全 文 ：ＵＰＬＣ测定鸡眼睛药材中鞣花酸类化合物的含量
王爱民１，刘智２，王海军１，李勇军１，廖尚高１，王永林１
（１贵阳医学院 药学院，贵州 贵阳 ５５０００４，
２贵州益康制药有限公司，贵州 贵阳 ５５０００８）
［摘要］ 目的：建立超高效液相色谱（ＵＰＬＣ）法测定鸡眼睛（野鸦椿）中鞣花酸类化合物含量的方法。方法：采用Ａｃｑｕｉｔｙ
ＢＥＨＣ１８（２１ｍｍ×１００ｍｍ，１７μｍ）色谱柱；以乙腈０１％磷酸为流动相，梯度洗脱；流速０２ｍＬ·ｍｉｎ
－１；检测波长２４５ｎｍ。
结果：鸡眼睛药材中５种鞣花酸类化合物在２０ｍｉｎ内得到完全分离并进行了含量测定。方法快速、专属，线性关系、精密度和
准确度良好。结论：通过研究制定了鸡眼睛（野鸦椿）药材中鞣花酸类化合物的质量控制方法。
［关键词］ 鸡眼睛（野鸦椿）；鞣花酸类；超高液相色谱（ＵＰＬＣ）
［收稿日期］ ２００９０８０７
［基金项目］ 贵州省中药现代化科技产业研究开发专项基金项目
（黔科合中药专字［２００７］５０１４号）
［通信作者］ 王永林，Ｔｅｌ：（０８５１）６９０８８９９，Ｅｍａｉｌ：ｇｙｗａｍ１００＠
ｇｍａｉｌｃｏｍ
鸡眼睛为省沽油科植物野鸦椿Ｅｕｓｃａｐｈｉｓｊａｐｏｎ
ｉｃａ（Ｔｈｕｎｂ）Ｄｉｐｐｅｌ的带花或果的枝叶，在我国大部
分省份和地区均有分布［１］，为贵州省少数民族用
药，收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》
２００３年版，具有理气止痛，消肿散结，祛风止痒之功
效，临床用于头痛，眩晕，胃痛等症［２］。文献报道鸡
眼睛（野鸦椿）含有苯丙素类、黄酮类、酚酸类、生物
碱类、三萜类和芳香化合物等［３９］ ，经作者对其化
学成分研究，从中分离出齐墩果酸，３，３′二甲氧基
鞣花酸４′Ｏβ葡萄糖苷，香草醛，没食子酸，原儿
茶酸，ｊｕｎｉｐｅｔｒｉｏｌｏｓｉｄｅＡ，香草酸，ｓｉｎａｐｉｃａｌｄｅｈｙｄｅ，３，
３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏα阿拉伯糖苷，３，３′二甲
氧基鞣花酸４′Ｏβ木糖苷、３，３′二甲氧基鞣花酸、
ｃｏｒｃｈｏｉｏｎｏｓｉｄｅＣ，５羟甲基糠醛、鞣花酸等化合物。
《贵州省中药、民族药材质量标准》２００３年版中
对鸡眼睛（野鸦椿）药材的质量控制只有性状和理
化鉴别，目前对该药材的质量研究国内仅见性状和
显微鉴别的研究［１０］，未见含量测定方面研究的报
道。为此，作者选择了其中具一定有活血化瘀和抗
氧化等活性作用的鞣花酸类化合物［１１１３］作为质量
控制指标进行含量测定研究，结果表明，所建立的方
法快速、专属和准确，可为该药材的开发应用提供试
验基础。
１ 仪器与试药
ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣ（美国 Ｗａｔｅｒｓ公司，包括二元
高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极
管阵列检测器、Ｅｍｐｏｗｅｒ２色谱工作站）；ＡＥ２４０电
子天平（１／１０万，瑞士梅特勒托利上海公司）；实验
室超纯水机（四川沃特尔科技发展有限公司）。
鞣花酸、３，３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏβ葡萄糖
苷，３，３′二甲氧基鞣花酸４′ＯαＤ阿拉伯糖苷，３，
３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏβ木糖苷和 ３，３′二甲氧
基鞣花酸５种对照品为作者从鸡眼睛（野鸦椿）药
材中提取分离制备，采用１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ，ＭＳ，ＵＶ，
ＩＲ波谱进行了结构鉴定，上述 ５种对照品分别用
ＵＰＬＣＰＤＡ在多个检测波长下测定，其峰面积归一
化结果均大于９８％；乙腈为色谱纯（Ｍｅｒｃｋ公司）、
甲醇、磷酸等试剂均为国产分析纯。实验用药材９
批由贵州益康制药有限公司提供，均采收至贵阳市
乌当区，由贵阳医学院龙庆德副教授鉴定为省沽油
科植物野鸦椿Ｅｊａｐｏｎｉｃａ的干燥枝叶。
２ 方法与结果
２１ 色谱条件 ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８色谱
（２１ｍｍ×１００ｍｍ，１７μｍ）；流动相乙腈（Ａ）
０１％磷酸（Ｂ）梯度洗脱，０～１ｍｉｎ，Ａ６％，１～１９
ｍｉｎ，Ａ从 ６％ ～３５％，１９～２０ｍｉｎ，Ａ从 ３５％ ～
１００％；梯度曲线均为直线；流速０２ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱
温４０℃；检测波长２４５ｎｍ，进样量１０μＬ。
２２ 适用性试验 分别吸取对照品混合溶液和药
材供试品溶液１０μＬ，在上述色谱条件下，用 ＵＰ
ＬＣＰＤＡ测定，结果供试品溶液色谱中５种被测成
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分的保留时间与上述５种对照品保留时间一致，与
其他物质峰分离度大于１５，理论塔板数均在１６万
以上，各被测定成分色谱峰的紫外光谱与各自对照
品的紫外光谱一致，色谱分析结果见图１。
Ａ对照品；Ｂ样品；１鞣花酸；２３，３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏβ葡萄糖苷；３３，３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏα阿拉伯糖苷；４３，３′二甲
氧基鞣花酸４′Ｏβ木糖苷；５３，３′二甲氧基鞣花酸（表１，２同）。
图１ 对照品和供试品溶液的ＵＰＬＣ图
２３ 溶液制备 对照品溶液制备：分别称取鞣花
酸，３，３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏβ葡萄糖苷，３，３′二
甲氧基鞣花酸４′ＯαＤ阿拉伯糖苷，３，３′二甲氧
基鞣花酸４′Ｏβ木糖苷和 ３，３′二甲氧基鞣花酸
对照品２０２３，８８４，４７８，１３３０和６５８ｍｇ，分别置
５个２５ｍＬ量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，加甲
醇至刻度，摇匀，得对照品储备液。分别精密量取上
述对照品储备液各１ｍＬ，置１０ｍＬ量瓶中，加甲醇
稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品的制备 取药材粉末约１ｇ（过４０目），
精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流
６ｈ，用少量甲醇洗涤容器，洗液并入提取液，水浴浓
缩至约５ｍＬ，转移至１０ｍＬ量瓶中，用甲醇稀释至
刻度，摇匀，即得。
２４ 线性关系考察 分别精密量取上述５种对照
品储备液各０２，０６，１，１４，１８ｍＬ，分别置１０ｍＬ
量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得系列浓度的对
照品溶液，按２１项的色谱条件进样测定。以进样
质量浓度（Ｘ）为横坐标，峰面积（Ｙ）为纵坐标，绘制
标准曲线，线性回归方程见表１。
表１ 线性回归方程和线性范围
化合物 线性回归方程 ｒ
线性范围
／ｍｇ·Ｌ－１
１ Ｙ＝１２４９×１０７Ｘ－６１５９×１０４ ０９９９８ １６２～１４６
２ Ｙ＝６７５４×１０６Ｘ－１１０２×１０４ ０９９９７ ７０７～６３６
３ Ｙ＝１２４８×１０７Ｘ－１３４５×１０４ ０９９９８ ３８２～３４４
４ Ｙ＝９０６８×１０６Ｘ－１８７２×１０４ ０９９９８ １０６～９５８
５ Ｙ＝６９５３×１０６Ｘ－９０４８×１０３ ０９９９８ ５２６～４７４
２５ 精密度试验 取鸡眼睛药材样品９份，分别按
０５，１，１５ｇ３种取量，每种称量各３份，精密称定，
照供试品溶液的制备方法制备份供试液，分别测定，
ＲＳＤ值分别为２４％，２８％，２９％，２７％，２０％。
２６ 耐用性考察 取同一供试品溶液，分别于
０，１，２，４，８ｈ进样测定，结果 ５种被测成分平均
峰面 积 的 ＲＳＤ分 别 为 １４％，１６％，２１％，
１７％，１２％（ｎ＝５），表明供试品溶液稳定性在
８ｈ内稳定。另取样品粉末按供试品溶液的制备
方法制备３份供试液，分别采用３支不同批次的
ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８（２１ｍｍ×１００ｍｍ，１７
μｍ）色 谱 柱 （系 列 号 ０１５７３８０７０１５５０１，
０１５７３８２８０３５３０１和０１５７３８０７０１５５５８）在上述色
谱条件下进行测定，其结果基本一致；同时还对
不同柱温（３５，４０，４５℃）进行考察，其结果也基
本一致，表明方法的耐用性较好。
２７ 回收率试验 精密称取已测定含量的鸡眼
睛药材６份（过４０目筛）各０５ｇ，分别精密加入
上述５种混合对照品溶液适量，室温挥干，按２３
项制备供试品溶液，按 ２１项色谱条件测定，各
成分的回收率在 ９７１６％ ～１０２１％，ＲＳＤ小于
３２％，见表２。
２８ 样品测定 取不同批次的鸡眼睛药材１ｇ，精
密称定，照２３项制备供试品溶液，按２１项色谱条
件测定，计算含量，结果见表３。
３ 讨论
在供试品溶液制备中分别考察了不同浓度乙
醇、甲醇等溶剂进行回流、超声、索式提取等方法，结
果以甲醇索式提取效果较好。
经ＵＰＬＣＰＤＡ测定，其中 ３，３′二甲氧基鞣花
酸、３，３′二甲氧基鞣花酸４′Ｏβ木糖苷、３，３′二甲
氧基鞣花酸４′Ｏα阿拉伯糖苷、３，３′二甲氧基鞣
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表２ ５个鞣花酸类化合物加样回收率
化合物
样品量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均回收率
／％
ＲＳＤ
／％
１ ０．２２６１ ０．２２６ ０．４５６９ １０２．１ ９８．５２ ２．７
０．２２３９ ０．４４１１ ９６．１１
０．２２８８ ０．４５０１ ９７．９２
０．２３２１ ０．４４７７ ９５．４０
０．２３１４ ０．４５３９ ９８．４５
０．２２７８ ０．４５６３ １０１．１
２ ０．１０６８ ０．１１８ ０．２２５９ １００．９３ １０２．１ ３．１
０．１０５７ ０．２２８３ １０３．９
０．１０８０ ０．２３０８ １０４．１
０．１０９６ ０．２２９１ １０１．３
０．１０９３ ０．２３３６ １０５．３
０．１０７６ ０．２２２３ ９７．２０
３ ０．１１１０ ０．１２１ ０．２２９４ ９７．８５ ９８．７１ ３．０
０．１０９９ ０．２３０３ ９９．５０
０．１１２３ ０．２２９１ ９６．５３
０．１１４０ ０．２３５７ １００．５８
０．１１３６ ０．２３７９ １０２．７
０．１１１９ ０．２２７２ ９５．２９
４ ０．１３２５ ０．１４２ ０．２７２６ ９８．７ ９７．１６ ２．９
０．１３１２ ０．２６６７ ９５．４２
０．１３４１ ０．２７３６ ９８．２４
０．１３６０ ０．２７２９ ９６．４１
０．１３５６ ０．２８２２ １０３．２
０．１３５５ ０．２７０６ ９５．１４
５ ０．１２２９ ０．１３５ ０．２５９６ １０１．３ ９８．５２ ３．２
０．１２１７ ０．２５０４ ９５．３３
０．１２４３ ０．２６０７ １０１．０
０．１２６１ ０．２５８４ ９８．００
０．１２５８ ０．２５５６ ９６．１５
０．１２３８ ０．２６３１ １０３．２
表３ 不同批次鸡眼睛药材中５个鞣花酸类
化合物质量分数（ｎ＝２） ｍｇ·ｇ－１
批号 １ ２ ３ ４ ５ 总量
２００８０３０６ ０．４５５８０．２１５２０．２２３８０．２６７１０．２４７７ １．４１０
２００８０５２３ ０．４５５３０．２４７２０．２８４９０．２９２２０．２９３７ １．５７３
２００８０６２６ ０．５１１８０．２４０２０．２５８５０．２９９５０．２６８８ １．５７９
２００８０８２５ ０．３２６９０．１８４６０．２０１００．２４９４０．２２４０ １．１８６
２００８１１１４ ０．４３２６０．１９８４０．１９１６０．１８４３０．１７５２ １．１８２
２００９０２１０ ０．７８９８０．５２３９０．３２３６０．４８０８０．３２７６ ２．４４６
２００９０３１１ ０．６７０９０．３６７６０．２５４９０．３２９２０．４２３１ ２．０４６
２００９０３１９ ０．２４８３０．１４０６０．１５５２０．９１８４０．３７２６ １．８３５
２００９０３２０ ０．３６２７０．６０５１０．３３４４０．７９８８０．４３９８ １．９３６
花酸４′Ｏβ葡萄糖苷在２４５ｎｍ均具有最大吸收，
鞣花酸在２５４ｎｍ有最大吸收，但在２４５ｎｍ也有较
大吸收，综合考虑选择２４５ｎｍ为含量测定波长。
本试验将超高液相色谱用于鸡眼睛中多指标成
分含量测定研究，与普通 ＨＰＬＣ采用５μｍＣ１８填料
的色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ）比较，其分析速度提
高了近４倍，具有较高的分析通量，同时也具有良好
的准确度、精密度和耐用性，可见超高效液相色谱作
为一种新的色谱技术应用于中药材及其制剂质量控
制有着非常广阔的前景。
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２００９年１２月
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