｐ＜００１。
ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，细胞增殖作用反而下降，说明甜菜碱
促淋巴细胞增殖有一定浓度限制，其最佳浓度为４
ｍｍｏｌ·Ｌ－１。
本实验采用ＰＩ染色，流式细胞术观察甜菜碱对
淋巴细胞周期的影响，发现甜菜碱能够促进淋巴细
胞由Ｇ０／Ｇ１期进入Ｓ期，且以作用１８ｈ效果最明显。
说明甜菜碱通过促进小鼠脾淋巴细胞由Ｇ０／Ｇ１期进
入Ｓ期而起到促淋巴细胞增殖的作用。
为进一步揭示活化淋巴细胞的机制，本文采用
激光共聚焦显微镜扫描，观察甜菜碱作用不同时间
的淋巴细胞内Ｃａ２＋浓度的变化，发现甜菜碱组细胞
内Ｃａ２＋浓度明显高于相应的对照组，在甜菜碱作用
２ｈ后就明显促进淋巴细胞增殖，作用６ｈ后达到最
大值，之后Ｃａ２＋浓度反而下降，表明４ｍｍｏｌ·Ｌ－１甜
菜碱作用６ｈ即可完成Ｃａ２＋作为第二信使的传导任
务，激活淋巴细胞进行增殖。
细胞内钙离子浓度的变化受钙离子通道的影
响，至今发现的 Ｌ型钙通道拮抗剂至少有３类：①
双氢吡啶类，如硝苯地平；②苯噻氮卓类，如地尔硫
卓；③苯烷胺类，如维拉帕米。本实验发现，硝苯地
平和地尔硫卓对甜菜碱升高淋巴细胞内钙离子浓度
没有影响，而维拉帕米能抑制甜菜碱引起的细胞内
钙升高。表明甜菜碱使细胞内钙离子浓度增加与影
响Ｌ型钙通道的 α１亚单位有关。而咪贝地尔是细
胞膜 Ｔ型电压门控钙通道阻断剂，其对甜菜碱诱导
的淋巴细胞内钙离子浓度的升高没有影响，说明甜
菜碱升高细胞内钙离子浓度不是通过激活 Ｔ型电
压门控钙通道。金雀异黄素是酪氨酸蛋白激酶抑制
剂，而新霉素是磷脂酶 Ｃ（ＰＬＣ）的抑制剂［９］。金雀
异黄素对甜菜碱诱导的淋巴细胞内钙离子浓度的升
高没有影响，而新霉素能抑制甜菜碱诱导的细胞内
钙升高。说明细胞内钙离子浓度的升高是通过 Ｇ
蛋白ＰＬＣＩＰ３这条途径，而不是通过激活酪氨酸蛋
白激酶而起作用。由此可知：甜菜碱升高细胞内钙
离子浓度的途径之一是在Ｇ蛋白介导下通过影响Ｌ
型钙通道的α１亚单位引起外钙内流。
淋巴细胞内主要的钙库是内质网（ＥＲ），Ｃａ２＋通
道通过不同的调节机制将ＥＲ内的钙离子释放到细
胞浆内以发挥相应的生物效应。内质网钙通道主要
有两种：内质网膜 ＩＰ３受体（ＩＰ３Ｒ）钙通道和 ｒｙａｎｏｄ
ｉｎｅ受体（ＲｙＲ）钙通道，广泛存在于大多数细胞中。
肝素是胞内内质网 ＩＰ３Ｒ钙通道阻断剂
［１０］，普鲁卡
因是ＲｙＲ钙通道阻断剂，其均能抑制细胞内甜菜碱
诱导的钙离子升高。说明甜菜碱升高淋巴细胞内钙
离子浓度的途径之二是通过影响细胞内 ＩＰ３Ｒ钙通
道和ＲｙＲ钙通道，其共同作用引起胞质钙增加。肝
素为水溶性物质，不易被动扩散进入细胞，实验时需
先对细胞进行可通透性制备。本实验采用适宜浓度
皂素（ｓａｐｏｎｉｎ）先孵育１０ｍｉｎ，然后再加肝素孵育２０
ｍｉｎ。
由以上实验推断，甜菜碱能够促进淋巴细胞增
殖，机制为通过开放相关钙离子通道升高淋巴细胞
内Ｃａ２＋，诱导淋巴细胞由Ｇ０／Ｇ１期进入Ｓ期，从而促
进淋巴细胞增殖。而甜菜碱开放相关钙离子通道主
要表现为：在 Ｇ蛋白介导下，通过影响 Ｌ型电压门
控钙通道的α１亚基，开放Ｌ型电压门控钙通道而引
起外钙内流；通过影响胞内钙库的 ＩＰ３Ｒ钙通道和
ＲｙＲ钙通道而引起内钙外排。
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第３４卷第１５期
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ｍａｌａｄｕｌｔｒａｂｂｉｔｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ
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Ｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｂｙｗｈｉｃｈｂｅｔａｉｎｅｐｒｏｍｏｔｅｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆ
ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｉｎｍｉｃｅ
ＪＩＹｕｂｉｎ１，２，ＧＡＯＳｈｉｙｏｎｇ１，２，ＦＥＮＧＸｉａｏｙａｎ１，２，ＨＥＬｉｗｅｉ１，２
（１．ＰｏｓｔｄｏｃｔｏｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈＳｔａｔｉｏｎ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭａｔｅｔｉａＭｅｄｉｃａ，ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＨａｒｂｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｏｍｍｅｒｃｅ．Ｈａｒｂｉｎ１５００７６，Ｃｈｉｎａ；
２．ＭＯＥＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＮａｔｕｒａｌＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＤｒｕｇｓ，ＨａｒｂｉｎＣｏｍｍｅｒｃｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００７６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｈｏｗｔｈｅｗａｙｉｎｗｈｉｃｈｂｅｔａｉｎｅｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｉｓｒｅｌａｔｅｄ
ｔｏｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＢＡＬＢ／ｃｍｉｃｅｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈｉｎｖｉｔｒｏ
ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎａｆｔｅｒｔｈｅｙｈａｄｂｅｅｎｓｅｐａｒａｔｅｄ，ａｎｄｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏａｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ａＣｏｎＡｇｒｏｕｐ，ａｎｄ００４，０４，４，ａｎｄ２０
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｂｅｔａｉｎｅｇｒｏｕｐｓ．ＭＴＴｗａｓｕｓｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｂｅｔａｉｎｅｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ；ｆｌｏｗｃｙ
ｔｏｍｅｔｒｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｃｅｌｃｙｃｌｅｏｆｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ；ａｎｄｌａｓｅｒｃｏｎｆｏｃａｌｓｃａｎｎｉｎｇｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙｗａｓ
ｕｓｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ［Ｃａ２＋］ｉｏｆｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓａｆｔｅｒｂｅｔａｉｎｅｏｒｄｉｆｅｒｅｎｔｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｂｌｏｃｋｅｒｓ
ｗｅｒｅａｐｐｌｉｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｂｅｔａｉｎｅｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ１２ｈａｆｔｅｒｉｔｈａｄｂｅｅｎａｐｐｌｉｅｄｉｎ
ｖｉｔｒｏｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆ４ａｎｄ２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１．Ｉｔｗａｓａｌｓｏｆｏｕｎｄｔｏｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ２４ｈａｎｄ４８
ｈａｆｔｅｒｉｔｈａｄｂｅｅｎａｐｐｌｉｅｄｉｎｖｉｔｒｏｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆ００４，０４，４，ａｎｄ２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，ｗｉｔｈｔｈｅｅｆｅｃｔｂｅｉｎｇｍｏｓｔｍａｒｋｅｄｆｏｒｔｈｅ４
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｇｒｏｕｐ２４ｈａｆｔｅｒｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．ＩｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｆａｃｉｌｉｔａｔｅｔｈｅｅｎｔｒｙｏｆｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｆｒｏｍｔｈｅＧ０／Ｇ１ｔｏｔｈｅＳ
ｐｈａｓｅ４，６，１８，ａｎｄ２４ｈａｆｔｅｒｉｔｈａｄｂｅｅｎａｐｐｌｉｅｄｔｏｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｉｎａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ４ｍｍｏｌ·Ｌ－１，ｗｉｔｈｔｈｅｅｆｅｃｔｂｅ
ｉｎｇｍｏｓｔｍａｒｋｅｄａｔ１８ｈａｆｔｅｒｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ［Ｃａ２＋］ｉｉｎｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜００１）６，
１２，１８ｈａｆｔｅｒ４ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｂｅｔａｉｎｅｈａｄａｃｔｅｄｏｎｔｈｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ｗｉｔｈｔｈｅｅｆｅｃｔｂｅｉｎｇｍｏｓｔｍａｒｋｅｄａｔ６ｈ．Ｔｈｅｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌ
ｂｌｏｃｋｅｒｓｎｉｆｉｄｉｐｉｎｅ，ｄｉｌｔｉａｚｅｍ，ｍｉｂｅｆｒａｄｉｌ，ａｎｄｇｅｎｉｓｔｅｉｎｈａｄｎｏｅｆｅｃｔｏｎｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｔｈｅｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ［Ｃａ２＋］ｉｉｎｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎ
ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｄｕｅｔｏｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｂｅｔａｉｎｅ，ｗｈｉｌｅｖｅｒａｐａｍｉｌ，ｍｙｃｉｆｒａｄｉｎ，ｈｅｐａｒｉｎ，ａｎｄｐｒｏｃａｉｎｅｃｏｕｌｄｂｌｏｃｋｓｕｃｈｉｎｃｒｅａｓｅ．Ｃｏｎｃｌｕ
ｓｉｏｎ：ＢｅｔａｉｎｅｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓｔｈｅｅｎｔｒｙｏｆｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｆｒｏｍｔｈｅＧ０／Ｇ１ｉｎｔｏｔｈｅＳｐｈａｓｅｂｙｒａｉｓｉｎｇｔｈｅｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ［Ｃａ
２＋］ｉｉｎ
ｔｈｅｓｅｃｅｌｓ，ｔｈｕｓｐｒｏｍｏｔｉｎｇｔｈｅｉｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ［Ｃａ２＋］ｉｉｎｃｒｅａｓｅｓｍａｉｎｌｙｉｎｔｗｏｗａｙｓ：①Ｂｙａｆｅｃｔｉｎｇｔｈｅα１ｓｕｂｕｎｉｔｏｆｔｈｅ
ＬｔｙｐｅｖｏｌｔａｇｅｇａｔｅｄｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｗｉｔｈｍｅｄｉａｔｉｏｎｂｙＧｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｔｈｕｓｌｅａｄｉｎｇｔｏａｎｅｆｌｕｘｏｆｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍ；②Ｂｙａｆｅｃｔｉｎｇ
ｔｈｅＩＰ３ＲａｎｄＲｙＲｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｓｏｆｔｈｅｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍｓｔｏｒｅｓａｎｄｔｈｕｓｌｅａｄｉｎｇｔｏｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｂｅｔａｉｎｅ；ｍｏｕｓｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ；ｃｅｌｃｙｃｌｅ；ｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒＣａ２＋；ｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌ
［责任编辑 古云侠］
·３６９１·
第３４卷第１５期
２００９年８月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １５
Ａｕｇｕｓｔ，２００９