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草药, 2009, 40( 7) : 10151018
HPLCMS3 法分析准噶尔大戟叶有效部位的化学成分
石心红,徐德然*
(中国药科大学 中药制剂教研室, 江苏 南京 210038)
摘 要:目的 研究新疆产准噶尔大戟 Eupho rbia soongar ica 叶有效部位的化学成分。方法 70%乙醇提取后用
大孔树脂纯化得有效部位,运用 H PLCMSn 联用技术推断化合物结构。结果 得到了样品紫外色谱图、基本色谱
峰图及相应色谱峰的电喷雾质谱( ESIMS)的一至三级质谱图;通过对图谱进行解析, 鉴别出 12个化合物。结论
HPLCMS3 法能快速、简便和准确的分析准噶尔大戟叶中的黄酮苷类与鞣花酸衍生物类成分。
关键词:准噶尔大戟; 黄酮类化合物;鞣花酸类化合物; H PLCM S3
中图分类号: R284 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 09143503
准噶尔大戟Eup hor bia soong ar ica Bo iss 为大
戟科大戟属植物, 大戟科以其种类多、生长环境复
杂、变异性大而闻名于世,作为传统医药在国内外均
有悠久的历史 ,具有散结、逐水、止痛、杀虫等功能,
尤其在治疗肿瘤方面有较广泛的应用。准噶尔大戟
为多年生草本植物, 有逐水、消肿、散瘀等作用,在新
疆和甘肃等地被人们作为逐水药和泻药使用 [ 1]。
液相色谱与多级质谱联用技术, 是将高效的色
谱分离技术与高灵敏的质谱检测技术合二为一, 即
用质谱作为检测器, 对用 H PLC系统分离获得的物
质进行定性检测,测得其相对分子质量,并经过碰撞
诱导( collisioninduced, CID)过程, 得到碎片离子
(或称产物离子) [ 2]。离子阱质谱重复此过程实现多
级质谱,利用 MSn 提供的特征碎片离子( characte
rist ic f ragment ion, CFI) ,获得结构信息。本实验在
系统研究准噶尔大戟化学成分的基础上, 对其叶有
效部位进行了 HPLCMS3 分析。通过相对分子质
量和多级裂解质谱图并结合已分得的标准品质谱
图,共鉴定出 12个化合物, 其中有 7个化合物为黄
酮类化合物,另外 5个化合物为鞣花酸衍生物。
1 仪器、试剂和材料
美国 Agilent公司液相色谱离子阱质谱联用仪
( Agilent 1100 Series LC/ M SD Trap ) ;美国 Ag ilent公
司化学工作站 A0901,质谱处理软件 LCTRAP 4 2。
甲醇为色谱纯(美国 TEDIA公司) ; 分析用水为
MilliQ超纯水蒸馏器产出;其余试剂均为分析纯。
准噶尔大戟叶采自新疆伊犁, 经新疆农学院杨
昌友教授鉴定为准噶尔大戟 Euphor bia soong ar ica
Boiss。
2 方法
2 1 样品的制备:取干燥的准噶尔大戟叶粗粉, 乙
醇回流提取,减压回收乙醇,浓缩得浸膏。浸膏溶解
后离心, 取上清液上大孔树脂, 用水乙醇系统梯度
洗脱。收集 70%乙醇洗脱液, 回收乙醇得浸膏, 经
真空干燥后粉碎成细粉。取样品粉末适量,用甲醇
溶解配成 2 0 mg/ mL 的样品溶液, 经 0 45 m 微
孔滤膜过滤后进样分析。
2 2 液相色谱条件: A gilent 1100 型高效液相色谱
仪,色谱柱: 岛津 CLCODS ( 150 mm 4 6 mm,
5 m) ; 检测器: DAD 检测器; 检测波长: 280 nm;
柱温: 35 ! 。流动相:二元梯度溶剂系统, 溶剂 A为
水,溶剂B为甲醇,梯度洗脱0 min, 20% B; 18 min,
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* 收稿日期: 20100226 基金项目:中国药科大学青年科技基金资助( B0605)
* 通讯作者 徐德然 T el: ( 025) 85391050 Email: drxunj@ 163 com
44% B; 25 min, 46% B; 55 m in, 90% B; 60 m in
100% B。体积流量:在高效液相色谱仪中为 1 mL/
min, 进入质谱仪后经分流变为 0 4 mL/ min; 进样
方式:自动进样 10 L。
2 3 质谱条件: Ag ilent电喷雾离子阱多级质谱仪,
离子源: ESI; 检出模式: 负离子; 雾化气压力:
2 76 104 Pa; 干燥气( N 2 ) ;体积流量: 9 0 L/ m in;
干燥气温度: 350 ! ;毛细管电压: 3 kV。
Smart parameter sett ing ( SPS) T ar get 为m/ z
600, tr ap drive level为 70%。
Ion Charg e Control ( ICC ) Targ et 为15 000, 最
大累计时间为 300 ms,扫描范围为 50~ 1 200 m / z。
24 数据处理系统:美国 Agilent公司化学工作站。
3 结果与讨论
31 紫外色谱图和基本色谱峰图:在 280 nm下对样
品进行检测,得到样品的紫外色谱图(图 1)。通过对
样品进行全扫描, 从而获得了样品的基本色谱峰图
(图2)。基本色谱峰图与紫外色谱图基本对应。
t / min
图 1 准噶尔大戟叶的紫外色谱图
Fig 1 UV Chromatogram of E soongarica leaves
t / min
图 2 准噶尔大戟叶的基本色谱峰图
Fig 2 Basic peak chromatogram of E soongarica leaves
3 2 准噶尔大戟叶电喷雾质谱及其解析
化合物 1: 19 0~ 20 2 min时一级质谱给出准
分子离子峰m/ z : 615 2[ M - 1] - ; 二级质谱 463 1
[ ( M - 1) - 152]
- 为失去 1 个没食子酰基的碎片离
子峰; 三级质谱 300 9[ ( M - 1) - 152- 162] - 为失
去 1个没食子酰基和 1个葡萄糖的碎片离子峰。与
已分得的 2#没食子酰基异槲皮苷的质谱图相同, 由
此推断该化合物为2#没食子酰基异槲皮苷( querce
t in3O( 2#Ogalloy l)Dg lucopyranoside)。
化合物 2: 20 6~ 21 3 min时一级质谱给出准
分子离子峰m/ z : 491 1[ M - 1] - ; 二级质谱 328 0
[ ( M- 1) - 163] - 为失去 1 个葡萄糖的碎片离子
峰;三级质谱 312 9[ ( M - 1) - 163- 15] - 为失去 1
个葡萄糖和 1 个甲基的碎片离子峰。与已分得的
3, 3∃二甲基鞣花酸4OD葡萄糖苷的质谱图相
同,由此推断该化合物为 3, 3∃二甲基鞣花酸4O
D葡萄糖苷( 3, 3∃diOmethylellagic acid4OD
g lucopyrano side)。
化合物 3: 21 5~ 22 1 m in 时一级质谱给出准
分子离子峰m/ z : 463 1[ M - 1] - ; 二级质谱 300 9
[ ( M- 1) - 162]
- 为失去 1 个葡萄糖的碎片离子
峰。与已分得的异槲皮苷的质谱图相同, 由此推断
该化合物为异槲皮苷( isoquercit rin)。
化合物 4: 22 1~ 22 6 min时一级质谱给出准分
子离子峰m/ z : 609 2 [ M - 1] - ; 二级质谱 463 1
[ ( M- 1) - 146] - 为失去 1个鼠李糖的碎片离子峰;
三级质谱301 0[ ( M- 1) - 146- 162] - 为失去 1个鼠
李糖和 1个葡萄糖的碎片离子峰。与已分得的芦丁
的质谱图相同,由此推断该化合物为芦丁( rut in)。
化合物 5: 22 9~ 23 2 m in 时一级质谱中给出
准分子离子峰 m/ z : 433 1 [ M - 1] - ; 二级质谱
300 9[ ( M - 1) - 132] - 为失去 1个木糖的碎片离
子峰。与已分得的鞣花酸3OD木糖苷的质谱
图相同,由此推断该化合物为鞣花酸3OD木糖
苷( ellagic acid3ODxylopyranoside)。
化合物 6: 23 2~ 23 4 m in 时一级质谱给出准
分子离子峰m/ z : 300 9[ M - 1] - ; 二级质谱 256 9
[ ( M- 1) - 44]
- 为失去 1 个 CO2 的碎片离子峰。
与已分得的鞣花酸的质谱图相同, 由此推断该化合
物为鞣花酸( ellag ic acid)。
化合物 7: 23 6~ 23 9 m in 时一级质谱给出准
分子离子峰m/ z : 433 1[ M - 1] - ; 二级质谱 301 0
[ ( M- 1) - 132] - 为失去 1个木糖的碎片离子峰。
与已分得的槲皮素3OD木糖苷的质谱图相同,
由此推断该化合物为槲皮素3OD木糖苷( quer
cet in3ODxylopyranoside)。
化合物 8: 24 6~ 25 4 m in 时一级质谱给出准
分子离子峰m/ z : 470 1 [ M - Cl] - 和m/ z : 433 1
[ M - 1]
-
;二级质谱 433 1[ M - 1] - 为失去 1个氯
化氢的碎片离子峰; 三级质谱 300 9 [ ( M - 1) -
132] - 为失去 1个阿拉伯糖的碎片离子峰。与已分
得的槲皮素3O D阿拉伯糖苷的质谱图相同,
HPLC 出峰时间与槲皮素3O D阿拉伯糖苷对
照品一致,由此推断该化合物为槲皮素3O D阿
∀1436∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
拉伯糖苷( quer cetin3O Darabinfuranoside)。
化合物 9: 25 6~ 26 5 min时一级质谱给出准
分子离子峰m/ z : 483 1 [ M + Cl] - 和m/ z : 447 0
[ M- 1]
-
;二级质谱 447 0[ ( M + Cl) - 36] - 为失去
1个氯化氢的碎片离子峰; 三级质谱 301 0[ ( M +
Cl) - 36- 146] - 为失去 1 个鼠李糖的碎片离子峰。
与已分得的槲皮苷的质谱图相同,由此推断该化合
物为槲皮苷( quercit rin)。
化合物 10: 28 2~ 29 2 m in 时一级质谱给出准
分子离子峰m/ z : 461 1[ M - 1] - ; 二级质谱 327 9
[ ( M - 1) - 133]
- 为失去 1 个木糖的碎片离子峰;
三级质谱 312 9[ ( M - 1) - 133- 15] - 为失去 1 个
木糖和 1个甲基的碎片离子峰。与已分得的 3, 3∃
二甲基鞣花酸4OD木糖苷的质谱图相同, 由此
推断该化合物为 3, 3∃二甲基鞣花酸4OD木糖
苷 ( 3, 3∃diOmethylellagic acid4ODxy lopyr
anoside)。
化合物 11: 31 3~ 31 6 m in 时一级质谱给出准
分子离子峰m/ z : 467 0[ M + Cl] - ; 二级质谱 431 1
[ ( M + Cl) - 36] - 为失去1个氯化氢的碎片离子; 三
级质谱 284 9[ ( M + Cl) - 36- 146] - 为失去 1个氯
化氢和 1个鼠李糖的碎片离子峰。与已分得的山柰
酚3OD鼠李糖苷的质谱图相同,由此推断该化
合物为山柰酚3OD鼠李糖苷 ( kaempferol3O
Dr hamnoside)。
化合物 12: 34 9~ 35 5 m in 时一级质谱给出准
分子离子峰m/ z : 329 0[ M - 1] - ; 二级质谱 313 9
[ ( M- 1) - 15] - 为失去 1个甲基的碎片离子峰;三
级质谱 298 9[ ( M- 1) - 15- 15] - 为失去 2个甲基
的碎片离子峰。与已分得的 3, 3∃二甲基鞣花酸的
质谱图相同, 由此推断该化合物为 3, 3∃二甲基鞣花
酸( 3, 3∃diOmethylellagic acid)。
3 3 讨论:质谱检测器灵敏度远远高于UV与 TLC,
特别是对于紫外吸收较弱的物质,可检测到较明显的
信号,结合多级质谱 MSn 提供的特征碎片离子信息,
有利于中草药等复杂样品中微量成分的检测[ 3]。离
子阱质谱( ion trap mass spect rometry, ITMS)属于多
级质谱,不仅可以给出化合物的相对分子质量, 还可
以根据其多级质谱( multiple stage MS, MSn )的碎片
信息来进一步推导化合物的结构。离子阱亦属于时
间串联质谱,偏重于定性, 有助于对未知结构化合物
的解析 [4] 。同时质谱作为一种痕量检测器,可以通过
液质联用的方法对特定化合物的可能存在进行药材
种类上的广泛筛选,以此为基础进行进一步的柱分
离,此法较薄层板点准确、灵敏度高,降低柱分离的费
用,将反复柱色谱变为有效柱色谱。
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猫须草超临界 CO2 萃取物的 GCMS分析及其抑菌作用
赵雪梅1 ,谭昌恒2 ,张显忠3 ,费洪荣1 , 王桂玲1*
( 1 泰山医学院药学院, 山东 泰安 271016; 2 中国科学院上海药物研究所 新药研究国家重点实验室, 上海 201203;
3 泰山医学院 生物科学系, 山东 泰安 271016)
摘 要:目的 对猫须草超临界 CO 2 萃取法制备的提取物进行化学成分分析及体外抑菌作用研究。方法 利用超
临界 CO2 萃取法提取猫须草中化学成分, 利用 GCMS 法分离并分析其化学成分, 采用面积归一化法定量; 采用
KirbyBaue纸片扩散法观察提取物对各种细菌的抑制效果。结果 CO 2 超临界萃取法的萃取率为 0 8% , 鉴定出
19 种成分,以萜烯类化合物为主要成分,其数量占总量的 67 17%。醇类化合物次之, 数量占总量的 26 10%。不
同浓度的猫须草超临界 CO2 萃取物对各种细菌生长都有一定的抑制作用, 并随提取物浓度的降低 ,抑菌效果明显
减弱;其中,猫须草超临界 CO2 萃取物对肺炎链球菌的抑制效果最明显,其次对金黄色葡萄球菌、福氏%型杆菌的抑菌
效果也比较明显。结论 猫须草超临界 CO2 萃取物中的化合物均为首次分离鉴定,其在体外有一定的抑菌作用。
∀1437∀中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
* 收稿日期: 20100228 基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30600780) ;山东省医药卫生计划面上项目( 2007HW027)作者简介:赵雪梅( 1970 & ) ,女,山东省寿光市人,教授,硕士生导师,长期从事天然药物化学的教学、科研工作。
T el : (0538) 6229751 Email: zhaoxuem1@ sina com