全 文 ：超临界萃取蒲黄的实验研究
姚立娟１，石林平２
（１天津市儿童医院 药剂科，天津 ３０００７２；
２天津中新药业集团股份有限公司 第六中药厂，天津 ３００４０１）
［摘要］ 目的：探索蒲黄超临界萃取的最佳工艺条件。方法：以异鼠李素３Ｏ新橙皮苷转移率为指标，考察超临界萃取
中压力、温度、夹带剂用量对萃取效果的影响。结果：最佳工艺条件：压力２０ＭＰａ，温度４０℃，夹带剂为药材２０倍量的９５％
乙醇。结论：该工艺稳定可行，具有效率高、速度快、操作简便等优点，可用于蒲黄黄酮的提取。
［关键词］ 蒲黄；ＳＦＥＣＯ２；正交设计；异鼠李素３Ｏ新橙皮苷；ＨＰＬＣ
［收稿日期］ ２００９０３２５
［通信作者］ 石林平，Ｔｅｌ：１３８２０３６４７２８，Ｅｍａｉｌ：ｓｌｐ６６＠１２６．ｃｏｍ
［作者简介］ 姚立娟，副主任药师，主要从事中药制剂的研究，Ｔｅｌ：
１３８２０８８２１２０，Ｅｍａｉｌ：ｔｊｙｌｊ１９６５＠１６３．ｃｏｍ
蒲黄系香蒲科 Ｔｙｐｈａｃｅａｅ香蒲属植物水烛香蒲
ＴｙｐｈａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａＬ、东方香蒲 ＴｏｒｉｅｎｔａｌｉｓＰｒｅａｌ或
同属植物的干燥花粉，分生用和炒用，功效为止痛、止
血、行血。近年来研究发现蒲黄具有多种药理作用，
可以改善微循环，提高ｃＡＭＰ水平，防治冠心病、高脂
血症、心肌梗死等，且毒副作用小，其主要有效成分
为异鼠李素３Ｏ新橙皮苷、山奈酚３Ｏ鼠李糖基葡
萄糖苷、槲皮素３Ｏ新橙皮苷等黄酮类化合物［１］。
蒲黄中黄酮类提取方法通常以水及乙醇为溶媒
进行加热或回流提取［２４］，超临界萃取的应用未见报
道。本实验采用２００５年版《中国药典》该品种项下
ＨＰＬＣ条件，以异鼠李素３Ｏ新橙皮苷为指标［５］，对
超临界流体技术萃取蒲黄的最佳条件进行了正交试
验优选。
１ 材料
超临界萃取装置（ＨＡ１２１５０２０型，南通华安超
临界萃取有限公司）；高效液相色谱仪（Ｗａｔｅｒｓ２６９５
型，美国Ｗａｔｅｒｓ公司）；超声清洗器（ＣＱ５０型，上海
超声仪器厂）；电子分析天平（ＡＥ２４０Ｓ型，瑞士
ＭＥＴＴＬＥＲ）。
异鼠李素３Ｏ新橙皮苷对照品（中国药品生物
制品检定所，批号１１１５７１２００６０４）；ＣＯ２（食品级，含
量９９９％）；乙腈（色谱纯）；９５％乙醇（化学纯）；重
蒸水（自制）；蒲黄药材购于天津市南开区万舜大药
房，经鉴定为香蒲科香蒲属植物狭叶香蒲Ｔｏｌｉａ的
花粉，符合２００５年版《中国药典》标准。
２ 方法与结果
２１ 异鼠李素３Ｏ新橙皮苷的含量测定
２１１ 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基
硅烷键合硅胶为填充剂，流动相乙腈水（１５∶８５）；检
测波长２５４ｎｍ。在此条件下，异鼠李素３Ｏ新橙皮
苷的理论塔板数２５００～３０００。
２１２ 标准曲线的制备 精密称取异鼠李素３Ｏ
新橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每１ｍＬ含５０μｇ
的溶液，进样前用０４５μｍ滤膜过滤，分别精密吸
取０２，０４，０８，１６，３２ｍＬ用甲醇定容至１０ｍＬ，
进样测定，记录色谱图，以浓度 Ｃ为横坐标，峰面积
Ａ为纵坐标，进行线性回归，得的回归方程 Ａ＝
（４０２１×１０７）Ｃ－３８７７６５５１，ｒ＝０９９９８；在１０～
１００ｍｇ·Ｌ－１峰面积与浓度呈良好线性关系。
２１３ 精密度试验 取对照品溶液，重复进样 ５
次，测得峰面积的ＲＳＤ０５％。
２１４ 稳定性试验 取同一批号样品溶液，分别于
０５，１，２，４，８，１２ｈ内稳定，计算得峰面积的ＲＳＤ为
１７６％。表明样品溶液在１２ｈ内稳定。
２１５ 加样回收率试验 精密称取已知含量的蒲
黄药材粉末约４５０ｍｇ置１０ｍＬ量瓶中，加入对照品
溶液２０ｍＬ，按样品溶液制备方法配制，进行测定，
计算得平均回收率为９９７％，ＲＳＤ１９％（ｎ＝５）。
２１６ 蒲黄药材含量测定 取本品约０５ｇ，精密
称定，置５０ｍＬ量瓶中，加甲醇４５ｍＬ，超声处理（功
率２５０Ｗ，频率２０ｋＨｚ）３０ｍｉｎ，放冷，加甲醇至刻
度，摇匀，用０４５μｍ滤膜滤过，取续滤液测定，进
样量２０μＬ。上述操作重复３次，测到异鼠李素３
·９２１３·
第３４卷第２３期
２００９年１２月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９
Ｏ新橙皮苷的平均质量分数为０２５８％。
２２ 正交试验优选萃取工艺条件
２２１ 因素水平表 选用 Ｌ９（３
４）正交表，以异鼠
李素３Ｏ新橙皮苷转移率为考察指标，对萃取压
力、温度、一级分离压力、夹带剂乙醇用量等４因素
进行了考察，见表１。
表１ 因素水平
水平
Ａ萃取压力
／ＭＰａ
Ｂ萃取温度
／℃
Ｃ一级分离压力
／ＭＰａ
Ｄ夹带剂用量
／倍
１ １０ ３０ ５ １０
２ ２０ ４０ １０ １５
３ ３０ ５０ １５ ２０
２２２ 超临界流体萃取工艺 取粉碎后过２０目筛
的蒲黄药材适量，装入１Ｌ的萃取釜中，萃取釜压
力、温度按正交表 Ｌ９（３
４）设定的工艺参数进行，当
分离釜压力Ⅱ达到８ＭＰａ、温度达到４０℃时，连续
泵入９５％乙醇，ＣＯ２流量为３０～４５ｋｇ·ｈ
－１，根据夹
带剂的用量调节泵入速度，直至萃取完成。合并Ⅰ，
Ⅱ级分离釜所得提取物，即得。
２２３ 样品处理与指标测定 取超临界萃取液适
量经超声处理３０ｍｉｎ，用０４５μｍ滤膜滤过，取续
滤液测定，进样２０μＬ，计算异鼠李素３Ｏ新橙皮苷
（Ａ）的转移率（％）＝（萃取液中相当药材 Ａ含量／
药材中Ａ含量）×１００％。
２２４ 试验结果及数据处理 按上述 Ｌ９（３
４）正交
表，共进行了９次试验，有关数据进行直观分析和多
因素方差分析，见表２，３。
表２ 正交试验结果
Ｎｏ 异鼠李素３Ｏ新橙皮昔转移率／％
１ ６１３
２ ６６７
３ ６８１
４ ７４６
５ ７２２
６ ７３８
７ ７１１
８ ７３６
９ ６６２
由表２，３可知，压力对萃取效果的影响最大，夹
带剂用量次之，因素２和３对结果则无显著性影响。
综合方差分析与极差分析的结果，确定最佳的萃取
工艺条件为Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ３。
表３ 方差分析
方差来源 方差平方和 均方 Ｆ Ｐ
Ａ １０１４８７ １０００ ３８１５３ ＜００１
Ｂ ５６４７ ００５６ ２１２３
Ｃ ２６６０ ００２６ １０００
Ｄ ４８８０７ ０４８１ １８３４８
＜００１
误差 ２６６
注：ｆ＝２；Ｆ０１（２，２）＝９０，Ｆ００５（２，２）＝１９，Ｆ００１（２，２）＝
９９
２３ 重复验证试验
取同样蒲黄粉适量，按上述最佳工艺条件进行
超临界萃取３次，重复试验的结果异鼠李素３Ｏ新
橙皮苷的转移率均高于正交试验中的最高水平，说
明所优选的萃取工艺条件稳定可行。
３ 讨论
本实验为了对超临界萃取相关的因素进行考查
和优选，建立了异鼠李素３Ｏ新橙皮苷的含量测定
方法，并以其转移率为考察指标，实验结果表明：所
选指标对超临界萃取蒲黄的工艺优化具有良好的指
示作用。
本实验通过对影响超临界萃取效果的几项因素
进行考察，结果表明压力和夹带剂２个因素对蒲黄
中黄酮类成分萃取效果有较显著影响，而温度及分
离压力为不显著因素。适宜的压力是萃取效果优劣
的关键。此外，由于ＣＯ２极性较弱，对于非极性成分
有较好的溶解性，而对于极性大的生物碱及黄酮类
成分溶解性能较弱。本实验中加入了一定量的
９５％乙醇作为夹带剂，增强了流体对极性化合物的
萃取能力，结果表明对蒲黄的黄酮类有效成分萃取
效果良好。升温可提高溶质的蒸气压，增加溶质在
超临界流体中的浓度，但在本实验过程中的影响不
大，这可能由于蒲黄的药用部位为花粉，溶媒较容易
穿过细胞壁有关。
［参考文献］
［１］ 王浴生，邓文龙，薛春生，等中药药理与应用［Ｍ］２版，北
京：人民卫生出版社，１９９８，１２：１１８６
［２］ 柳克林蒲黄中提取水溶性成份最佳工艺的研究［Ｊ］湖南中
医杂志，２００１，１７（４）：５３
［３］ 刘斌，石任兵，王伟，等蒲黄总黄酮的提取方法研究［Ｊ］中
成药，２００２，２４（２）：８８
［４］ 傅大熙，王玮，程小卫，等蒲黄的黄酮类成分提取工艺研究
［Ｊ］中成药，２００５，２７（５）：５１８
［５］ 中国药典一部［Ｓ］２００５：２４５ ［责任编辑 周驰］
·０３１３·
第３４卷第２３期
２００９年１２月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９