全 文 ：多指标正交试验优选仙灵骨葆胶囊中丹参、
补骨脂提取工艺
陈雯，杜守颖，陆洋
（北京中医药大学 中药学院，北京 １００１０２）
［摘要］　目的：优选仙灵骨葆胶囊中丹参、补骨脂提取工艺。方法：采用正交试验的方法，以丹参中丹酚酸 Ｂ、丹参酮
ⅡＡ、补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素的含量为指标，多指标综合评分法处理数据，优化提取工艺中乙醇浓度、溶剂倍数、提取
时间、提取次数４个因素。结果：丹参、补骨脂最佳合提工艺为加入８倍量７０％乙醇，提取２次，每次１５ｈ。结论：优选的丹
参、补骨脂提取工艺稳定可行。
［关键词］　丹参；补骨脂；正交试验；提取工艺
［收稿日期］　２００８１０３１
［基金项目］　国家“十一五”科技支撑计划项目（２００６ＢＡ１０６Ａ１７）
［通信作者］　杜守颖，教授，博士生导师。研究方向为中药新剂型
与新技术。Ｔｅｌ：（０１０）８４７３８６４５，Ｅｍａｉｌ：ｄｕｓｈｏｕｙｉｎｇ＠２６３．ｎｅｔ
　　仙灵骨葆胶囊是国家已批准上市的治疗骨质疏
松的苗药制剂，由淫羊藿、丹参、补骨脂等６味药组
成。原工艺制成的制剂存在服用量较大，部分原粉
入药不利于吸收等问题。本课题组对该品种进行二
次开发，对其处方进行系统的工艺研究，目的是提高
疗效，降低服用量。根据有效成分的理化性质和药
理作用，将处方中药物分为２组提取：淫羊藿、续断、
知母和生地黄为水提组，丹参、补骨脂为醇提组。本
试验采用Ｌ９（３
４）正交设计法，以丹酚酸 Ｂ、丹参酮
ⅡＡ、补骨脂素和异补骨脂素含量为指标，多指标综
合分析，为确定丹参、补骨脂的最佳醇提工艺提供更
合理的评价［３４］。
１　材料
Ｗａｔｅｒｓ２６９５型液相色谱仪（ＤＡＤ检测器，四元
泵，自动进样，ＷａｔｅｒｓＭ３２色谱工作站），ＵＶ２０００紫
外可见分光光度计（日本日立），ＣＸ３００型超声波
清洗器（北京医疗设备厂），ＤＺ２ＢＣ型真空干燥箱
（天津泰斯特），电子天平（北京分析仪器厂）。
丹酚酸 Ｂ对照品（批号 １１１５６２２００５０４）、丹参
酮ⅡＡ对照品（批号１１０７６６２００５１８）、补骨脂素对照
品（批号１１０７３９２００６１３）和异补骨脂素对照品（批
号１１０７３８２００３０９），以上对照品均购自中国药品生
物制品检定所；丹参购自安国以岭中药饮片有限公
司，经本校生药教研室刘春生教授鉴定为唇形科植
物丹参 Ｓａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｈｉｚａ的干燥根及根茎；补骨脂
购自北京华邈中药工程技术开发中心，经本校生药
教研室刘春生教授鉴定为豆科植物补骨脂 Ｐｓｏｒａｌｅａ
ｃｏｒｙｌｉｆｏｌｉａ的干燥成熟果实；甲醇（美国 Ｍｅｒｃｋ公司，
色谱纯）；纯净水（杭州娃哈哈集团），其他试剂均为
分析纯。
２　方法与结果
２．１　正交试验设计
丹参主要含有以丹参酮ⅡＡ为代表的脂溶性二
萜醌类成分及以丹酚酸 Ｂ为代表的水溶性酚酸类
成分；补骨脂主要含有香豆素类成分，因此选择乙醇
回流提取。采用正交试验优选醇提条件，分别以丹
参中丹酚酸Ｂ、丹参酮ⅡＡ、补骨脂中补骨脂素、异补
骨脂素的含量为指标，对乙醇浓度、溶剂倍数、提取
时间、提取次数４个因素，３水平进行考察。见表１。
表１　正交设计因素水平
水平
Ａ
乙醇浓度／％
Ｂ
溶剂倍数／倍
Ｃ
提取时间／ｈ
Ｄ
提取次数／次
１ ６０ ６ １ １
２ ７０ ８ １５ ２
３ ８０ １０ ２ ３
按处方比例称取丹参药材和补骨脂药材各１５
ｇ，混合均匀，按照正交试验设计因素水平表进行试
验，加入乙醇回流提取，合并提取液，滤过，回收乙
醇，浓缩成稠膏状，减压干燥，即得干浸膏。每号试
验平行操作２份，共计１８份。
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２．２　指标成分的测定
２．２．１　色谱条件　ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ）；流动相 Ａ（甲醇），Ｂ（０１％甲酸水溶
液），梯度洗脱０～３０ｍｉｎ，５０％ ～９５％ Ａ；流速１０
ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温室温；检测波长（０～１３ｍｉｎ）２８６
ｎｍ，（１３～２０ｍｉｎ）２４６ｎｍ，（２０～４０ｍｉｎ）２７０ｎｍ，见
图１。
２．２．２　线性关系考察　精密称取丹酚酸Ｂ、丹参酮
ⅡＡ、补骨脂素、异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成
丹酚酸Ｂ、丹参酮ⅡＡ、补骨脂素、异补骨脂素分别为
１９０，１９，２２６，２０７ｍｇ·Ｌ－１的对照品混合溶液。
精密吸取对照品溶液２０，４０，６０，８０，１００μＬ分
别注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面
积，以峰面积为纵坐标，对照品的含量（μｇ）为横坐
标，绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表２。
２．２．３　样品测定　取本品浸膏粉约０２ｇ，精密称
定，置５０ｍＬ棕色量瓶中，加入甲醇约４５ｍＬ，超声
　　
Ａ．对照品；Ｂ．样品；１．丹酚酸Ｂ；２．补骨脂素；３．异补骨脂素；
４．丹参酮ⅡＡ。
图１　仙灵骨葆胶囊提取物ＨＰＬＣ图
表２　混合对照品线性关系考察
指标成分 回归方程 ｒ 线形范围／μｇ
丹酚酸Ｂ Ｙ＝８４６１４Ｘ－８４２３２ ０９９９６ 　　３８０～１９００
丹参酮ⅡＡ Ｙ＝６０７７５３６Ｘ－３９３７９ ０９９９８ ００３８０～０１９００
补骨脂素 Ｙ＝８８００７６３Ｘ－８８４６３ ０９９９６ ００４５２～０２２６０
异补骨脂素 Ｙ＝８０９７２１２Ｘ－６９１８２ ０９９９８ ００４１４～０２０７０
处理４０ｍｉｎ，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，
取续滤液，即得供试品溶液。精密吸取５μＬ注入液
相色谱仪进行测定。
２．３　试验结果
按照Ｌ９（３
４）正交设计表的条件进行试验，分别
测定丹酚酸Ｂ、丹参酮ⅡＡ、补骨脂素、异补骨脂素的
含量，并进行多指标综合评分。评分时以各指标的
最大值为参照将数据进行归一化，再给出各指标的
权重。根据处方配比，丹参、补骨脂均为臣药，用量
相等，因此丹酚酸 Ｂ（Ｘ）、丹参酮ⅡＡ（Ｙ）、补骨脂素
（Ｚ）、异补骨脂素（Ｗ）的权重系数均为０２５。以综
合值进行统计分析，其中综合评分 Ｍ＝（０２５Ｘ／
６５７７＋０２５Ｙ／０１８７＋０２５Ｚ／０３０９＋０２５Ｗ／
０２７３）×１００。结果见表３，４。
　　直观分析表明，以综合评分为标准，在所选因素
水平范围内，各因素作用主次顺序为Ｄ＞Ｃ＞Ａ＞Ｂ。
方差分析表明，Ａ（乙醇浓度），Ｃ（提取时间），Ｄ（提
取次数）为主要影响因素，具有显著性（Ｐ＜００１），
表３　正交试验数据及其计算分析 ％　
Ｎｏ．
丹酚酸Ｂ
／Ｘ
丹参酮ⅡＡ
／Ｙ
补骨脂素
／Ｚ
异补骨脂素
／Ｗ
综合评分
／Ｍ
１ ３８６８ ０１２４ ０２１７ ０１９３ ６６５１
２ ６４６８ ０１８７ ０３００ ０２６８ ９８４０
３ ６３１２ ０１５５ ０２７５ ０２４６ ８９４９
４ ６５７７ ０１８４ ０３０９ ０２７３ ９９６０
５ ４１９２ ０１１８ ０２２７ ０１９８ ６８２１
６ ６２４６ ０１７６ ０３０８ ０２７２ ９７１０
７ ４８６２ ０１５０ ０２８０ ０２６０ ８５００
８ ５６０８ ０１８４ ０２８９ ０２４７ ９１９２
９ ３９２２ ０１５３ ０２１３ ０１８２ ６９２６
表４　方差分析
方差来源 离均差平方和 自由度 均方 Ｐ
Ａ １１６２７ ２ ５８１３ ＜００１
Ｂ １７７５ ２ ８８７ 　
Ｃ １９０６６ ２ ９５３３ ＜００１
Ｄ ２５３９４３ ２ １２６９７１ ＜００１
误差 ４７８４ ９ ５３１ 　
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因素Ｂ（溶剂倍数）对试验结果无显著影响。最终
确定最佳提取工艺为 Ａ２Ｂ２Ｃ２Ｄ２，即８倍量７０％乙
醇，回流提取２次，每次１５ｈ。
２．４　验证试验
为进一步考察优选工艺的可靠性及稳定性，取
３份药材按上述最佳提取工艺进行验证试验，操作
方法同前述，测定结果见表５。
表５　验证试验 ％　
样品
丹酚酸Ｂ
／Ｘ
丹参酮ⅡＡ
／Ｙ
补骨脂素
／Ｚ
异补骨脂素
／Ｗ
１ ６６８２ ０２１１ ０３０９ ０２７４
２ ６７６８ ０２０７ ０３０７ ０２７８
３ ６８９７ ０２１２ ０３１０ ０２８０
　　结合表３，５可看出，验证试验结果与正交表中
最优试验组结果相当，说明该优选工艺稳定可行。
３　讨论
本实验采用正交试验的方法，以丹参中丹酚酸
Ｂ、丹参酮ⅡＡ、补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素
的含量为指标，多指标综合评分法处理数据，优化
提取工艺中乙醇浓度、溶剂倍数、提取时间、提取
次数４个因素，得到最佳理论组合 Ａ２Ｂ２Ｃ２Ｄ２，并
经验证试验最终确定提取工艺为８倍量７０％乙醇
提取２次，每次１５ｈ。其中提取次数、提取时间、
乙醇浓度对指标成分含量影响大，有显著性差异。
溶剂用量影响较小。结果表明优选的提取工艺简
单，可操作性强。
本次提取工艺设计根据丹参和补骨脂中已知有
效成分的性质，采取了相应的提取溶剂，对２药合用
的多个有效成分采取了量的控制，符合中药“多靶
点、多方位”的原则，较控制药材某种单一成分的含
量更为科学合理［５６］。
［参考文献］
［１］　杜冠华，张均田．丹参现代研究概况与进展［Ｊ］．医药导报，
２００４，２３（６）：３５５．
［２］　王淑云．补骨脂的药理作用研究概况［Ｊ］．时珍国医国药，
２００６，１７（６）：１０８２．
［３］　罗志冬，郭晏华．补骨脂有效成分提取工艺的考察［Ｊ］．中国新
药杂志，２００７，１６（９）：７０５．
［４］　谢凯，赵磊磊．近年来丹参提取工艺的研究概况［Ｊ］．中国实验
方剂学杂志，２００７，１３（１０）：６７．
［５］　李丽，周军，张莹，等．多指标综合评分法优化痛风宁颗粒提取
工艺［Ｊ］．中成药，２００７，２９（２）：８２．
［６］　王筱亮，张玉杰，陈明霞，等．多指标正交试验优选酸枣仁最佳
提取工艺［Ｊ］．中国中药杂志，２００５，３０（１０）：７５３．
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＰｓｏｒａｌｅａｃｏｒｙｌｉｆｏｌｉａａｎｄ
Ｓａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎｗｉｔｈｍｕｌｔｉｔａｒｇｅｔｓ
ＣＨＥＮＷｅｎ，ＤＵＳｈｏｕｙｉｎｇ，ＬＵＹａｎｇ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＰｓｏｒａｌｅａｃｏｒｙｌｉｆｏｌｉａａｎｄＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｈｉｚａ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａｎｏｒ
ｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｗａｓａｄｏｐｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ．ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡ，ＳａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢ，ＰｓｏｒａｌｅｎａｎｄＩｓｏｐｓｏｒａｌｅｎｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｉｎ
ｄｉｃｅｓｏｆａｐｐｒａｉｓａｌ．Ｄａｔａｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｗａｓｃａｒｉｅｄｏｕｔｗｉｔｈｔｈｅｍｕｌｔｉｐｌｅｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓｇｒａｄｉｎｇｍｅｔｈｏｄｆｏｒｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．
Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｂｅｓｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｗａｓｔｏｅｘｔｒａｃｔｆｏｒ２ｔｉｍｅｓｗｉｔｈ８ｆｏｌｄｅｔｈａｎｏｌｓｏｌｕｔｉｏｎ（７０％）ａｎｄ１５ｈｅａｃｈｔｉｍｅ．Ｃｏｎｃｌｕ
ｓｉｏｎ：Ｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｗａｓｒａｔｉｏｎａｌａｎｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓｉｓｈｉｇｈ．
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［责任编辑　周　驰］
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