全 文 ：鲜地黄、生地黄和熟地黄对大鼠肝组织皮质酮降解的影响
史敏，赵宇，温学森
（山东大学 药学院 生药学研究所，山东 济南 ２５００１２）
［摘要］　目的：探讨鲜地黄、生地黄和熟地黄对大鼠肝组织皮质酮降解的影响。方法：用１６４０培养液制备肝组织悬液，
其中添加不同浓度的皮质酮，以及鲜地黄、生地黄和熟地黄提取液，培养４５ｍｉｎ后，用醋酸乙酯提取，以皮质醇作为内标，高效
液相色谱法测定皮质酮的含量。结果：当皮质酮质量浓度为０１，０５ｍｇ·Ｌ－１时，其降解率分别为７１１％，４２９％，添加不同
剂量鲜地黄、生地黄或熟地黄后，皮质酮降解率与对照比较无显著差异。结论：地黄不同炮制品对大鼠肝脏皮质酮降解无影
响，抗氧化可能是其抗炎机制之一。
［关键词］　地黄；皮质酮；肝组织；大鼠
［收稿日期］　２００９０４２０
［基金项目］　国家自然科学基金项目（３０４７２１８９）
［通信作者］　温学森，副教授，硕士生导师。Ｔｅｌ：（０５３１）８８３８２０２８，Ｅ
ｍａｉｌ：ｘ．ｓ．ｗｅｎ＠１６３．ｃｏｍ
［作者简介］　史敏，生药学专业硕士研究生。Ｔｅｌ：１３７９３１８９３１２，Ｅ
ｍａｉｌ：ｓｕｒｅｌｏｖｅｌｙ＠１６３．ｃｏｍ
　　地黄 ＲｅｈｍａｎｎｉａｇｌｕｔｉｎｏｓａＬｉｂｏｓｃｈ．为玄参科草
本植物，其块根以３种炮制形式入药，即鲜地黄、生
地黄和熟地黄。鲜地黄清热生津、凉血止血；生地黄
清热凉血、养阴生津；熟地黄则具有滋阴补血、益精
填髓的作用。三者药性虽然不同，但临床上均可用
于炎性疾病的治疗，如中耳炎、咽喉炎、关节炎、肝
炎、红斑狼疮、肾炎、糖尿病等［１３］，有的文献还认为
熟地黄具有糖皮质激素样作用［４］。
上海第一医学院在开展肾本质研究的过程中，
发现生地黄能对抗地塞米松所致的内源性糖皮质激
素下降，并通过离体实验证明生地黄等可以抑制兔
肝组织对皮质醇的降解［５］。由于肝脏是糖皮质激
素降解失活的主要场所，因此生地黄可能通过抑制
内源性糖皮质激素而间接发挥抗炎作用。鲜地黄与
生地黄化学成分相近，是否也具有类似作用，而经过
炮制，熟地黄的化学成分发生了显著变化［６］，其是
否仍具有这一活性？本文在离体条件下，对比了三
者对大鼠肝组织皮质酮降解的影响。
１　材料与方法
１．１　仪器和试剂
岛津高效液相色谱仪（ＬＣ１０ＡＴ输液泵，ＳＰＤ
１０Ａｖｐ紫外检测器），浙大智达 Ｎ２０００色谱工作站，
ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ）；３１１Ⅱ型 ＣＯ２培养箱（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；
ＡＹ１２０型电子分析天平（日本岛津）；ＴＧＬ１６Ｃ型台
式离心机（上海安亭科学仪器厂）；ＳＺ１型快速混匀
器（江苏金坛市金城国胜实验仪器厂）；６１１型超纯
水机（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）。
皮质酮（Ｆｌｕｋａ，批号４４９７３１／１）；皮质醇（国药
集团化学试剂有限公司，批号 Ｆ２００５０５３０）；１６４０培
养液（Ｇｉｂｃｏ，批号５０７７６６）；色谱纯甲醇（天津四友，
批号０８０５０８１０１）；其他为市售分析纯试剂。
１．２　药物制备
鲜地黄于 ２００８年 １０月采自山东聊城种植基
地，品种为“８５５”。
取中等大小的鲜地黄 ２００ｇ，加 ９５％乙醇 ６００
ｍＬ，匀浆，超声提取１ｈ，静置，过滤，以７５％乙醇再
提取 ２次，滤液合并，减压浓缩，以蒸馏水定容至
１００ｍＬ，得质量浓度为２ｇ·ｍＬ－１的鲜地黄提取液，
冷冻保存，用前稀释至适当浓度。
另取鲜地黄４００ｇ，７０℃烘至无硬心，取一半，
切碎，加７５％乙醇６００ｍＬ，同上制备生地黄提取液。
另一半于常压蒸制４８ｈ，同样制备熟地黄提取液。
为便于比较，地黄３种炮制品的浓度均以单位培养
体系中相当于鲜地黄的质量表示。
１．３　肝组织对皮质酮的降解
健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体重２００～２２０ｇ，由山东
大学实验动物中心提供，批号 ＳＣＸＫ（鲁）２００３０００４。
断头处死大鼠，７５％乙醇浸泡１ｍｉｎ，超净台中无菌
取肝，轻轻挤压肝组织，使其通过４０目钢网，收集通
过钢网的肝组织，加 ＰＢＳ，４００ｇ低温离心，洗涤 ２
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遍，称重所得沉淀，用１６４０培养液调整至含肝组织
为１００ｇ·Ｌ－１，备用。
本实验设４个组（空白对照、鲜地黄、生地黄和熟
地黄组），皮质酮设２个不同浓度，各地黄组设４个不
同浓度，共２６个不同处理，每个处理设３个重复。
以６孔板为培养容器，各孔添加肝组织悬液２
ｍＬ，１６４０培养液１８ｍＬ，置 ＣＯ２培养箱中，３７℃预
培养１ｈ，然后添加过滤除菌的皮质酮溶液１００μＬ
（使终浓度为０１，０５ｍｇ·Ｌ－１），再添加过滤除菌
后不同剂量的地黄提取液１００μＬ（使终浓度分别相
当于鲜地黄０１２，０６０，３０，１５０ｇ·Ｌ－１，空白对照
组添加１００μＬ生理盐水），总体积为４ｍＬ。摇匀，
继续培养４５ｍｉｎ。取出冰浴２ｍｉｎ，然后加入４０ｍｇ
·Ｌ－１的皮质醇标准液１００μＬ作为内标，混匀，加醋
酸乙酯５ｍＬ，振摇１ｍｉｎ，４００×ｇ离心５ｍｉｎ，取醋酸
乙酯相。如上萃取３次，合并萃取液，减压浓缩至
干，加１ｍＬ甲醇溶出，０４５μｍ滤膜过滤后作为分
析液。
１．４　皮质酮含量测定［６］
流动相甲醇水（６０∶４０）；流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１；检
测波长２６０ｎｍ；柱温 室温（２５℃）；进样量２０μＬ。
理论塔板数以皮质酮计不低于５０００。
１．４．１　标准曲线制备　取３９ｍＬ１６４０培养液，添
加４０ｍｇ·Ｌ－１的皮质醇标准溶液１００μＬ，以及系列
浓度（１，４，８，２０，４０，８０ｍｇ·Ｌ－１）的皮质酮标准溶
液１００μＬ，使其终浓度分别为００２５，０１，０２，０５，
１０，２０ｍｇ·Ｌ－１，混匀，按１３项下方法制备分析
液，用于建立标准曲线。
１．４．２　精密度，回收率与稳定性实验　于１０ｍＬ试
管中添加１８ｍＬ１６４０培养液和２ｍＬ肝组织悬液，
冰浴２ｍｉｎ，再添加４０ｍｇ·Ｌ－１的皮质醇标准溶液
１００μＬ，以及４，２０，８０ｍｇ·Ｌ－１的皮质酮标准溶液
１００μＬ，按１３项下方法制备分析液。１日内分别
进样测定５次，计算日内精密度。连续测定５ｄ，计
算日间精密度。
同上制备分析液，与不加肝组织悬液时所测数
值相比，求得相对回收率。稳定性实验选用皮质酮
浓度为２０ｍｇ·Ｌ－１，同上制备分析液，分别于０，２，
４，６，８，１２，２４ｈ后进样，测定峰面积，计算ＲＳＤ。
１．４．３　培养液中皮质酮的含量测定　培养液经制
备得到分析液，测定培养体系中皮质酮的剩余量，然
后根据以下公式计算皮质酮的降解率。
降解率＝（加入量－剩余量）／加入量×１００％。
１．５　统计分析
数据用 珋ｘ±ｓ表示，各处理测定值与相应空白对
照值进行ｔ检验。
２　结果
２．１　线性关系、回收率，精密度及稳定性
以皮质酮和皮质醇峰面积比值（Ｙ）与皮质酮浓
度（Ｃ）进行线性回归，得标准曲线 Ｙ＝０９４６４Ｃ＋
００１８２（ｒ＝０９９９２），说明体系中皮质酮浓度在
００２５～２ｍｇ·Ｌ－１内线性关系良好。最低定量限为
１２μｇ·Ｌ－１（Ｓ／Ｎ＞１０）。
皮质酮在 ３种浓度下的回收率分别为
９８４１％，９８０６％和 ９７８６％，ＲＳＤ分别为 １４０％，
３４１％和１８８％。３种浓度下皮质酮日内精密度
ＲＳＤ分别为２１１％，０５３％，０９０％，日间精密度分
别为 ２３４％，０７１％，１１２％。稳 定 性 的 ＲＳＤ
１０１％，说明本方法在２４ｈ内稳定。
２．２　皮质酮测定结果
当皮质酮为０１ｍｇ·Ｌ－１时，空白对照组的皮
质酮降解率为（７１０９５±１４７５）％，当皮质酮为０５
ｍｇ·Ｌ－１时，降解率（４２９０５±１０９０）％。添加不同
剂量鲜地黄、生地黄和熟地黄后，部分色谱图见图
１；肝组织对皮质酮的降解率与对照组比均无显著
差异。
Ａ．混合对照品（１．皮质醇，２．皮质酮）；Ｂ．皮质酮０１ｍｇ·Ｌ－１；
Ｃ．皮质酮０５ｍｇ·Ｌ－１；添加生地黄质量浓度３ｇ·Ｌ－１。
图１　各组大鼠肝组织培养液的ＨＰＬＣ
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３　讨论
地黄具有抗炎作用已被临床和实验所证实，但
关于其抗炎机制报道甚少。陈锐群等用分光光度
法，研究了生地黄等对兔肝脏降解皮质醇的影响，提
出生地黄可从多个途径抑制肝脏对皮质醇的降解，
从而解释生地黄对抗地塞米松对 ＨＰＡ轴的抑制作
用［５］，但本文结果未能证实其研究结果。
Ｗｉｓｔａｒ大鼠的糖皮质激素主要为皮质酮，血清
浓度一般为０１ｍｇ·Ｌ－１左右，强烈应激时会大幅
度上升，因此本文选用了０１，０５ｍｇ·Ｌ－１２个质
量浓度分别模拟正常和应激情况。结果所制备的肝
组织对皮质酮具有稳定的降解作用，说明肝组织活
性正常，但添加鲜地黄、生地黄和熟地黄各剂量对皮
质酮降解活性均无抑制作用。本文所用动物、肝组
织制备方法以及皮质酮分析方法与前人有所不同，
这些区别是否是导致结果不一的主要原因尚需进一
步研究。
地黄，尤其是熟地黄，具有滋阴补肾作用。现代
研究证实，肾阴虚常表现为 ＨＰＡ轴活化，糖皮质激
素水平偏高［５］。地黄治疗肾阴虚，应该能够降低糖
皮质激素水平，对此有学者已经在兔的体内实验中
得以证实，即生地黄使兔皮质酮水平显著下降［５］。
因此，本文认为地黄抗炎不是通过影响糖皮质激素
降解实现的。
现代研究表明，梓醇为鲜地黄和生地黄的主
要活性成分，其具有显著的抗炎作用［７］。经过炮
制，梓醇完全降解［８］，至今其降解产物不明，已有
研究发现熟地黄的大分子酸性成分具有抗炎作
用［９］。此外，梓醇和熟地多糖（８０％乙醇沉淀部分，
其中包括大分子酸性成分）均被证实具有抗氧化作
用［１０１１］，而炎症和氧化损伤具有正反馈关系，因此
认为地黄的抗炎作用可能与抗氧化活性有关。由于
炎症反应十分复杂，地黄的抗炎成分和机制有待于
深入探讨。
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