全 文 ：青葙子药材的 ＨＰＬＣ指纹图谱分析
王 莹１，２，郭美丽１，王笑康２，殷 军２
（１．第二军医大学 药学院 生药教研室，上海 ２００４３３；
２．沈阳药科大学 中药学院 生药教研室，辽宁 沈阳 １１００１６）
［摘要］ 目的：研究不同产地青葙子药材的ＨＰＬＣ指纹图谱，为青葙子药材的鉴别及质量控制提供依据。方
法：采用ＥｌｉｔｅＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ２（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）色谱柱，乙腈０．１％冰醋酸水溶液为流动相梯度洗脱，流速１
ｍＬ·ｍｉｎ－１，以蒸发光散射检测器（ＥＬＳＤ）检测，记录７０ｍｉｎ色谱图。结果：２２个不同产地青葙子药材的指纹图谱
相似度较高，有１２个共有峰，各共有峰之间的分离度较好；聚类分析将产于我国中部地区的青葙子聚为１类，而产
于我国南部地区的青葙子被聚为另１类。结论：青葙子药材指纹图谱的特征性及专属性强，可用于青葙子药材的
鉴别及质量控制；不同产地青葙子的化学组成存在一定差异，固定产地来源对保障青葙子药材质量的稳定性极为
重要。
［关键词］ 青葙子；ＨＰＬＣＥＬＳＤ；指纹图谱
［中图分类号］Ｒ２８４．２ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０１００５１０３
［收稿日期］ ２００７０８１６
［基金项目］ 上海市中药现代化专项（０６ＤＺ１９７１５）；军队“十
一五”中医药研发推广专项（２００６１７２００３）
［通讯作者］ 郭美丽，Ｔｅｌ／Ｆａｘ：（０２１）２５０７４５７６，Ｅｍａｉｌ：ｍｌｇｕｏ
＠ｓｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
青葙子为苋科青葙属一年生草本植物青葙 Ｃｅ
ｌｏｓｉａａｒｇｅｎｔｅａＬ．的干燥成熟的种子，始载于《神农本
草经》，为传统的清肝明目药物。青葙子系药典收
载品种，其味苦、性微寒，归肝经。具有清肝，明目，
退翳之功效［１］。现代药理学研究表明，青葙子具有
保肝［２］、抗肿瘤［３］、抗糖尿病［４］等作用，尤其对脂肪
肝、化学性肝损伤等具有良好的防治作用［５］。青葙
子在全国范围内均有分布，不同产地的青葙子药材
品质各异，且药材市场中发现其混淆品，因此需要建
立一套能严格控制药材质量的技术方法。近年来，
中药指纹图谱技术已被用于中药的质量控制及鉴
定，其优点在于可以比较全面地反映中药复杂的化
学成分及其相对比例［６］。本研究采用 ＨＰＬＣＥＬＳＤ
法对不同产地青葙子药材进行指纹图谱研究，为全
面控制其药材质量提供科学依据。
１ 仪器与材料
１．１ 仪器与试药 Ａｇｉｌｅｎｔ１１００型高效液相色谱仪
（美国 Ａｇｉｌｅｎｔ公司）；ＳＥＤＥＸ８５型 ＥＬＳＤ（法国 ＳＥ
ＤＥＲＥ公司）；ＸＷＫ－３Ａ型空气泵（天津华生分析
仪器厂）。色谱乙腈（Ｆｉｓｈｅｒ公司），色谱冰醋酸（国
药集团化学试剂有限公司），水为双蒸水；青葙苷 Ａ
和青葙苷Ｂ对照品（由本实验室自制），经ＨＰＬＣ检
测纯度为９８．７％。
１．２ 生药样品来源 ２２个不同产地青葙子药材，于
２００５年８～９月采集，由第二军医大学药学院生药教研
室郭美丽教授鉴定为Ｃａｒｇｅｎｔｅａ。药材来源见表１。
表１ 青葙子药材来源
Ｎｏ． 产地 Ｎｏ． 产地
Ｓ１ 安徽亳州 Ｓ１２ 四川广安
Ｓ２ 安徽霍邱 Ｓ１３ 福建福州
Ｓ３ 浙江清江 Ｓ１４ 湖南永州
Ｓ４ 浙江雁荡 Ｓ１５ 广东珠海
Ｓ５ 浙江桐庐 Ｓ１６ 广东湛江
Ｓ６ 浙江瑶琳 Ｓ１７ 广西南宁（栽培）
Ｓ７ 山东潍坊 Ｓ１８ 广西南宁（野生）
Ｓ８ 北京西北旺 Ｓ１９ 重庆
Ｓ９ 北京植物园 Ｓ２０ 海南海口
Ｓ１０ 河北安国 Ｓ２１ 海南乐东
Ｓ１１ 江西南昌 Ｓ２２ 海南陵水
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＥｌｉｔｅＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ２（４．６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ）色谱柱，流动相 Ａ乙腈，Ｂ０．１％冰醋酸
水溶液。梯度洗脱程序：０～２４ｍｉｎ，Ａ由 １０％ ～
２８％；２４～４０ｍｉｎ，Ａ由２８％ ～３１％；４０～５５ｍｉｎ，Ａ
由３１％～４０％；５５～６２ｍｉｎ，Ａ由４０％ ～５５％；６２～
７０ｍｉｎ，Ａ５５％；流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温３０℃；检测
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器漂移管温度４０℃；载气压力３．５×１０５Ｐａ；进样量
２０μＬ。
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取青葙苷 Ａ对照
品和青葙苷Ｂ［５］对照品各适量，置１ｍＬ量瓶中，加
水溶解并稀释至刻度配成混合对照品溶液，备用。
２．３ 供试品溶液的制备 精密称取青葙子药材约
５ｇ，粉碎，置１００ｍＬ锥形瓶中，加１０倍量５０％甲
醇，浸润１２ｈ。超声提取２次，每次３０ｍｉｎ。合并提
取液，浓缩并用水定容置５ｍＬ量瓶。
２．４ 精密度考察 精密吸取安徽亳州青葙子药材
的供试品溶液 ２０μＬ，连续进样 ６次，检测指纹图
谱，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积的
ＲＳＤ分别在０．２％～０．６％和１．０％～２．０％，表明仪
器精密度良好。
２．５ 重复性考察 取安徽亳州青葙子药材６份，制
备供试品溶液，分别进样２０μＬ，检测指纹图谱，计
算供试品溶液各共有峰相对保留时间和相对峰面积
的ＲＳＤ分别在０．４％ ～１．０％和１．１％ ～３．０％，表
明方法重复性良好。
２．６ 稳定性考察 取安徽亳州青葙子供试品溶液
分别在制备后０，３，６，９，１２，２４ｈ检测指纹图谱，计
算各共有峰相对保留时间和相对峰面积的 ＲＳＤ分
别在０．３％～０．６％和１．０％～２．２％，表明供试品溶
液在２４ｈ内稳定。
２．７ 青葙子药材指纹图谱的建立 按上述方法检测
２２个不同产地青葙子药材的指纹图谱见图１。采用
“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件生成青葙
子药材共有模式的对照指纹图谱，得到１２个共有峰，
见图２。通过与对照品图谱对照，指认其中的８号峰
为青葙苷Ｂ，１０号峰为青葙苷Ａ。对照指纹图谱中各
色谱峰的保留时间（峰面积）分别为２７．６２（６８６．６），
３１．９４（３８９．９），３４．１３（７８０．３），３５．２４（３８２．３），４１．２８
（９６１７．９），４３．３５（１９０１４．３），５１．２５（４４２．６６），５２．３８
（３３６．３４），５９．０２（１１９６．４２），６２．６４（３４７０．６９），６５．８８
（９８９６６），６７．３９（４６２７２）。
２．８ 青葙子指纹图谱相似度分析和聚类分析 ２２
个不同产地青葙子药材与共有模式对照指纹图谱的
相似度分别为 ０．９８１，０．９７４，０．８１４，０．９５９，０．９８０，
０．９８１，０．９０７，０．９９３，０．９４９，０．８３８，０．９８７，０．９８９，
０．７８４，０．９４１，０．９８６，０．９４０，０．９８９，０．９５１，０．９８７，
０．９３４，０．９１８，０．９３８。１９个产地的药材与共有模式
之间相似度在０．９０以上，其余３个产地在
图１ 不同产地青葙子药材ＨＰＬＣ图谱
图２ 青葙子药材共有模式的对照指纹图谱
０．７８４～０．８３８。
采用社会科学统计程序（ＳＰＳＳ）软件对２２个不
同产地青葙子药材进行聚类分析，见图３。产于我
国南部地区的Ｓ１１，Ｓ１３，Ｓ１４～Ｓ１８和Ｓ２０～Ｓ２２号药
材聚为１类，Ａ类；产于我国中部地区的 Ｓ１～Ｓ８，
Ｓ１２，Ｓ１９号药材聚为１类，Ｂ类。Ｓ９和 Ｓ１０号样品
前４０ｍｉｎ的色谱峰与其他产地的色谱峰略有不同，
聚为１类，Ｃ类。
图３ 不同产地青葙子药材的聚类分析图
３ 讨论
检测器的选择 对照品青葙苷 Ａ和青葙苷 Ｂ均
为三萜皂苷类化合物，没有明显的紫外吸收，本实验
曾选用波长为２０３ｎｍ的紫外末端吸收对其检测，结
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果发现溶剂峰干扰较大，不宜用紫外检测器。而
ＥＬＳＤ可用于不含发色团的化合物的检测，且克服
了紫外检测器由于流动相有紫外吸收干扰和梯度洗
脱时基线漂移的不足。因此作者选择ＥＬＳＤ对青葙
子药材进行分析。
流动相系统的选择 本实验中作者考察了甲醇
水、乙腈水、乙腈水（含磷酸）及乙腈水（含冰醋
酸）等洗脱体系，结果以乙腈水（含０．１％冰醋酸）
体系洗脱得到的色谱峰形最佳，故选用乙腈０．１％
冰醋酸水溶液作为流动相。经多次摸索，以梯度洗
脱程序运行７０ｍｉｎ，可使全部色谱峰流出，并且主要
色谱峰的分离度较好。
本研究采用 ＨＰＬＣＥＬＳＤ法对不同产地青葙子
药材的指纹图谱进行了相似度分析和聚类分析，为
全面控制药材质量提供了科学的依据。从相似度分
析和聚类分析结果中可以看出，产于我国中部地区
的青葙子药材之间相似度较高，而产于我国南部地
区的青葙子药材之间相似度较高。说明不同产地青
葙子之间存在一定差异，因此固定产地来源对保障
青葙子药材质量的稳定性极为重要。
聚类分析还发现，北京植物园和河北安国产的
药材因有一定的特殊性而被聚为另一类，其原因有
待进一步研究。
［参考文献］
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ＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｉｎｓｅｅｄｏｆＣｅｌｏｓｉａａｒｇｅｎｔｅａ
ＷＡＮＧＹｉｎｇ１，２，ＧＵＯＭｅｉｌｉ１，ＷＡＮＧＸｉａｏｋａｎｇ２，ＹＩＮＪｕｎ２
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｇｎｏｓｙ，ＣｏｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３３，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｇｎｏｓｙ，ＣｏｌｅｇｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ ＦｏｒｐｒｅｆｅｒａｂｌｅａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｉｏｎａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍａｔｅｒｉａｌｑｕａｌｉｔｙｏｆＣｅｌｏｓｉａａｒｇｅｎｔｅａ，ＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔ
ｈａｂｉｔａｔｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．ＡｎａｌｙｓｉｓｗａｓｃａｒｉｅｄｏｕｔｏｎａＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ２ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｗｉｔｈａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ０．１％ ｇｌａ
ｃｉａｌａｃｅｔｉｃａｃｉｄａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ，ａｎｄｅｌｕａｔｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙａｎｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅｌｉｇｈｔｓｃａｔｅｒｉｎｇｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＥＬＳＤ）．Ｔｈｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｅ
ｖａｌｕａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｆｏｒｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｖｅｒｓｉｏｎ２００４Ａ）ｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏａｎａｌｙｓｅｓｔｈｅｓｉｍｉｌａｒｉ
ｔｙｏｆｔｈｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆｄｉｖｅｒｓｅｈａｂｉｔａｔｓ．ＴｈｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙＳＰＳＳ．Ｔｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｐｒｏｆｉｌｅｓｏｆｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｒｅｇｉｏｎｓｗｅｒｅｖｅｒｙｓｉｍｉｌａｒ．ＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆＳｅｍｅｎＣａｒｇｅｎｔｅａ１２ｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓａｎｄｅａｃｈｐｅａｋｉｎｔｈｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｗａｓ
ｗｅｌｓｅｐａｒａｔｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｂｏｖｅ．ＴｈｅｄｉｆｅｒｅｎｔｈａｂｉｔａｔｓｏｆＣａｒｇｅｎｔｅａｃａｎｂｅｇｒｏｕｐｅｄｔｏｔｗｏｔｙｐｅｓ：ｔｈｅｍｉｄ
ｄｌｅｒｅｇｉｏｎａｎｄｔｈｅｓｏｕｔｈｒｅｇｉｏｎ．ＴｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆＣａｒｇｅｎｔｅａｖａｒｙｗｉｔｈｄｉｆｅｒｅｎｔｈａｂｉｔａｔｓｓｏｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｍａｔｅｒｉａｌｈａｂｉｔａｔｉｓ
ｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＣａｒｇｅｎｔｅａ．Ｔｈｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｗｉｔｈｈｉｇｈｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｃｏｕｌｄｂｅａｐｐｌｉｅｄｉｎｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉ
ｃａｔｉｏｎａｎｄｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔｈｅｍａｔｅｒｉａｌｏｆＣａｒｇｅｎｔｅａ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｃｅｌｏｓｉａａｒｇｅｎｔｅａ；ＨＰＬＣＥＬＳＤ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ
［责任编辑 王亚君］
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