全 文 ：ＵＰＬＣ测定鸡眼睛药材中鞣花酸类化合物的含量
王爱民１，刘智２，王海军１，李勇军１，廖尚高１，王永林１
（１贵阳医学院 药学院，贵州 贵阳 ５５０００４，
２贵州益康制药有限公司，贵州 贵阳 ５５０００８）
［摘要］　目的：建立超高效液相色谱（ＵＰＬＣ）法测定鸡眼睛（野鸦椿）中鞣花酸类化合物含量的方法。方法：采用Ａｃｑｕｉｔｙ
ＢＥＨＣ１８（２１ｍｍ×１５０ｍｍ，１７μｍ）色谱柱；以乙腈０１％磷酸为流动相，梯度洗脱；流速０２ｍＬ·ｍｉｎ
－１；检测波长２４５ｎｍ。
结果：鸡眼睛药材中五种鞣花酸类化合物在２０ｍｉｎ内得到完全分离并进行了含量测定。方法快速、专属，线性关系、精密度和
准确度良好。结论：通过研究制定了鸡眼睛（野鸦椿）药材中鞣花酸类化合物的质量控制方法。
［关键词］　鸡眼睛（野鸦椿）；鞣花酸类；超高液相色谱（ＵＰＬＣ）
［收稿日期］　２００９０８０７
［基金项目］　贵州省中药现代化科技产业研究开发专项基金项目
（黔科合中药专字［２００７］５０１４号）
［通信作者］　王永林，Ｔｅｌ：（０８５１）６９０８８９９，Ｅｍａｉｌ：ｇｙｗａｍ１００＠
ｇｍａｉｌｃｏｍ
　　鸡眼睛为省沽油科植物野鸦椿Ｅｕｓｃａｐｈｉｓｊａｐｏｎ
ｉｃａ（Ｔｈｕｎｂ）Ｄｉｐｐｅｌ的带花或果的枝叶，在我国大部
分省份和地区均有分布［１］，为贵州省少数民族用
药，收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》
２００３年版，具有理气止痛，消肿散结，祛风止痒之功
效，临床用于头痛，眩晕，胃痛等症［２］。文献报道鸡
眼睛（野鸦椿）含有苯丙素类、黄酮类、酚酸类、生物
碱类、三萜类和芳香化合物等［３９］　，经作者对其化
学成分研究，从中分离出齐墩果酸，３，３′二甲氧基
鞣花酸４′Ｏβ葡萄糖苷，香草醛，没食子酸，原儿
茶酸，ｊｕｎｉｐｅｔｒｉｏｌｏｓｉｄｅＡ，香草酸，Ｓｉｎａｐｉｃａｌｄｅｈｙｄｅ，３，
３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏα阿拉伯糖苷，３，３′二甲
氧基鞣花酸４′Ｏβ木糖苷、３，３′二甲氧基鞣花酸、
ｃｏｒｃｈｏｉｏｎｏｓｉｄｅＣ，５羟甲基糠醛、鞣花酸等化合物。
《贵州省中药、民族药材质量标准》２００３年版中
对鸡眼睛（野鸦椿）药材的质量控制只有性状和理
化鉴别，目前对该药材的质量研究国内仅见性状和
显微鉴别的研究［１０］，未见含量测定方面研究的报
道。为此，作者选择了其中具一定有活血化瘀和抗
氧化等活性作用的鞣花酸类化合物［１１１３］作为质量
控制指标进行含量测定研究，结果表明，所建立的方
法快速、专属和准确，可为该药材的开发应用提供试
验基础。
１　仪器与试药
ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣ（美国 Ｗａｔｅｒｓ公司，包括二元
高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极
管阵列检测器、Ｅｍｐｏｗｅｒ２色谱工作站）；ＡＥ２４０电
子天平（１／１０万，瑞士梅特勒托利上海公司）；实验
室超纯水机（四川沃特尔科技发展有限公司）。
鞣花酸、３，３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏβ葡萄糖
苷，３，３′二甲氧基鞣花酸４′ＯαＤ阿拉伯糖苷，３，
３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏβ木糖苷和 ３，３′二甲氧
基鞣花酸５种对照品为作者从鸡眼睛（野鸦椿）药
材中提取分离制备，采用１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ，ＭＳ，ＵＶ，
ＩＲ波谱进行了结构鉴定，上述 ５种对照品分别用
ＵＰＬＣＰＤＡ在多个检测波长下测定，其峰面积归一
化结果均大于９８％；乙腈为色谱纯（Ｍｅｒｃｋ公司）、
甲醇、磷酸等试剂均为国产分析纯。实验用药材９
批由贵州益康制药有限公司提供，均采收至贵阳市
乌当区，由贵阳医学院龙庆德副教授鉴定为省沽油
科植物野鸦椿Ｅｊａｐｏｎｉｃａ的干燥枝叶。
２　方法与结果
２１　色谱条件　ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８色谱
（２１ｍｍ×１００ｍｍ，１７μｍ）；流动相乙腈（Ａ）
０１％磷酸（Ｂ）梯度洗脱，０～１ｍｉｎ，Ａ６％，１～１９
ｍｉｎ，Ａ从 ６％ ～３５％，１９～２０ｍｉｎ，Ａ从 ３５％ ～
１００％；梯度曲线均为直线；流速０２ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱
温４０℃；检测波长２４５ｎｍ，进样量１０μＬ。
２２　适用性试验　分别吸取对照品混合溶液和药
材供试品溶液１０μＬ，在上述色谱条件下，用 ＵＰ
ＬＣＰＤＡ测定，结果供试品溶液色谱中５种被测成
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分的保留时间与上述５种对照品保留时间一致，与
其他物质峰分离度大于 １５，理论塔板数均在
１６００００以上，各被测定成分色谱峰的紫外光谱与各
自对照品的紫外光谱一致，色谱分析结果见图１。
Ａ对照品；Ｂ样品；１鞣花酸；２３，３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏβ葡萄糖苷；３３，３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏα阿拉伯糖苷；４３，３′二甲
氧基鞣花酸４′Ｏβ木糖苷；５３，３′二甲氧基鞣花酸（表１，２同）。
图１　对照品和供试品溶液的ＵＰＬＣ图
２３　溶液制备　对照品溶液制备：分别称取鞣花
酸，３，３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏβ葡萄糖苷，３，３′二
甲氧基鞣花酸４′ＯαＤ阿拉伯糖苷，３，３′二甲氧
基鞣花酸４′Ｏβ木糖苷和 ３，３′二甲氧基鞣花酸
对照品２０２３，８８４，４７８，１３３０和６５８ｍｇ，分别置
５个２５ｍＬ量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，加甲
醇至刻度，摇匀，得对照品储备液。分别精密量取上
述对照品储备液各１ｍＬ，置１０ｍＬ量瓶中，加甲醇
稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品的制备　取药材粉末约１ｇ（过４０目），
精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流
６ｈ，用少量甲醇洗涤容器，洗液并入提取液，水浴浓
缩至约５ｍＬ，转移至１０ｍＬ量瓶中，用甲醇稀释至
刻度，摇匀，即得。
２４　线性关系考察　分别精密量取上述５种对照
品储备液各０２，０６，１，１４，１８ｍＬ，分别置１０ｍＬ
量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得系列浓度的对
照品溶液，按２１项的色谱条件进样测定。以进样
质量浓度（Ｘ）为横坐标，峰面积（Ｙ）为纵坐标，绘制
标准曲线，线性回归方程见表１。
表１　线性回归方程和线性范围
化合物 线性回归方程
相关系数
／ｒ
线性范围
／ｍｇ·Ｌ－１
１ Ｙ＝１２４９×１０７Ｘ－６１５９×１０４ ０９９９８ １６２～１４６
２ Ｙ＝６７５４×１０６Ｘ－１１０２×１０４ ０９９９７ ７０７～６３６
３ Ｙ＝１２４８×１０７Ｘ－１３４５×１０４ ０９９９８ ３８２～３４４
４ Ｙ＝９０６８×１０６Ｘ－１８７２×１０４ ０９９９８ １０６～９５８
５ Ｙ＝６９５３×１０６Ｘ－９０４８×１０３ ０９９９８ ５２６～４７４
２５精密度试验　取鸡眼睛药材样品９份，分别按
０５，１，１５ｇ３种取量，每种称量各３份，精密称定，
照供试品溶液的制备方法制备份供试液，分别测定，
ＲＳＤ值分别为２４％，２８％，２９％，２７％，２０％。
２６　耐用性考察　取同一供试品溶液，分别于
０，１，２，４，８ｈ进样测定，结果 ５种被测成分平均
峰面 积 的 ＲＳＤ分 别 为 １４％，１６％，２１％，
１７％，１２％（ｎ＝５），表明供试品溶液稳定性在
８ｈ内稳定。另取样品粉末按供试品溶液的制备
方法制备３份供试液，分别采用３支不同批次的
ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８（２１ｍｍ×１００ｍｍ，１７
μｍ）色 谱 柱 （系 列 号：０１５７３８０７０１５５０１，
０１５７３８２８０３５３０１和０１５７３８０７０１５５５８）在上述色
谱条件下进行测定，其结果基本一致；同时还对
不同柱温（３５，４０，４５℃）进行考察，其结果也基
本一致，表明方法的耐用性较好。
２７　回收率试验　精密称取已测定含量的鸡眼
睛药材６份（过４０目筛）各０５ｇ，分别精密加入
上述５种混合对照品溶液适量，室温挥干，按２３
项制备供试品溶液，按 ２１项色谱条件测定，各
成分的回收率在 ９７１６％ ～１０２１％，ＲＳＤ小于
３２％，见表２。
２８　样品测定　取不同批次的鸡眼睛药材１ｇ，精
密称定，照２３项制备供试品溶液，按２１项色谱条
件测定，计算含量，结果见表３。
３　讨论
在供试品溶液制备中分别考察了不同浓度乙
醇、甲醇等溶剂进行回流、超声、索式提取等方法，结
果以甲醇索式提取效果较好。
经ＵＰＬＣＰＤＡ测定，其中 ３，３′二甲氧基鞣花
酸、３，３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏβ木糖苷、３，３′二甲
氧基鞣花酸４′Ｏα阿拉伯糖苷、３，３′二甲氧基鞣
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　　 表２　５个鞣花酸类化合物加样回收率
化合物
样品量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均回收率
／％
ＲＳＤ
／％
１ ０．２２６１ ０．２２６ ０．４５６９ １０２．１ ９８．５２ ２．７
０．２２３９ ０．４４１１ ９６．１１
０．２２８８ ０．４５０１ ９７．９２
０．２３２１ ０．４４７７ ９５．４０
０．２３１４ ０．４５３９ ９８．４５
０．２２７８ ０．４５６３ １０１．１
２ ０．１０６８ ０．１１８ ０．２２５９ １００．９３ １０２．１ ３．１
０．１０５７ ０．２２８３ １０３．９
０．１０８０ ０．２３０８ １０４．１
０．１０９６ ０．２２９１ １０１．３
０．１０９３ ０．２３３６ １０５．３
０．１０７６ ０．２２２３ ９７．２０
３ ０．１１１０ ０．１２１ ０．２２９４ ９７．８５ ９８．７１ ３．０
０．１０９９ ０．２３０３ ９９．５０
０．１１２３ ０．２２９１ ９６．５３
０．１１４０ ０．２３５７ １００．５８
０．１１３６ ０．２３７９ １０２．７
０．１１１９ ０．２２７２ ９５．２９
４ ０．１３２５ ０．１４２ ０．２７２６ ９８．７ ９７．１６ ２．９
０．１３１２ ０．２６６７ ９５．４２
０．１３４１ ０．２７３６ ９８．２４
０．１３６０ ０．２７２９ ９６．４１
０．１３５６ ０．２８２２ １０３．２
０．１３５５ ０．２７０６ ９５．１４
５ ０．１２２９ ０．１３５ ０．２５９６ １０１．３ ９８．５２ ３．２
０．１２１７ ０．２５０４ ９５．３３
０．１２４３ ０．２６０７ １０１．０
０．１２６１ ０．２５８４ ９８．００
０．１２５８ ０．２５５６ ９６．１５
０．１２３８ ０．２６３１ １０３．２
表３　不同批次鸡眼睛药材中５个鞣花酸类
化合物质量分数（ｎ＝２） ｍｇ·ｇ－１
批号 １ ２ ３ ４ ５ 总量
２００８０３０６ ０．４５５８０．２１５２０．２２３８０．２６７１０．２４７７ １．４１０
２００８０５２３ ０．４５５３０．２４７２０．２８４９０．２９２２０．２９３７ １．５７３
２００８０６２６ ０．５１１８０．２４０２０．２５８５０．２９９５０．２６８８ １．５７９
２００８０８２５ ０．３２６９０．１８４６０．２０１００．２４９４０．２２４０ １．１８６
２００８１１１４ ０．４３２６０．１９８４０．１９１６０．１８４３０．１７５２ １．１８２
２００９０２１０ ０．７８９８０．５２３９０．３２３６０．４８０８０．３２７６ ２．４４６
２００９０３１１ ０．６７０９０．３６７６０．２５４９０．３２９２０．４２３１ ２．０４６
２００９０３１９ ０．２４８３０．１４０６０．１５５２０．９１８４０．３７２６ １．８３５
２００９０３２０ ０．３６２７０．６０５１０．３３４４０．７９８８０．４３９８ １．９３６
花酸４′Ｏβ葡萄糖苷在２４５ｎｍ均具有最大吸收，
鞣花酸在２５４ｎｍ有最大吸收，但在２４５ｎｍ也有较
大吸收，综合考虑选择２４５ｎｍ为含量测定波长。
本试验将超高液相色谱用于鸡眼睛中多指标成
分含量测定研究，与普通 ＨＰＬＣ采用５μｍＣ１８填料
的色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ）比较，其分析速度提
高了近４倍，具有较高的分析通量，同时也具有良好
的准确度、精密度和耐用性，可见超高效液相色谱作
为一种新的色谱技术应用于中药材及其制剂质量控
制有着非常广阔的前景。
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