全 文 ：·研究报告·
高速逆流色谱分离制备菊苣酸单体
陈理
（杭州市药品检验所，浙江 杭州 ３１００１７）
［收稿日期］ ２００８１２１８
［通信作者］ 陈理，副主任技师，主要从事药物分析研究，Ｔｅｌ：
（０５７１）８５４６３８９８，Ｅｍａｉｌ：ｃｌｉ０１０１＠１６３．ｃｏｍ
菊苣酸（ｃｉｃｈｏｒｉｃａｃｉｄ）是紫锥菊植物中的主要
活性成分，为咖啡酸衍生物，具有增强免疫功能，抗
炎作用并能抑制透明质酸酶，保护胶原蛋白Ⅲ免受
可导致降解的自由基的影响。近来的研究还表明，
菊苣酸具有抑制ＨＩＶ１和ＨＩＶ１整合酶的作用。然
而在紫锥菊天然植物中菊苣酸的含量却很低，而且
存在着大量的其他成分的干扰物［１２］。
本研究以紫锥菊为原料，利用高速逆流色谱分
离技术对紫锥菊原料提取物进行了分离纯化的研
究，最终取得了高纯度的菊苣酸，取得了满意的分离
纯化效果。
１ 材料
美国 ＡｇｉｌｅｎｔＨＰ１１００高 效 液 相 色 谱 仪。
ＨＰ１１００紫外多波长检测器，ＨＰ色谱工作站。自制
高速逆流色谱仪（Ｊ型，聚四氟乙烯螺旋管柱体，内
径５５ｍｍ，柱容量１２００ｍＬ）；ＷＧＰ６型微量高压
平流泵；ＢＳ２４０自动部分收集器；
醋酸乙酯、甲醇、石油醚（沸程６０～９０℃）、乙
腈、甲酸、磷酸、冰乙酸均为国产分析纯，紫锥菊粉末
由正大青春宝药业有限公司提供。醋酸铵为分析
纯、甲醇为色谱纯（ＨＰ公司）、水为重蒸水。对照品
菊苣酸（美国Ｓｉｇｍａ公司，批号Ｃ７２４３）。
２ 方法
２．１ 样品的前处理 配置 ｐＨ２～３的盐酸水溶液
５００ｍＬ，用６ｍｏｌ·Ｌ－１盐酸调节溶液ｐＨ。称取紫锥
菊原料１００ｇ，用上述盐酸浓度５００ｍＬ溶解，超声１
ｈ（使其全部溶解），调节ｐＨ至２～３，用等体积的醋
酸乙酯进行萃取 ４次，合并有机相，减压蒸馏（３５
℃）。蒸馏所得萃取物用少量蒸馏水溶解，抽滤去
除不溶物，抽滤液置于冷冻干燥器内冻干（１２ｈ），制
得粉末放在密封的容器保存在冷藏柜中。
２．２ 溶剂系统的制备 取石油醚（沸程 ６０～９０
℃）、醋酸乙酯、甲醇、水（０２５％甲酸）按体积比
２∶５∶２∶５配制ＨＳＣＣＣ两相溶剂系统，充分振荡后，静
置分层过夜后备用。
２．３ 高速逆流色谱分离提纯菊苣酸 溶剂系统以
石油醚、醋酸乙酯、甲醇、水（０２５％甲酸）体积比为
２∶５∶２∶５，下相为流动相，上相为固定相。分别称取
紫锥菊提取物３ｇ在各５０ｍＬ的固定相和流动相两
相混合溶剂中溶解均匀即得样品溶液，分离前用氮
气将上相固定相注满螺旋管柱，启动 ＨＳＣＣＣ主机，
螺旋管柱按顺时针方向转，调节转速为 ８００ｒ·
ｍｉｎ－１，以３ｍＬ·ｍｉｎ－１的流速向柱中泵入下相流动
相进行洗脱，洗脱液通过ＨＰＬＣ在３３０ｎｍ波长下连
续检测。收集目标样品，最后将含有目标组分的洗
脱液减压浓缩，得到高纯度菊苣酸。
２．４ 组分的ＨＰＬＣ检测条件 ＺｏｒｂａｘＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ
Ｃ１８（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）；流动相为０１％磷酸
水溶液（Ａ）乙腈（Ｂ）梯度洗脱：０～３５ｍｉｎ，９２％ ～
７５％ Ａ，８％ ～２５％ Ｂ；检测波长 ３３０ｎｍ；流速 １０
ｍＬ·ｍｉｎ－１。
３ 结果与讨论
３．１ 菊苣酸的富集 紫锥菊原料经过４次等体积
醋酸乙酯萃取，由于菊苣酸有一定的亲水性和亲脂
性，极易溶于醋酸乙酯，而很多干扰成分（如烷酰胺
化合物）不被醋酸乙酯萃取，因此从紫锥菊提取物
在相同的ＨＰＬＣ系统中分离得到的色谱图显示，经
过萃取后的紫锥菊提取液与原料水溶液相比干扰产
物的含量明显减少，经过萃取后的菊苣酸的相对含
量已达约７０％。
３．２ 两相溶剂系统的选择 考察了２种不同的溶
剂系统，醋酸乙酯乙腈水和石油醚醋酸乙酯甲
醇水（０２５％甲酸），并调整两相溶剂系统中各溶剂
的体积比，使菊苣酸在两相溶剂中达到适合的分配
系数。结果发现，第２种溶剂系统各溶剂的体积比
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为２∶５∶２∶５时，分离效果相对较好。
３．３ 分离条件的确定 优化分离条件，在石油醚
醋酸乙酯甲醇水（０２５％甲酸）（２∶５∶２∶５）的溶剂
系统中进行分离，对不同转速、流速和进样量的样品
的分离情况进行比较，结果显示，采用转速为８００ｒ
·ｍｉｎ－１，流速３ｍＬ·ｍｉｎ－１，进样量１００ｍＬ，样品的
分离好，得率高。
［参考文献］
［１］ ＲｏｂｉｎｓｏｎＷＥＪ．Ｌｃｈｉｃｏｒｉｃａｃｉｄ，ａｄｉｃａｆｅｏｙｌｔａｒｉｃａｃｉｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆ
ＨＩＶｉｎｔｅｒｇｒａｓｅ，ｉｍｐｒｏｖｅｓｏｎｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏａｎｔｉＨＩＶｅｆｅｃｔｏｆｚｉｄｏｖｕ
ｄｉｎｅａｎｄａｐｒｏｔｅａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＡＧ１３５０）［Ｊ］．ＡｎｔｉｖｉｔｒａｌＲｅｓ，
１９９８，３９：１０１．
［２］ ＬｉｕＹＢ．Ｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄｉｍｍｕｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓａｎｄｃｌｉｎｉｃｏｆｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ
ｏｆＥｃｈｉｎａｃｅａｐｕｒｐｕｒｅａ［Ｊ］．ＷｏｒｌｄＰｈｙｔｏｍｅｄ，２００１，１６（２）：４７．
［责任编辑 周 驰］
全国第八次中医药创新与发展学术研讨会暨首届新世纪中药科技创新论坛征文通知
由中华中医药学会主办、《中华中医药杂志》社承办的“全国第八次中医药创新与发展学术研讨会”将于
２００９年７月在辽宁丹东举行。会议将邀请著名中医药专家、国家级课题组负责人、相关政策法规制定部门
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验总结；（３）中医药学科基础研究的新方法、新进展；（４）中医药学科临床研究的新思路；（５）名老中医用药心
得，民间偏方、验方验案分析；（６）中医药独特诊疗技术的发掘与应用；（７）中医药学科科研思路与方法学的
研究；（８）中医药医疗器具、器械、设备的开发及临床应用研究；（９）药用植物与中药（含民族医药，下同）鉴
定新技术研究、中药资源开发与可持续利用发展研究及中药材规范化种植（ＧＡＰ）研究；（１０）中药化学成分
及有效成分的提取、分离、鉴定及分析研究，中药制剂技术、工艺及质量标准评价和稳定性研究，中药炮制创
新技术及规范化研究，中药药理、毒理及中药临床应用研究；（１１）药事管理与法律法规研究；（１２）中医药医
疗、教学及科研管理研究；（１３）国家级、省部级、局级科研课题的最新研究进展及成果展示。
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三、其他事宜：稿件经审稿录用后将在国家级中文核心期刊《中华中医药杂志》（原《中国医药学报》）
２００９年增刊上刊出。参加大会学术交流者，由中华中医药学会颁发论文证书和国家Ⅰ类继续教育学分。如
有意参会，请自备因私护照。
四、联系方式：北京市朝阳区和平街北口樱花路甲４号《中华中医药杂志》社（收）；邮编：１０００２９；电话：
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