全 文 ：!制剂!
交泰丸有效部位自微乳系统的体内外评价
杨丽娟! 刘起华+! 黄果! 张瑞! 张玉杰!
d北京中医药大学 中药学院! 北京 $$$+% +d中国中医科学院 广安门医院! 北京$$ $)# 摘要#!目的$对交泰丸有效部位自微乳化释药系统质量及大鼠在体肠吸收进行评价) 方法$考察交泰丸有效部位自微 乳液的外观%自微乳化后微乳粒径分布%外观%形态%类型%自乳化时间%药物含量及自微乳%微乳化后的稳定性+以黄连总碱为 指标$运用大鼠在体肠回流模型$分析比较交泰丸有效部位制备自微乳前后对大鼠在体肠吸收的改善) 结果$交泰丸有效部
位自微乳化后微乳平均粒径为 )&d+ 20$可在 ) 0N2内基本乳化完全+自微乳液在室温下放置 ) 个月较稳定+自微乳化后的微 乳液在 )% h下$d 0/S*Gf E中的相对剩余百分含量!=和表观吸收速率常数!S
B
值均获得明显提高!$n$d $$前者的S B 是后者的 +d#e) 结论$自微 乳化给药系统能显著改善交泰丸有效部位中黄连总碱大鼠小肠吸收$增加肉桂油在制剂中的稳定性) 适合难溶性和难吸收 药物的口服吸收$提高其生物利用度$是具有良好应用前景的中药制剂新剂型) 关键词#!交泰丸+有效部位+黄连总碱+自微乳系统+体内外评价+肠吸收 稿件编号#!+$$ *$*$) $$+ 基金项目#!国家自然科学基金项目!)$#%+( 通信作者#!!张玉杰$教授$博士生导师$ PMS#!$$ (&%)(#($I5 0BNS#Y?61++%3+#d./0 !!交泰丸方出自明*韩懋韩氏医通($由黄连%
肉桂 + 味药组成$是经典的治疗心肾不交型失眠的 中药方剂) 交泰丸镇静催眠的成分主要在于黄连生 物碱$肉桂成分在其中发挥协同作用./ ) 然而$黄 连生物碱水溶性差$口服生物利用度很低$黄连生物 碱又是肠道 F5糖蛋白的底物$外排作用造成其吸收
减少.+5)/ ) 同时$交泰丸中肉桂主要成分桂皮醛不稳 定$易氧化$易挥发) 故本研究在交泰丸有效部位自 微乳化释药系统处方和制备工艺研究的基础上$对
其理化性质和大鼠在体吸收特性进行研究)
!材料
EF5 $$系列高效液相色谱仪!四元梯度洗脱 系统$在线真空脱气机$X4X型检测器$4DNSM2@色谱 工作站$%%+N手动进样器+精密电子天平 !I>5 (+4型$日本 4rX公司+电子天平!P5$$ 型$常 熟双杰测试仪器厂+紫外5可见分光光度计!_5+$ $$型$日本日立公司+超声波清洗器!舒美 c^ +( 型$ 昆山市超声仪器有限公司+电热恒温水箱!<_&+$ 型$上海一恒科学仪器有限公司+数显恒温磁力搅 拌器!荣华 (5+ 型$江苏省金坛市荣华仪器制造有 限公司+透射电子显微镜!WIHG+)$$ 日本+马尔
文粒度分析仪!]M@BUNYMC;B2/5]8$英国+江南 >T] 智能型人工气候箱!宁波江南仪器厂+电子蠕动泵 !XXR5)$$型$上海之信仪器有限公司)
黄连总碱!自制$总碱质量分数 %*d&%e+肉桂 挥发油!武汉远城科技发展有限公司$桂皮醛质量
分数m(e+盐酸小檗碱和桂皮醛对照品!中国药
品生物制品检定所$批号分别为$%)5+ $$+$($ $%$5+$$ %&+聚氧乙烯醚 ! &$ 氢化蓖麻油
!E&$$德国RBUV公司+辛酸=癸酸甘油
三辛癸酸酯!OP<<$英国乙腈为色谱纯+其余试剂均为分析纯)
8X大鼠$体重!+$ p$D$雄性$北京维通利华实 验动物中心$合格证号 8(!方法
(_!交泰丸有效部位自微乳的制备
称量丙二醇$按质量分数 )e加入黄连总碱$超
声使完全溶解$再依次加入 E&$!$ h
下熔融和 OP<<$然后加入肉桂油.OP<<5A?/C>E&$5丙二醇5黄连总碱5肉桂油!以桂皮醛含量 计!+$o$o)$o)o$d#/$混合均匀$即得到澄清透 明的交泰丸有效部位自微乳) (_(!自微乳理化性质测定 *#&+* 第 ) 卷第$ 期
+ $$年 月 !!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! ! [/Sd)$ :UULM!$ 9B6$ +$$
(_(_!外观和形态!交泰丸有效部位自微乳液为
澄清透明的棕红色液体) 取该自微乳液适量滴于
$倍的 )% h蒸馏水中$轻轻摇匀 0N2$点样于铜 网上$用 e磷钼酸溶液负染$透射电镜观察微乳微 观形态) (_(_(!粒径分布!取适量自微乳$滴入 $倍 )% h 蒸馏水中$轻轻振摇$形成交泰丸微乳液$用粒度分
析仪测定 )% h下粒径)
(_(_&!微乳类型的判定!通过染色法.&/鉴别微乳
类型$取自微乳适量$加适量水轻微搅拌使形成微
乳$同时分别加入油溶性染料苏丹红和水溶性染料 溶液各 + 滴$静止放置$观察 + 种染料!红色和蓝 色在微乳中扩散速度的快慢以及外观的变化) (_(_Q!自乳化时间的测定.5#/!取交泰丸有效部位 自微乳$d& D$加入 &$ 0G)% h $d 0/S*Gf盐酸 溶液中$ $$C*0N2f温和搅拌$于 $d$$ d$+$)$&$$#$%$*$$)$ 0N2定时取液$于$$20处测 定吸光度 2$平行测定 份$以 0N2 测得的 2$
作
为 $$e$求出各时间点2的相对百分数2T2 $ $以各 时间点的2T2 $ 对时间作图) (_&!紫外分光光度法测定自微乳中黄连总碱含量 (_&_!测定波长的选定!取盐酸小檗碱对照品溶 液%交泰丸有效部位自微乳和去除黄连总碱的空白 自微乳溶液!先以少量乙醇溶解$后用水稀释成适 当浓度$以 &$e乙醇为空白$于 +$$ g& $$20扫描 测定) (_&_(!方法学考察!取盐酸小檗碱对照品储备液 !$d+)$ + D*G f 用 &$e乙醇稀释成质量浓度为 d$ +d)$+$ &d#$&$ #d*$#$ *d+$($ d$ )d(+ 0D*G f的溶液$分别于 )& 20处测定吸光度$以 其质量浓度4!0D*Gf为横坐标$吸光度 3为纵 坐标得标准曲线) 同法制备低%中%高 ) 个质量浓度 !+d)$+$#d*$#$d 0D*G f 的盐酸小檗碱对照 品溶液$依法测定吸光度$每个浓度连续测定 次$ 计算日内精密度$每日测定 次$连续测定 J$计算 日间精密度) 取黄连总碱自微乳样品液适量$少量 乙醇溶解后$用 &$e乙醇制成低%中%高 ) 个质量浓 度溶液$依法分别于制备后$$ $+$&$($+$+& ? 测 定吸光度值$考察溶液的稳定性) 取黄连总碱空白
自微乳液及盐酸小檗碱储备液!$d++# & D*Gf$
与上同法制成含低%中%高 ) 个浓度!+d)$+$#d*$#$
d 0D*G
f
盐酸小檗碱的供试液$每浓度平行 操作 份$分别测定吸光度值$计算总碱含量和平均 回收率) (_Q!EFG<法测定自微乳中桂皮醛含量 (_Q_!色谱条件!迪马< ( 柱!&d# 00i+$ 00$0+流动相乙腈5水5醋酸!$o$o$d+柱温 +
h+X4X检测器$检测波长 +(& 20+进样量$

G)
(_Q_(!方法学考察!取去除肉桂油的空白自微乳
溶液%桂皮醛对照品溶液和自微乳样品液$分别进样 并记录EFG<图) 取桂皮醛储备液!$d++ D*Gf
适量$分别用甲醇稀释成质量浓度为 d++$+d&&$&d(($%d)+$*d%#$+d+$&d#&$+&d& 0D*G
f的溶
液$依法测定峰面积$以桂皮醛质量 4!

D为横坐
标$以峰面积 3为纵坐标得标准曲线) 分别取低% 中%高 ) 个质量浓度!+d&&$%d)+$+d+ 0D*Gf的 对照品溶液$依法分别重复进样 次$计算峰面积的 日内精密度) 取空白自微乳加入桂皮醛对照溶液$
加甲醇制成含桂皮醛低%中%高 ) 个质量浓度!+d&&$%d)+$+d+ 0D*G
f
的供试液$各浓度平行配制 份$依法测定$计算回收率) (_$!自微乳液稳定性考察
(_$_!室温及 & h下稳定性!取交泰丸有效部位 自微乳液于室温及 & h冰箱中放置 ) 个月$于 $$$ +$) 月观察其外观+取 $d D自微乳液加入 $ 0G蒸 馏水$轻轻振摇$记录自微乳化时间+分别测定黄连 总碱和桂皮醛含量4$以 $ J 的含量 4 $ 为$$ e$求 出各时间点4量相对于$ J 含量的百分数4T4
以
各时间点的4T4
$对时间作图) (_$_(!光照%高温高湿下稳定性!将装有 + 0G自
微乳的 0GRF管密封置于光照!& $$S7%高温高 湿!$ h$%e条件下各 $ J$同时于$$ $$J 观 察其外观$测定自乳化时间$并且分别对黄连总碱和 桂皮醛含量 4进行测定) 以自微乳中加入的药量 为$$ e$求出各时间点 4值的相对百分数 4T4$
$以各时间点的4T4$
对时间作图)
(_$_&!自微乳化后微乳稳定性考察!取自微乳适 量$加入 $$$ 倍 )% h $d 0/S*0Gf E轻轻振摇$得到澄清透明的橙黄色微乳溶液$将此微
乳液在 )% h水浴中放置 ( ?$分别于$ $$+$)$&$#$ ( ?观察溶液外观$取上清液测定微乳液中黄连总 碱和桂皮醛的含量$平行操作 ) 次) (_Y!大鼠在体肠吸收研究 (_Y_!紫外分光光度法测定肠循环液中黄连总碱含 *%&+* 第 ) 卷第 $ 期 +$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
[/Sd)$:UULM!$
9B6$+$$量!分别取盐酸小檗碱对照品储备液!$d++# & D*
G
f
用 c5>液稀释成质量浓度为 d)+$+d+#&$
&d+($#d%*+$*d$#$d)+$)d(&$d(&( 0D*G
f
系列对照品溶液$以c5>液为空白$分别于 )& 20处
测定吸光度) 以吸光度 3对其质量浓度 4!0D*
G
f
进行线性回归) 取黄连总碱空白自微乳液及盐
酸小檗碱储备液!$d++# & D*Gf$用空白肠回流液
制备成含低%中%高 )种质量浓度!+d+#&$#d%*+$d)+
0D*G
f
的盐酸小檗碱供试液$每种浓度平行操作 份$分别测定吸光度值$计算总碱含量和平均回收率) (_Y_(!黄连生物碱在空白肠循环液中的稳定性! 用空白肠循环液!c5>液分别配制质量浓度为$$0D*G f交泰丸有效部位微乳液及交泰丸有效部位 肠循环对照液!按处方比例取黄连总碱和肉桂油以 少量丙二醇溶解后再用 c5>液定容$每溶液平行
操作 ) 份$在 )% h恒温水浴中$分别于 $$+$&$# ? 取样 $d) 0G$过 $d+ 0滤膜$用甲醇稀释适当倍 数$测定黄连总碱的含量) 以 $ ? 黄连总碱的含量 为4 $ $,小时的含量为4$计算4T4 $ 的百分含量) (_Y_&!肠壁物理吸附的影响!剪取清洗后的空白 小肠段约 .0!共 # 段$将黏膜层翻出$置于 ( 0G 交泰丸有效部位微乳液与对照液中$每溶液在 )% h 水浴中孵育 # ?$取出肠段$取孵育液适量$用甲醇稀 释适当倍数$测定孵育液中的药物浓度$计算 # ? 后 黄连总碱的剩余百分率) (_Y_Q!大鼠在体小肠吸收试验!取自由饮水条件 下禁食 +& ?的 8X大鼠$腹腔注射 +e的乌拉坦溶 液麻醉$背位固定于操作台上$红外灯保持体温$沿 腹中线切开腹腔!约 ) .0$分别与小肠的近端!十 二指肠距幽门 .0处%远端!回肠下端距盲肠 ) .0处剪一小口$各插入直径约 $d) .0的聚乙烯 管$用线结扎) 将长管两端的聚乙烯管与蠕动泵的 胶管相连$形成回路$开启蠕动泵) 用适量 )% h生 理盐水将小肠内容物冲洗干净后$换成 )% hc5> 液$以 0G*0N2f的速度循环 $ 0N2$排空 c5> 液$取 +$$ 0G供试液置于 +$0G量筒中$恒温
!)% p$d h$打开蠕动泵$以 0G*0N2f的流速 循环$待药液充满整个回路$排尽肠道内气泡$记录
量筒中减少的药液体积$作为回路中药液体积$$0N2后调速至 +d 0G*0N2f$并立即从量筒中取样
d 0G为药物 $时间样品$记录量筒中药液体积$补加 d 0Gc5>营养液$后于 $d$$d$+$+d$
)$)d$&$&d$$d$# ? 摇匀供试液$取样 d 0G 并记录量筒中药液体积$同时补加 c5>营养液$循 环 # ? 后$终止试验) 各样液过 $d+ 0滤膜$用甲
醇稀释适当倍数后$紫外测定各时间点的黄连总生 物碱浓度1) 用量筒法定量各时间点肠循环液的体 积E$求得各时间点的剩余药量 4j1*E) 以循环
液中黄连总生物碱的相对剩余百分含量 =对取样
时间 ,做图) 其中$黄连总生物碱的相对剩余百分 含量=j4T4$
!4
$为$ 时间点肠循环液中黄连总碱
的浓度$吸收百分率2j f=) 以4值的对数和取 样时间,作图) 利用公式S24jS24$
fS
B
*,$求出表 观吸收速率常数 S B ) 将交泰丸有效部位微乳液中 黄连总碱在大鼠小肠的 =$S
B
与交泰丸有效部位对
照液采用,检验进行比较)
&!结果
&_!自微乳理化性质
自微乳液的外观呈澄清透明的棕红色液体$微 乳呈圆球型$ 大小均一$见图 + 平均粒径为 !)&d+ pd% 20$粒径小$分布较窄$呈单峰型+
经鉴别乳化后的微乳类型为 H=Z 型+自乳化乳化
时间约为 ) 0N2$见图 +) 图 !交泰丸有效部位微乳形态图 图 +!交泰丸有效部位 8IXX8自乳化时间曲线!)j &_(!自微乳中黄连总碱的含量 盐酸小檗碱和交泰丸有效部位自微乳的最大吸 收峰均出现在 )& 20左右$空白自微乳液在此波长
处无干扰) 盐酸小檗碱质量浓度4!0D*Gf与吸
*(&+*
第 ) 卷第 $期 +$$年 月 !!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! ! [/Sd)$ :UULM!$9B6$ + $$光度3的回归方程为 3j$d$#) )4k$d$$ /j
$d*** *$线性范围 d g)d(+ 0D*Gf) 小檗
碱的低%中%高 ) 种浓度的平均回收率分别为
$&d)(e$$d&e$ $$d+e) 日内和日间精密度 及稳定性的>8X均小于 e) 自微乳中黄连总碱的 质量分数见表 ) 表 !自微乳中黄连总碱和桂皮醛质量分数 ! # Mp?$)j) 0D*D f 批号 黄连总碱 桂皮醛 $(+++ +*d%% p$d$) d*) p$d$ $(+)$ )$d# p$d&) d*+ p$d+* $*$++ +*d p$d# d% p$d* &_&!自微乳中桂皮醛的含量 空白自微乳对桂皮醛 EFG<测定无干扰+峰面 积3对桂皮醛质量4! D进行线性回归$得回归方 程3j* )*)d#4k#d#+ ($/j$d*** *$桂皮醛在 $d$+ + g$d+&& D峰面积与其质量呈良好的线性 关系) 低%中%高 ) 个浓度的桂皮醛对照品溶液日内 精密度小于 e) 桂皮醛的低%中%高 ) 个浓度的平 均回收率分别为 *(d&%e$$ d&$e$**d+$e) 自 微乳中桂皮醛质量分数见表 ) &_Q!自微乳液稳定性 室温下自微乳液均呈透明澄清的溶液$可见有
少量黄连总生物碱析出+& h冰箱下的样品呈不透
明的稠膏$样品底部有生物碱析出$说明黄连总生物
碱在室温下放置比在 & h下稳定) 桂皮醛含量 ) 个
月内基本未变) 自微乳化时间均在 g) 0N2)
交泰丸有效部位自微乳在光照!& $$S7%高温 高湿!$ h$%e湿度条件下放置 $ J 后$外观均 为澄清透明的棕红色溶液+自乳化时间均在 g) 0N2) 黄连生物碱的含量基本稳定$桂皮醛在光照条 件下较稳定$而在高温高湿条件下放置 $ J 后$含 量降低了约 $e) &_$!自微乳化后微乳稳定性 微乳液在 )% h水浴中放置 ( ?$外观一直保持 澄清透明$黄连总碱%桂皮醛均在 *e g$e$与 $ ?相差不大$故交泰丸有效部位微乳液在 )% h水浴 中放置 ( ?$稳定性良好) &_Y!微乳大鼠在体肠吸收 &_Y_!肠循环液中黄连总碱的含量测定!小檗碱 对照品溶液%交泰丸自微乳液在 )& 20处有最大吸 收$微乳中其他成分及空白肠循环液在此波长处无 干扰) 黄连总碱测定的标准曲线 3j$d$#( 4f $d$$ ($/j$d*** %$线性范围 d)+ gd(&( 0D* G f ) 低%中%高 ) 种浓度的盐酸小檗碱平均回收率 分别为 (#d&(e$((d*e$*d$%e)
&_Y_(!黄连生物碱在空白肠循环液中的稳定性!
以 $?黄连总碱的含量对比$经 # ? 孵育$黄连总碱 含量基本不变$说明交泰丸有效部位自微乳液%有效
部位对照液中的黄连生物碱在空白肠循环液中有较
好的稳定性) 结果见图 ))
图 )!黄连总生物碱在空白肠循环液中的
稳定性!)j)
&_Y_&!肠壁物理吸附的影响 交泰丸自微乳液%交
泰丸有效部位对照液中黄连总生物碱的剩余百分率
分别为!*#d*) pd&)e$!(%d(+ pd&e) 微乳 液肠壁物理吸附较少$对照液有少量吸附)
&_Y_Q!大鼠在体小肠吸收试验 大鼠在体肠循环 # ?
后$交泰丸有效部位微乳%有效部位对照液中黄连总 碱的相对剩余百分含量分别为 ()d*&e$(*d+#e$吸 收百分率分别为 #d$#e $$d%&e+S B 分别为 $d$+*$ $d$* ? f $前者是后者的 +d#e) 线性方程的相关 系数/m$d*$二者的相对剩余百分含量=和S B 经, 检验均存在极显著差异!$n$d$$ 交泰丸有效部位
微乳液中黄连总生物碱的吸收速率明显大于交泰丸
有效部位对照液) 结果见图 &)
图 &!交泰丸有效部位自微乳液中黄连
总碱大鼠在体肠吸收曲线!)j
**&+*
第 ) 卷第 $期 +$$年 月 !!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! ! [/Sd)$ :UULM!$9B6$ + $$Q!讨论 交泰丸有效部位自微乳液为澄清透明的棕 红色液体) 自微乳化后的微乳为澄清透明的橙 黄色溶液+微乳呈圆球型$大小均一+粒径仅为 )&d+ 20$多分散系数小$自微乳化处方 ) 0N2 内已基本乳化完全) ) 批样品黄连总碱的质量 分数均在 +* g) 0D*Df $桂皮醛质量分数在 d g# 0D*D f ) 交泰丸有效部位自微乳在室温%& h下放置 ) 个月的稳定性结果表明$桂皮醛含量 ) 个月内基本 没有变化) 肉桂油属于挥发油$易挥发$并且其化学 性质不稳定$易氧化) 将肉桂油加入自微乳化给药 体系中$能很好的溶解于自微乳化体系$防止其挥发 和氧化$增加了稳定性) 大鼠在体肠灌流实验结果表明$交泰丸有效部 位微乳液与有效部位对照液中黄连总碱的 =和 S B 值均存在及显著差异 !$n$d$$ 前者是后者的
+d#e$表明交泰丸有效部位自微乳化系统显著提 高黄连总碱的肠吸收) 黄连生物碱为F5糖蛋白底物$在肠内受 F5糖蛋
白外排$是影响其吸收的重要因素) 本实验在处方 中曾筛选具有 F5糖蛋白抑制作用的聚氧乙烯脱水 山梨醇单油酸酯!P,MM25($$面活性剂$但由于黄连总碱在 度较小$P,MM25($ 不能与所选择的油相OP<<互溶$故未被考虑) 今后的研究可以考虑寻找更加合适的 具有F5糖蛋白抑制作用的表面活性剂及助表面活 性剂组成处方$可能更好的增加药物的吸收$提高口 服生物利用度) 参考文献# ./!全世建$林杏娥$黎同明$等-交泰丸的研究综述.W/-时珍国医
国药$+$$$#!#&*-
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./!崔升淼$赵春顺$何仲贵d葛根黄酮自微乳化软胶囊的制备和
溶出度的考察.W/d中成药$+$$%$+*!%#**)d
.#/!蔡勤$梁隆$黄艳萍$等-川芎油自乳化释药系统体外评价 .W/-中国中药杂志$+ $$%$)+!*#+$$ )d
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