全 文 ：药物分析杂志
Ta b 3
表 3供试品 (1刁 )干扰试验结果
R e sul t so f i nh ib t iio ne曲 a nc e me nte t stfo r Pro du c t (l一闷 )
内毒素供试品溶液 (1一碑 )内毒素浓度
o ne e n
a r t t i
o nof e no dto x i n)/ E U
[
e n do ro x i n i np o r du e t (1 -拼 ) sol u t io n]
.
mL
一 1
内毒素水溶液
(e n do to x i n i nwa te
r
)
20X ) (5 1 1 2 2《洲 )10 109 2X ) (0 0 1 1 1
十 十 十 十 十 十 十 十 十 + +十 +十 十 十
0
.
1 25十 十 十 十 + +十 十 十 十 十 十 +十 + +
水溶液阴性对照 (NC )
供试品阴性对照 (NC P)
终点 (e n d一 即 i nt)/ Eu· L m一 ’ 入 e二 0
.
1 25入 = s0 . 1 25入 s二 0 . 1 25入 s二 0 . 1 25
2
.
5细菌内毒素检查 依照上述方法 , 将 3 批供
试品 4 倍稀释 , 与 0 . 125 E u · m L 一 ’ TA L 进行细菌
内毒素检查 , 均符合药典对其有效性的规定 。
3 讨论
3
.
1 通过实验表明 , 甘露醇注射液热原检查可用
细菌内毒素检查代替家兔法 , 检查时只要将其至少
4 倍稀释 , 选择相应灵敏度的鳖试剂即可进行 。
3
.
2 干扰初筛试验大大缩小了选择干扰试验的范
围 , 不仅减少了盲目性 , 而且降低了成本 , 提高了
工作效率 。
参考文献
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8 6
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3 Q IU x
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等速电泳法测定青风藤中
青藤碱的含量
成凤桂 唐尹萍
( 中南民族学院化学与生命科学学院 武汉 43 0 74
一石 n ( 喻维新 ) . P h~ ac
(北京 ) : Pe o p l e ,s M i l i t柳
19 9 9
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3 2 3
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M e d i e a P r e s s (人民 军 医 出版 社 ) ,
(本文于 2X(] 1 年 3 月 9 日收到 )
青风藤系木质落叶藤本 , 广泛分布于华东 、 西
南 、 华中及陕西等地 。 为防己科植物青藤及毛青藤
的干燥鳞茎 〔’ , 。 可 用来治疗风湿痹痛 、 鹤膝风 、
水肿和脚气 。 青藤碱是青风藤 中所含的主要生物
碱 , 具有镇痛和抗炎作用 [ ’ 1 , 对类风湿性关节炎
有一定的疗效 [ ’ 〕。 目前 , 对青藤碱的测定方法有
薄层色谱扫描 法 ( T Lc s) 叫 、 高效液相色谱 法
( H P L e ) [
5〕 和 肪化法 [6 」等 。 等速 电泳法 ( I s o t a -
e h o p h o r e s i s
,
IT p ) 应用于天然药物的分析 已有一
些报道 [ ’ 」 , 本文用于青藤碱含量的测定 。
1 仪器 、 试剂及材料
L K B 2 12 7 T a e h o p h o r 等速电泳仪 (瑞典 L K B ) ,
配以 2 0 0 m m x 1 m m 聚四氟乙烯毛细管 , 电导检测
器 ( C D ) 及其微分讯号 ( DI F F ) 和紫外检测器
( U V D
,
2 5 4 n m )
。
L C 一 10 A 高效液相色谱仪 ( 日本岛津 ) , 配以
S P D 一 10 A I 检测器和 L C 一 10 A T 泵 。
青藤碱对照品 (中国药品生物制品检定所提
供 , 批号 : 7 7 4 一 9 4 0 2 ) ; 盐酸甜菜碱 ( F lu k a 公
司 , 含量 > 9 % ) ; 无水乙醇 、 醋酸钾 、 醋酸等均
为分析纯 。
青风 藤 药 材 ( S i n o me n i u m ac u t u m Rh e d . e t
W ils
.
) 系陕西凤县 、 太白和宝鸡 19 98 年不同月份
采摘 。
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2002. 02. 020
22( 2)
,
2X() 2
2 溶液的配制
青藤碱对照品溶液 : 取青藤碱对照 品约 20
m g
, 精密称定 , 用 70 % 的 乙醇溶解并定容至 25
m L
。
青风藤供试品溶液 : 取干燥的药材粉末约 1 9 ,
精密称定 , 用 7 0 % 乙醇 20 m L 回流提取 Z h , 提取
液过滤 、 定容至 25 m oL
3 实验方法
3
.
1 等速电泳法 电解质 系统 : 前导 电解液
(比 ) : 0 . 01 m ol · L 一 ’ 醋酸钾 一 醋酸溶液 ( p H
5
.
4 0 ) ; 尾随电解液 ( T E ) : 0 . 0 1 m o l · L 一 `盐酸甜
菜碱溶液 ( p H 4 . 40 ) 。 操作参数 : 毛细管内径 1
m m
, 长 2 0 e m ; 泳动电流为 1X() 卜A ( 2 kV一 1 1
kV ) ; 电导及其微分检测 : 灵敏度为 1 m V · c m 一 ’ ,
增益 4 ; 紫外检测 : 2 54 n m , 灵敏度为 5 m V ·
e m
一 ’ , 增益 4 ; 纸速为 6 0 m m · m i n 一 ` : 温度 2 0
℃ ; 分析时间约 10 m i n 。
3
.
2 高效液相色谱法 按厂家提供的方法 , 选用
C
l。烷基键合硅胶为固定相 , 以甲醇 一 乙二胺 ( 10
“ 0
.
1) 为流动相 , 检测波长为 2 65 n m 。
4 分离系统的选择
前导离子与尾随离子的选择 : 青藤碱在弱酸性
溶液中以阳离子形式存在 , 经实验筛选 , 选择 K `
为前导离子 ( CH 3 C OO 一 为其对离子 ) , 甜菜碱为尾
随离子 ( lC 一 为其对离子 ) , 该系统分离效果最好 。
分离青风藤供试品液的图谱见图 1。
t/ . i n
图 1 IT p 分离青风藤供试品液图
F ig 1 15 0扭 C h o p h o er gr a l n of e x t r a c t for m
S i n o n祀 n i u爪 ac u t u m Rh e d . e t W i l s .
U V D 一 紫外检测 CD 一 电导检测 DI F 一微分讯号
1
. 青藤碱 ( s i n o m e n i n e )
2
,
3
. 未知组分 ( u n k n own e o m即 n e n t )
电导检测讯号表明青藤碱阶高与未知组分 2 能分
开 , 并给出较好的相应微分讯号 , 其紫外峰宽和电
导微分检测讯号两峰间距一致 。 尽管青藤碱的电导
阶高比尾随离子高 , 说明在该体系下 , 青藤碱离子
的淌度比尾随离子大而 电导率 比之小 (强迫 电
泳 ) , 但并不影响定量分析 。 本实验以电导检测的
相应微分讯号作为定量依据 。
p H 的选择 : p H 越低 , 青藤碱形成阳离子的比
例越大 , 检测灵敏度越高 , 但酸度越大 , H + 浓度
越高 , 必将大大延长分析时间 , 降低分离效率 , 所
以须选择适合的 p H 。 p H 的控制主要 由前导 电解质
完成 , 用醋酸调节前导液的不同 p H , 以对照品青
藤碱溶液进样 , 每次进样量均为 5 林 L , 实验表明
当 p H 为 5 . 4 0 时 , 青藤碱有最大的区带长 , 且电
泳时间较短 , 因而选择前导 电解液的 p H 为 5 . 40 。
5 线性关 系考察
采用固定浓度改变进样量 (分别精密吸取对
照品溶液 0 . 5 , 1 . 0 , 2 . 0 , 4 . 0 , 6 . 0 , 8 . 0 , 10 林L
进样 , 各 3 次 , 取平均值 ) 和固定进样量改变浓
度方法 (浓度分别为 0 . 1 , 0 . 2 , 0 . 4 , 0 . 6 , 0 . 8 ,
1
.
0
,
1
,
2 m g
·
m L
一 `对照品溶液 , 进样 5 林L ) 相结
合 , 经一元线性回归 , 其回归方程为 :
Y = 0
.
4 2 5 I X + 0
.
0 4 2 s r = 0
.
9 9 9 3
X 为青藤碱的区带长 ( m m ) , Y 为青藤碱量
( 林g ) 。 线性范围 0 · 5 一 1 2 卜g 。
6 精密度实验 ·
精密吸取凤县 1998 年 or 月产 , 太白 19 98 年 8
月产及宝鸡 19 9 8 年 10 月产样品提取液各 3 份 , 每
份进样 5 次 , 每次 or 卜 L , 测 定 R SD 分别 是
2
.
8%
,
1
.
8%
,
1
.
3%
, 表明该法精密度较好 。
7 加样回收实验
精密称取凤县 、 太白和宝鸡 19 98 年产的药材
粉末约 50 m g , 分别加人一定量对照品 , 回流提
取方法同上 , 定容至 or m L 。 测定结果见表 1 , 其
平均回收率在 97 % 一 101 % 之间 , 说明本法具有较
高的准确度 。
表 1 加样回收实验 【n 二 4)
T a b 1 Rec o v e yr 奴写 t
由图 1可见 , 青藤碱能与其它物质有较好的分
离 , 且前导 、 尾随离子均无紫外吸收 , 而青藤碱在
25 4
n m 有较强 的吸收 , 出现矩形峰 , 未知组分 2
及 3 也有 U v 吸收 , 但其阶高与青藤碱相差较大 ;
产地
( h ab i t at )
原有值
( ior ig
n al )
加人量
( ad d
e d )
平均回收率
va
e r ag e
R S D
/ %
月了飞ùQ了…,12,一凤县 Fen gx ian太白 T a ib ia宝鸡 Baoj i 3
.
99
4
.
2 6
1
.
7 6
1
.
2 ~ 1
.
8
1
.
0 ~ 1
.
8
1
.
2 一 2 0
药物分析杂志
8 样品分析
样品为 19 9 8 年不同产地 、 不同采收期采集的
青风藤 , 每种样品准确称取 3 份 , 均经上述提取方
法提取并定容至 10 m L , 应用 IT P 法测定青藤碱的
含量 , 进样 10 协L , 平行测定 2 次 , 平均测定结果
经换算为药材中青藤碱的百分 比含量 , 并与 H PL C
测定 ( H P LC 进样 的样品溶液按本文方法重新配
制 ) 结果对照 , 见表 2 。 由表 2 可见 , 2 种方法测
定结果基本吻合 。
表 2 样品的测定结果 ( % )
T a b 2 A n ia 州 c ia esr ul st o f s a m P le s
ITP 法 HP LC 法
7 u i ir k
。
s
,
Gu n t h e : B
,
P急t e r o , M i e h a e r p . I sof a e h o p h o代 t i e an al y is s
o
f fl a
v o n o id s a n d p h e n
o
l e arb
o x y l i e ac id s o f re l e v an e e ot p h y tOP harm
a
-
e e u t i e al i n d u
s t叮 . J hC or am t o g r , 19 9 1 , 5 5 9 : 4 9 9
(本文于 20 1 年 4 月 9 日收到 )
反相 H P L C 法测定盐酸
氯环利嗓乳膏含量
产地
( h ab i t
a t )
采收期
h e rb
o ir z e )
02
.呻
八J月fù.且
凤县 F e n 罗 i , 19 9 8 . 5
19 9 8
.
8
太白 aT i bia 19 9 8 . 5
19 9 8
.
10
宝鸡 B aoj i 19 9 8 . 6
19 9 8
.
10
测得值
( of
u n d )
0
.
7 8 6
1
.
1 0 1
0
.
6 4 9
0
.
7 9 7
0
,
6 2 6
1
.
4 42
3
.
2
2
.
2
测得值
( fo
u n d )
0
.
8 1 1
1
.
15 0
0
.
6 2 9
0
.
7 17
0
.
63 9
1
. 闷4 7
2
.
6
2
.
4
参考文献
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闻京伟 冯明霞 梅拥军 ’
(河南省药品检验所 45 0( X) 3)
盐酸氯环利嗓乳膏为长效抗组织胺新药 , 其作
用持续时间一般为 12 一 18 h , 能有效地拮抗组织胺
所致毛细血管扩张作用 和支气管平滑肌的痉挛作
用 。 常用于接触性皮炎 、 丘疹性尊麻疹 、 过敏性皮
炎等症的治疗 。 B P 2 0 0 0川 收载了盐酸氯环利嚓原
料 , 含量测定用酸碱滴定电位法测定 , 但未收载其
制剂 。 盐酸氯环利嗦乳膏收载于 卫生部药品标
准 f ’ 〕 , 其含量测定方法采用高氯酸非水滴定法 ,
但因制剂中基质干扰 , 终点不明显 , 有关部门曾对
该标准进行过修订 , 改用无水乙醇提取后挥去溶剂
再进行非水滴定 , 但终点仍不好判断 。 其操作繁
琐 、 费时 、 误差大 。 本文建立 了反相 H P L C 法测定
盐酸氯环利嗦乳膏含量 , 方法操作简便 , 准确 、 重
现性好 , 专属性强 , 为该品种的质量标准进一步修
订提供依据 。
1 仪器与试剂
岛津 LC 一 S A 高效液相色谱仪 , 岛津 S P D 一 ZA
紫外检测器 , 岛津 C R 一 3A 积分仪 。 美国 w at er s -
5 10 高效液相色谱仪 , W at e sr 一 2 4 8 7 紫外检测器 ,
岛津 u v 一 2 60 紫外可见分光光度计 。 乙睛为色谱
纯 , 其它试剂均为分析纯 。
盐酸氯环利嗓乳膏 ( 0 . 2 :9 20 9 ) 、 盐酸氯环
利嗦乳膏空 白基质 (其成分为 白凡士林 、 甘油 、 单
硬脂酸甘油酉旨、 尼泊金 乙醋 、 吐温 一 80 、 水等 ) 、
盐酸氯环利臻对照品 (纯度 : 9 . 9% ) 均由河南
省焦作化学制药厂提供 。
2 色谱条件
色谱柱 : S p h e r is o br C N 柱 ( 5 卜m , 4 . 6 m m x
20 0 m m )
, 中科院大连化学物理所 ; 流动相 : 庚烷
磺酸钠溶液 ( 0 . 05 m ol · L 一 `庚烷磺酸钠溶液 2 . 5
m L 与三乙胺 0 . 8 m L , 加水 8 0 m L , 用冰醋酸调
* 焦作化学制药厂 引 4 50 0