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Isoflavones from vines of Pueraria lobata

野葛藤中的异黄酮类化合物



全 文 :野葛藤中的异黄酮类化合物
张德武1,任燕1,戴胜军1,刘万卉1,李贵海1,2
(1.烟台大学 药学院,山东 烟台 264005;
2.山东省中医药研究院,山东 济南 250014)
[摘要] 目的:对野葛 Puerarialobata藤茎中的异黄酮类化合物进行研究。方法:采用正相及反相硅胶柱色谱、Sephadex
LH20凝胶柱色谱、制备薄层等方法进行分离纯化,通过理化性质及波谱数据鉴定其结构。结果:分离鉴定了12个异黄酮类
化合物,分别为:3′甲氧基大豆苷元(1),芒柄花素(2),染料木素(3),大豆苷元(4),大豆苷(5),染料木苷(6),芒柄花苷(7),
5羟基芒柄花苷(8),毛蕊异黄酮(9),6″O乙酰基染料木苷(10),6″O乙酰基大豆苷(11),葛根素(12)。结论:化合物9~11
为首次从葛属植物中分离得到,化合物1,3,6~8为首次从野葛藤中分离得到。
[关键词] 豆科;葛属;野葛藤;异黄酮
[收稿日期] 20090627
[基金项目] 山东省科技攻关项目(2007GG2NS02077)
[通信作者] 李贵海,Tel:(0535)6706025,Fax:(0535)6706066,
Email:guihai99@163com
  野葛藤为豆科葛属植物野葛 Puerarialobata
(Wild)Ohwi的藤茎,除新疆、西藏外,我国大部分
地区均有分布。本品始载于《神农本草经》,记载有
“主消渴,身大热、呕吐、诸痹,起阴气,解诸毒”等功
效。《全国中草药汇编》中记载:“性味甘辛平,具有
解肌退热、生津止渴、透发斑疹等功能,主要用于治
疗感冒发热,头痛项强,疹出不透,急性胃肠炎,小儿
腹泻,肠梗阻,痢疾,高血压引起的颈项强直和疼痛,
心绞痛,突发性耳聋等”[1]。目前,国内外对葛根已
有较多研究报道,而对其藤茎部分则少有研究。在
采挖葛根时,葛藤则被作为非药用部位而废弃,造成
了资源的巨大浪费。前人在对野葛藤总黄酮提取物
进行初步的研究之后发现,野葛藤黄酮类成分的种
类与葛根相似,有可代替入药的可能性[23]。因此,
为了进一步明确野葛藤的黄酮类成分,更加合理的
利用药用资源,作者对野葛藤的 70%乙醇提取物进
行了较为系统的化学研究,从中分离得到 12个异
黄酮类化合物,根据理化性质及波谱数据,并与文献
对照,对其结构进行了鉴定。
1 仪器与试药
XT4微型熔点测定仪(温度未校正),Autospec
UltimaETOF型质谱仪,PerkinElmer683型红外光
谱仪,VarianUnityBRUKER400型核磁共振仪,薄
层色谱硅胶(GF254)和柱色谱硅胶(200~300目)
均为青岛海洋化工厂产品,SephadexLH20为北京
金欧亚进口分装产品,C18反相硅胶填料(40~50
μm)为 Merck公司产品。野葛藤饮片购自山东济
南,由烟台大学药学院生药室赵燕燕教授鉴定,标本
(YP08083)保存于烟台大学药学院标本室。标准品
大豆苷元,大豆苷,葛根素由山东省医学科学院药物
研究所仲英研究员提供。
2 提取分离
干燥的野葛藤饮片20kg,6倍量70%乙醇回流
提取3次(每次15h),提取液合并、减压浓缩,得
总浸膏17kg,悬浮于水中,依次用石油醚、三氯甲
烷、醋酸乙酯反复萃取,得三氯甲烷部位50g,醋酸
乙酯部位157g。醋酸乙酯部位进行硅胶柱分离,用
三氯甲烷甲醇梯度洗脱得9个组分。对其中的组
分2,6,7进行分离,从组分2中得到化合物 1(38
mg),2(27mg),3(52mg),4(158mg),9(15mg),
从组分6中得到化合物7(63mg),8(24mg),10(22
mg),11(13mg),从组分8中得到化合物5(24g),
6(75mg),12(28g)。
3 结构鉴定
化合物1 淡黄色粉末(三氯甲烷甲醇),mp
258~261℃,难溶于三氯甲烷,溶于丙酮、甲醇,在
紫外灯下,其硅胶薄层斑点为暗斑,喷洒 2% AlCl3
甲醇试剂后转为亮黄色,三氯化铁反应呈阳性。
ESIMSm/z2852[M+H]+。1HNMR(DMSOd6,
400MHz)δ:1080(1H,s,C7OH),910(1H,s,C4′
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OH),833(1H,s,H2),798(1H,d,J=88Hz,H
5),717(1H,d,J=20Hz,H2′),700(1H,dd,J=
82,20Hz,H6′),694(1H,dd,J=88,22Hz,H
6),687(1H,d,J=22Hz,H8),682(1H,d,J=
82Hz,H5′),380(3H,s,OCH3)。
13 CNMR
(DMSOd6,100MHz)δ:1749(C4),1625(C7),
1575(C9),1534(C2),1475(C3′),1464(C
4′),1275(C5),1238(C3),1231(C1′),1218
(C6′),1165(C10),1155(C5′),1152(C6),
1134(C2′),558(OCH3)。以上数据与文献[4]
报道的 3′甲氧基大豆苷元的数据一致,故确定化合
物1为 3′甲氧基大豆苷元。
化合物 2 白色针晶(三氯甲烷甲醇),mp
258~260℃,微溶于三氯甲烷,溶于丙酮、甲醇。IR
(KBr)cm-1:3387(OH),1643(C=O),1610,
1515,1445(Arom)。UV(CH3OH)nm:221,252,
302。ESIMS m/z2696[M +H]+。1HNMR
(DMSOd6,400MHz)δ:1082(1H,s,C7OH),835
(1H,s,H2),798(1H,d,J=88Hz,H5),751
(2H,d,J=88Hz,H2′,6′),699(2H,d,J=88
Hz,H3′,5′),695(1H,dd,J=88,22Hz,H6),
688(1H,d,J=22Hz,H8),379(3H,s,OCH3)。
以上数据与文献[5]报道的芒柄花素的数据一致,
故确定化合物2为芒柄花素。
化合物3 白色针晶(甲醇),mp295~297℃,
溶于丙酮、甲醇,三氯化铝试剂反应呈阳性,三氯化
铁反应阳性。ESIMSm/z2712[M+H]+。1H
NMR(DMSOd6,400MHz)δ:1298(1H,s,C5OH),
1089(1H,s,C7OH),961(1H,s,C4'OH),833
(1H,s,H2),738(2H,d,J=67Hz,H2′,6′),
683(2H,d,J=67Hz,H3′,5′),639(1H,d,J=
20Hz,H8),623(1H,d,J=20Hz,H6)。13C
NMR(DMSOd6,100MHz)δ:1537(C2),1215(C
3),1800(C4),1574(C5),988(C6),1641(C
7),935(C8),1576(C9),1030(C10),1226
(C1′),1303(C2′,6′),1151(C3′,5′),1622(C
4′)。以上数据与文献[6]报道的染料木素的数据
一致,故确定化合物3为染料木素。
化合物4 白色针晶(甲醇),mp314~315℃,
溶于丙酮、甲醇。IR(KBr)cm-1:3235(OH),1640
(C=O),1615,1512,1461(Arom)。ESIMS
m/z2551[M+H]+。1HNMR(DMSOd6,400MHz)
δ:1077(1H,s,C7OH),952(1H,s,C4'OH),830
(1H,s,H2),797(1H,d,J=88Hz,H5),739
(2H,d,J=86Hz,H2′,6′),694(1H,dd,J=88,
22Hz,H6),686(1H,d,J=22Hz,H8),681
(2H,d,J=86Hz,H3′,5′)。以上数据与文献[7]
报道的大豆苷元的数据一致,与对照品共薄层,3种
展开剂系统展开Rf值及显色行为均一致,混合物熔
点不下降,故确定化合物4为大豆苷元。
化合物5 白色针晶(甲醇),mp234~235℃,
易溶于甲醇,与 Molish试剂反应呈阳性。IR(KBr)
cm-1:3408(OH),2957,1456,1388(CH2),
1631(C=O),1517,1253(COC)。ESIMSm/z
4175[M+H]+。1HNMR(DMSOd6,400MHz)δ:
956(1H,s,C4'OH),840(1H,s,H2),805(1H,
d,J=88Hz,H5),741(2H,d,J=86Hz,H2′,
6′),723(1H,d,J=23Hz,H8),714(1H,dd,J=
88,22Hz,H6),682(2H,d,J=86Hz,H3′,
5′),510(1H,d,J=73Hz,糖上端基质子),
373~319(6H,糖上氢质子)。以上数据与文献
[7]报道的大豆苷的数据一致,与对照品共薄层,3
种溶剂系统展开Rf值及显色行为均一致,混合物熔
点不下降,故确定化合物5为大豆苷。
化合物6 白色针晶(甲醇),mp296~298℃,
难溶于三氯甲烷,易溶于甲醇,三氯化铝试剂反应呈
阳性,三氯化铁反应阳性,与 Molish试剂反应呈阳
性。ESIMS m/z4331[M + H]+。1HNMR
(DMSOd6,400MHz)δ:1295(1H,s,C5OH),963
(1H,s,C4'OH),844(1H,s,H2),740(2H,d,J=
86Hz,H2′,6′),683(2H,d,J=86Hz,H3′,
5′),674(1H,d,J=20Hz,H8),648(1H,d,J=
20Hz,H6),507(1H,d,J=76Hz,H1"),
372~318(6H,糖上氢质子)。13CNMR(DMSOd6,
100MHz)δ:1546(C2),1225(C3),1806(C4),
1614(C5),988(C6),1672(C7),945(C8),
1574(C9),1060(C10),1214(C1′),1303(C
2′,6′),1151(C3′,5′),1572(C4′),999(C1″),
731(C2″),768(C3″),695(C4″),771(C5″),
606(C6″)。以上数据与文献[8]报道的染料木苷
的数据一致,故确定化合物6为染料木苷。
化合物7 淡黄色针晶(甲醇),mp214~216
℃,易溶于甲醇,在紫外灯下,其聚酰胺薄层斑点为
淡黄色,喷洒 2% AlCl3甲醇溶液后转为亮黄色,与
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Molish试剂反应呈阳性。ESIMSm/z4315[M+
H]+。1HNMR(DMSOd6,400MHz)δ:844(1H,s,
H2),806(1H,d,J=87Hz,H5),754(2H,d,
J=87Hz,H2′,6′),725(1H,d,J=22Hz,H8),
715(1H,dd,J=87,22Hz,H6),700(2H,d,J=
87Hz,H3′,5′),512(1H,d,J=73Hz,糖上端基
质子),379(3H,s,OCH3),372~319(6H,糖上
氢质子)。以上数据与文献[4]报道的芒柄花苷的
数据一致,故确定化合物7为芒柄花苷。
化合物8 白色针晶(甲醇),mp216~219℃,
易溶于甲醇,三氯化铝试剂反应呈阳性,三氯化铁反
应阳性,与 Molish试剂反应呈阳性。ESIMSm/z
4472[M+H]+。1HNMR(DMSOd6,400MHz)δ:
1292(1H,s,5OH),849(1H,s,H2),753(2H,
d,J=84Hz,H2′,6′),702(2H,d,J=84Hz,H
3′,5′),675(1H,d,J=20Hz,H8),649(1H,dd,
J=20Hz,H6),507(1H,d,J=75Hz,糖上端基
质子),380(3H,s,OCH3),371~317(6H,糖上
氢质子)。13CNMR(DMSOd6,100MHz)δ:1552(C
2),1223(C3),1807(C4),1616(C5),999(C
6),1634(C7),941(C8),1572(C9),1062(C
10),1223(C1′),1300(C2′,6′),1135(C3′,
5′),1591(C4′),1000(C1″),731(C2″),765
(C3″),696(C4″),771(C5″),606(C6″),556
(OCH3)。以上数据与文献[9]报道的 5羟基芒柄
花苷的数据一致,故确定化合物 8为 5羟基芒柄
花苷。
化合物9 黄色粉末(甲醇),mp229~232℃,
溶于丙酮、甲醇,在紫外灯下,其硅胶薄层斑点为暗
斑,喷洒 2% AlCl3甲醇试剂后转为亮黄色。IR
(KBr)cm-1:3393(OH),1639(C=O),1601,
1512(Arom)。UV(CH3OH)(nm):249,291。
ESIMSm/z2854[M+H]+。1HNMR(DMSOd6,
400MHz)δ:1080(1H,s,7OH),903(1H,s,3′
OH),830(1H,s,H2),797(1H,d,J=88Hz,H
5),706(1H,s,H2′),695(2H,brs,H5′,6′),
693(1H,dd,J=88,21Hz,H6),687(1H,d,J=
21 Hz,H8),381(3H,s,OCH3)。
13CNMR
(DMSOd6,100MHz)δ:1532(C2),1236(C3),
1744(C4),1274(C5),1154(C6),1624(C
7),1027(C8),1576(C9),1167(C10),1242
(C1′),1166(C2′),1465(C3′),1475(C4′),
1124(C5′),1194(C6′),558(OCH3)。以上数
据与文献[10]报道的毛蕊异黄酮的数据一致,故确
定化合物9为毛蕊异黄酮。
化合物10 淡黄色粉末(甲醇),mp185~187
℃,难溶于三氯甲烷,易溶于甲醇,其甲醇溶液与三
氯化铁试剂反应呈阳性,三氯化铝反应阳性,与
Molish试剂反应呈阳性。IR(KBr)cm-1:3385
(OH),1736,1651(C=O),1605,1515,1443
(Arom)。ESIMSm/z4751[M +H]+。1HNMR
(DMSOd6,400MHz)δ:1295(1H,s,C5OH),963
(1H,s,C4'OH),844(1H,s,H2),740(2H,d,J=
85Hz,H2′,6′),683(2H,d,J=85Hz,H3′,
5′),670(1H,d,J=20Hz,H8),648(1H,d,J=
20Hz,H6),513(1H,d,J=72Hz,糖上端基质
子),432~319(6H,糖上氢质子),203(3H,s,
OAc)。13CNMR(DMSOd6,100MHz)δ:1544(C
2),1212(C3),1802(C4),1571(C5),997(C
6),1625(C7),946(C8),1576(C9),1060(C
10),1226(C1′),1304(C2′,6′),1151(C3′,
5′),1619(C4′),995(C1″),732(C2″),762
(C3″),697(C4″),738(C5″),632(C6″),
1703(OAc),207(OAc)。以上数据与文献[11]
报道的 6″O乙酰基染料木苷的数据一致,故确定化
合物10为6″O乙酰基染料木苷。
化合物11 淡黄色粉末(甲醇),mp203~206
℃,难溶于三氯甲烷,溶于丙酮,易溶于甲醇,三氯化
铝试剂反应呈阳性,三氯化铁反应阳性,与 Molish
试剂反应呈阳性。IR(KBr)cm-1:3391(OH),
1731,1651(C=O),1610,1518,1451(Arom)。
ESIMSm/z4595[M+H]+。1HNMR(DMSOd6,
400MHz)δ:953(1H,s,C4'OH),839(1H,s,H
2),805(1H,d,J=88Hz,H5),741(2H,d,J=
86Hz,H2′,6′),722(1H,d,J=22Hz,H8),
714(1H,dd,J=88,22Hz,H6),682(2H,d,J=
86Hz,H3′,5′),516(1H,d,J=72Hz,糖上端基
质子),433~320(6H,糖上氢质子),202(3H,s,
OAc)。13CNMR(DMSOd6,100MHz)δ:1542(C
2),1226(C3),1754(C4),1274(C5),1164
(C6),1622(C7),1037(C8),1576(C9),
1190(C10),1242(C1′),1306(C2′,6′),1154
(C3′,5′),1585(C4′),998(C1″),736(C2″),
767(C3″),707(C4″),742(C5″),641(C6″),
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1706(OAc),212(OAc)。以上数据与文献[11]
报道的 6″O乙酰基大豆苷的数据一致,故确定化合
物11为 6″O乙酰基大豆苷。
化合物 12 白色针晶(甲醇),mp186~188
℃,易溶于甲醇、乙醇,与 Molish试剂反应呈阳性。
ESIMSm/z4173[M+H]+。1HNMR(DMSOd6,
400MHz)δ:1061(1H,s,C7OH),954(1H,s,C4'
OH),835(1H,s,H2),794(1H,d,J=88Hz,H
5),739(2H,d,J=85Hz,H2′,6′),698(1H,d,
J=88Hz,H6),680(2H,d,J=85Hz,H3′,5′),
481(1H,d,J=92Hz,糖上端基质子),402~
323(6H,糖上氢质子)。以上数据与文献[7]报道
的葛根素的数据一致,与对照品共薄层,3种溶剂系
统展开 Rf值及显色行为均一致,与对照品混合,熔
点不下降,故确定化合物12为葛根素。
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soybeans[J]AgricBiolChem,1980,44(2):469
[12] NaokazuOhta,GoroKuwata,HiroshiAkahori,etalIsofla
vonoidconstituentsofsoybeansandisolationofanewacetyldaid
zin[J]AgricBiolChem,1979,43(7):1415
IsoflavonesfromvinesofPuerarialobata
ZHANGDewu1,RENYan1,DAIShengjun1,LIUWanhui1,LIGuihai1,2
(1SchoolofPharmaceuticalScience,YantaiUniversity,Yantai264005,China
2ShandongAcademyofChineseMedicine,Ji'nan250014,China)
[Abstract] Objective:ToinvestigatetheisoflavonesfromthevinesofPuerarialobataMethod:Thecompoundswereisolated
bycolumnchromatographyoversilicagelandRPC18,andpurifiedbySephadexLH20columnchromatographyandpreparativeTLC
ThestructureswereelucidatedonthebasisofphysicochemicalpropertiesandspectraldataResult:Twelvecompoundswereisolated
andidentifiedas:3′methoxydaidzein(1),formononetin(2),genistein(3),daidzein(4),daidzin(5),genistin(6),ononin(7),5
hydroxylononin(8),calycosin(9),6″Oacetylgenistein(10),6″Oacetyldaidzin(11),puerarin(12)Conclusion:Forthefirst
time,compounds911wereisolatedfromthegenusPuerariaplant,andcompounds1,3,68wereobtainedfromthevinesofthis
plant
[Keywords] Leguminosae;Pueraria;Puerarialobata;isoflavone
[责任编辑 王亚君]
·0223·
第34卷第24期
2009年12月
                           
Vol.34,Issue 24
 December,2009