全 文 ：蒙古黄芪中不同提取部位抗氧化活性的研究
卞云云，李萍
（中国药科大学 现代中药教育部重点实验室 生药学教研室，江苏 南京 ２１０００９）
［摘要］ 目的：研究蒙古黄芪中不同提取部位的抗氧化活性。方法：采用生物化学发光法对蒙古黄芪的总黄酮、总皂苷
以及总多糖于１２５×１０－３～２５×１０－３ｇ·Ｌ－１的浓度检测其抗氧化能力。结果：蒙古黄芪的不同提物部位对３种自由基均有
清除作用，而且都呈明显的量效关系。其中，总黄酮清除自由基的能力最强，不同纯度的总黄酮（５５４８％ＴＦＡ，０５９％ＴＦＡ和
０３６％ＴＦＡ）清除超氧阴离子的ＩＣ５０分别为０６５４２，４６５４４，６０５５２ｇ·Ｌ
－１，清除羟基离子的 ＩＣ５０分别为００６０５，０２５４４，
０４９３０ｇ·Ｌ－１，清除过氧化氢的ＩＣ５０分别为００１０４，０１５６０，０２２４０ｇ·Ｌ
－１。结论：蒙古黄芪对过氧化氢、羟基离子的清除
能力明显强于超氧阴离子。总黄酮是蒙古黄芪抗氧化活性的主要成分，总皂苷和总多糖的抗氧化能力较弱。总黄酮清除自
由基的能力随纯度的增高而增高，相反，总皂苷、总多糖清除自由基的能力随纯度的增高而下降。
［关键词］ 蒙古黄芪；抗氧化；提取部位
［收稿日期］ ２００９０４２０
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０４７２１６０）
［通信作者］ 李萍，教授，博士生导师，Ｔｅｌ：（０２５）８５３２２４４８，Ｅ
ｍａｉｌ：ｌｉｐｉｎｇ２００４＠１２６．ｃｏｍ
自由基是一类具有不配对电子的活泼化学基
团。目前认为，人类疾病如各种炎症、动脉粥样硬
化、早老性痴呆、帕金森氏病、急性脑血管病、癌症、
衰老等，均与自由基的氧化刺激密切相关。由于氧
化损伤的机制在疾病的发生发展中起着重要的作
用，因此，中药的抗氧化作用是其达到治疗效果的重
要因素［１３］。蒙古黄芪为豆科黄芪属植物，性温，味
甘，为常用的滋补中药。现代药理研究表明，蒙古黄
芪可降低小鼠超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的含量，提示
蒙古黄芪可能具有抗氧化活性。汪德清等曾对黄
芪的抗氧化作用进行过报道［４６］，但目前对蒙古黄
芪不同提取部位的抗氧化活性还缺乏系统研究。
为进一步确证蒙古黄芪的抗氧化活性及其有效部
位，本实验采用邻苯三酚鲁米诺碳酸缓冲液（ｐＨ
１０２）体系、邻菲罗啉Ｃｕ２＋抗坏血酸过氧化氢缓
冲液（ｐＨ９２）体系以及过氧化氢鲁米诺碳酸缓
冲液（ｐＨ９５）体系，以生物化学发光法测定了蒙
古黄芪中不同提取部位的清除自由基能力，为今
后深入开发抗氧化、抗衰老的黄芪类中药提供前
期研究和理论基础。
１ 材料
１．１ 药物及不同提取部位的制备 蒙古黄芪（山
西省浑源县药材公司），由本文作者鉴定为豆科黄
芪属植物蒙古黄芪 Ａｓｔｒａｇａｌｕｓｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ的干燥
根，凭证标本存于中国药科大学生药学教研室。
总黄酮（ＴＦＡ） 蒙古黄芪的干燥根（２００ｇ）粉
碎后，以６０％乙醇１Ｌ８５℃加热回流提取，每次提
取１５ｈ，提取液浓缩为黏稠浸膏，蒸馏水溶解后以
石油醚萃取，萃取后的水层再以醋酸乙酯萃取水层
３次，每次２Ｌ，醋酸乙酯液浓缩，所得浸膏即为醋酸
乙酯部分（ＨＴ１），经测定其中总黄酮达 ０３６％
（０３６％ＴＦＡ）。该提取物经精制后得到提取物 ＨＴ
２，经测定其中总黄酮达 ０５９％（０５９％ＴＦＡ）。将
提取物ＨＴ２再精制后，得到提取物ＨＴ３，经测定其
中总黄酮达５５４８％（５５４８％ＴＦＡ）。
总皂苷（ＴＳＡ） 蒙古黄芪的干燥根（２００ｇ）粉
碎后，以９５％乙醇２Ｌ８５℃加热回流提取，每次提
取１５ｈ，提取３次，提取液浓缩为黏稠浸膏。将此
浸膏采用５倍量蒸馏水溶解，上Ｄ１０１大孔树脂柱，
先后以蒸馏水、４０％，７０％，９８％乙醇洗脱，合并
７０％～９８％乙醇洗脱液，蒸干得提取物Ⅰ，经测定，
该提取物含总皂苷达６００％（６００％ＴＳＡ）；将提取
物Ｉ精制后得提取物Ⅱ，该提取物含总皂苷达
８５０％（８５％ＴＳＡ）；将提取物Ｉ精制后得提取物Ⅲ，
该提取物含总皂苷达９８０％（９８０％ＴＳＡ）。
总多糖（ＴＰＡ） 取蒙古黄芪以６０％乙醇提取
后的残渣１００ｇ，以蒸馏水１Ｌ加热提取３次，每次
１５ｈ，水提液浓缩至０５Ｌ，加入工业乙醇直至乙醇
浓度达到８０％，有白色絮状沉淀物产生，取出沉淀
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物，冷冻干燥４８ｈ，得灰黄色粗多糖经测定其中总多
糖含量达到３３％（３３％ＴＰＡ）。将粗多糖精制后，得
到白色总多糖，其中总多糖达８６％（８６％ＴＰＡ）。
１．２ 试剂及试液配制 柱色谱硅胶（青岛海洋化
工厂，批号２００２５２３），焦性没食子酸（邻苯三酚，批
号２００４１１２０），３氨基邻苯二甲酰肼（鲁米诺，Ｆｌｕｃａ
公司），邻菲罗琳（上海三爱思试剂有限公司，批号
２００３０８１９），维生素Ｃ（上海四赫维化工有限公司，批
号２００３０４１５），色谱纯甲醇（Ｍｅｒｋ公司），其他化学
试剂均为分析纯。
供试品溶液配制：所有样品均用色谱纯甲醇定
容于量瓶中，配制为２ｇ·Ｌ－１溶液，用时稀释。邻苯
三酚鲁米诺碳酸盐缓冲液（ｐＨ１０２）体系、邻菲罗
啉Ｃｕ２＋抗坏血酸过氧化氢缓冲液（ｐＨ９２）体系
和过氧化氢鲁米诺碳酸缓冲液（ｐＨ９５）体系溶液
均依照文献报道配制［７８］。
１．３ 仪器 ＢＰＣＬ１ＧＣ微弱发光测量仪及 ＢＰＣＬ
Ａｐｐｌ．２６数据处理工作站（中国科学院北京生物
物理研究所），ｐＨＳ２５型酸度计（上海雷磁仪器
厂）。
２ 方法
２．１ 超氧阴离子的产生与清除 在发光杯中加入
样品溶液１０μＬ（以相同量的甲醇作空白对照）和邻
苯三酚溶液２０μＬ，再加入鲁米诺碳酸盐缓冲液混
合溶液 ９７０μＬ启动反应，记录 ２４０ｓ内发光强度
（ＣＬ）。
２．２ 羟基离子的产生与清除 在发光杯中依次加
入待测样品５０μＬ（以同量甲醇作空白对照），１×
１０－３ｍｏｌ·Ｌ－１ＣｕＳＯ４溶液５０μＬ，１×１０
－３ｍｏｌ·Ｌ－１
抗坏血酸溶液２０μＬ，１×１０－３ｍｏｌ·Ｌ－１邻菲罗啉溶
液５０μＬ，２×１０－３ｍｏｌ·Ｌ－１过氧化氢溶液５０μＬ，原
位加入００５ｍｏｌ·Ｌ－１硼砂（ｐＨ９２４）溶液７８０μＬ
启动反应，记录２４０ｓ内ＣＬ。
２．３ 过氧化氢的产生与清除 在发光杯中依次加
入待测样品５０μＬ（以同量甲醇作空白对照），２×
１０－３ｍｏｌ·Ｌ－１过氧化氢溶液５０μＬ，原位加入鲁米
诺碳酸缓冲液（ｐＨ９５）９００μＬ启动反应，记录６０
ｓ内ＣＬ。
２．４ 量效曲线拟合 根据 ＣＬ大小可判断物质清
除自由基的能力。自由基清除率用以下公式计算。
自由基清除率 ＝（ＣＬ空白对照 －ＣＬ样品）／ＣＬ空白对照 ×
１００％，以高浓度逐渐稀释的方式检测不同浓度的样
品对自由基的清除率，在不同浓度范围内进行曲线
拟合，以相关系数（ｒ）为指标确定样品浓度检测范
围，以自由基清除率为５０％时样品的浓度（ＩＣ５０）来
衡量样品对自由基的清除能力。ＩＣ５０越小，表明样
品清除自由基的能力越强。每种样品取３份，平行
测定，发光强度数值取其平均值计算。
数据分析表明，各种样品检测具有一定的浓度
范围，在该范围内样品浓度与自由基清除率有较好
的量效关系。根据自由基清除率范围来确定样品浓
度范围，自由基清除率在 １０％ ～９０％时相关性较
好，在该范围内相关系数 ｒ＞０９６。不同部位样品
量效关系呈ｙ＝ａｘ＋ｂ相关性，ｙ为清除率（％），ｘ为
样品浓度（ｇ·Ｌ－１）。
３ 结果与讨论
样品浓度与发光强度 ＣＬ的关系（以总黄酮为
例）。
３．１ 清除超氧阴离子活性比较 将样品稀释成不
同浓度分别进行抗氧化实验，结果表明所有样品的
ＣＬ均随其浓度的稀释而增大。随着样品浓度的降
低，发光强度增高，清除超氧阴离子的能力降低，其
中５×１０－３ｇ·Ｌ－１的样品发光强度最低，清除超氧
阴离子的能力也最高，而空白的发光强度最高，清除
超氧阴离子的能力也最低。
３．２ 清除羟基离子活性比较 随着样品浓度的降
低，发光强度增高，清除羟基离子的能力降低。其中
２５×１０－３ｇ·Ｌ－１的样品发光强度最低，清除羟基离
子的能力也最高，而空白的发光强度最高，清除羟基
离子的能力也最低。
３．３ 清除过氧化氢活性比较 随着样品浓度的降
低，发光强度增高，清除过氧化氢的能力降低。其中
２５×１０－３ｇ·Ｌ－１的样品发光强度最低，清除过氧化
氢的能力也最高，而空白的发光强度最高，清除过氧
化氢的能力也最低。
３．４ 不同纯度的提取部位清除自由基实验 实验
结果显示，对３种反应体系而言，样品在一定的浓度
范围内与自由基清除率呈对数量效关系，清除率在
１０％（９０％时，线性关系良好，所有标准曲线的相关
系数（ｒ）均大于０９５。因此，本实验方法可以较好
地反映样品的抗氧化活性。ＩＣ５０反映了清除自由基
的能力，ＩＣ５０越小，则清除自由基的能力（抗氧化能
力）越大，反之亦然。
在３种自由基的清除实验中，清除羟基离子和
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过氧化氢的ＩＣ５０明显小于超氧阴离子，表明黄芪各
提取部位清除羟基离子和过氧化氢能力较强，清除
超氧自由基能力最弱。不同植物对这３种自由基的
清除能力是不同的，大部分植物清除超氧阴离子的
能力都弱于其他２种自由基，黄芪药材清除过氧化
氢能力最强，这与文献报道一致［３］（表１～３）。
表１ 不同纯度的提取部位清除超氧阴离子实验
样品 量效曲线 ｒ ＩＣ５０／ｇ·Ｌ－１
６０％ＴＳＡ ｙ＝２２６５ｘ＋２０３７２ ０９９４２ １３０８０８
８５％ＴＳＡ ｙ＝１７２３ｘ＋２７９２ ０９８３６ ２７３９８７
９８％ＴＳＡ ｙ＝１２２８ｘ＋２８６１ ０９８９３ ３８３８６８
０３６％ＴＦＡ ｙ＝７９５１ｘ＋１８５５ ０９９８２ ６０５５２
０５９％ＴＦＡ ｙ＝９７６４ｘ＋４５５４ ０９９７８ ４６５４４
５５４８％ＴＦＡ ｙ＝１０４５３ｘ＋４３１６２ ０９９８６ ０６５４２
３３％ＴＰＡ ｙ＝０３９８ｘ＋５３３２ ０９９３２ １１２２３１２
８６％ＴＰＡ － － －
注：－表示该样品无明显的清除超氧阴离子作用。
表２ 不同纯度的提取部位清除羟基离子实验
样品 量效曲线 ｒ ＩＣ５０／ｇ·Ｌ－１
６０％ＴＳＡ ｙ＝７７５６ｘ＋４２４９８ ０９９４５ ０９６７２
８５％ＴＳＡ ｙ＝２０１７２ｘ＋１４５５７ ０９７５６ １７５７０
９８％ＴＳＡ ｙ＝１３０９２ｘ＋２２９８ ０９９９３ ３６４４２
０３６％ＴＦＡ ｙ＝１５４８８ｘ＋４２３６７ ０９９４０ ０４９３０
０５９％ＴＦＡ ｙ＝２０３１２ｘ＋４４８３３ ０９９６５ ０２５４４
５５４８％ＴＦＡ ｙ＝４８１２５ｘ＋４７０８８ ０９９４８ ００６０５
３３％ＴＰＡ ｙ＝８１０１ｘ＋１５０５２ ０９５１７ ４３１４０
８６％ＴＰＡ ｙ＝７２８１ｘ＋３０９５ ０９９５９ ６４４２１
表３ 不同纯度的提取部位清除过氧化氢实验
样品 量效曲线 ｒ ＩＣ５０／ｇ·Ｌ－１
６０％ＴＳＡ ｙ＝７８３９ｘ＋２９３９５ ０９９７９ ２６２９１
８５％ＴＳＡ ｙ＝２５９２２ｘ－３５９４３ ０９５４５ ３３１４２
９８％ＴＳＡ ｙ＝６９７０ｘ＋２２６１５ ０９７１７ ３９２９６
０３６％ＴＦＡ ｙ＝３５４０ｘ＋８０８１５ ０９８５８ ０２２４０
０５９％ＴＦＡ ｙ＝８２１４ｘ＋４８７１９ ０９８７２ ０１５６０
５５４８％ＴＦＡ ｙ＝１６２１７ｘ＋４９８３１ ０９９１１ ００１０４
３３％ＴＰＡ ｙ＝４４７８ｘ－５８６７ ０９５４３ １２４６６４
８６％ＴＰＡ ｙ＝１０６２ｘ＋２９９５３ ０９５６４ １８８８４６
对蒙古黄芪的不同提取部位进行比较，可以看
出总黄酮的ＩＣ５０均远小于其他部位，证明总黄酮的
抗氧化能力最强，是黄芪药材中最主要的活性部位。
总皂苷也有较强的清除自由基能力。在所有部位
中，总多糖的ＩＣ５０大大高于其他部位，表明其抗氧化
活性最弱，这也与文献报道一致［４６］。因此，不同提
取物的抗氧化活性次序为：总黄酮 ＞总皂苷 ＞总
多糖。
本实验还进一步比较了 ３种不同纯度的总黄酮
（ＴＦＡ），３种不同纯度的总皂苷（ＴＳＡ）以及２种不同
纯度的总多糖（ＴＰＡ）对超氧阴离子自由基的清除能
力（表１）。结果显示：５５４８％ＴＦＡ清除超氧阴离子
的能力是０５９％ＴＦＡ的７１１倍，是０３６％ＴＦＡ的
９２６倍；６０％ＴＳＡ清除超氧阴离子的能力是 ８５％
ＴＳＡ的２０９倍，是９８％ＴＳＡ的２９４倍；３３％ＴＰＡ清
除超氧阴离子的能力很弱，ＩＣ５０为 １１２２３１２ｇ·
Ｌ－１，而８６％ＴＰＡ没有明显的清除超氧阴离子的能
力。
本实验还比较了 ３种不同纯度的总黄酮
（ＴＦＡ）、３种不同纯度的总皂苷（ＴＳＡ）以及２种不同
纯度的总多糖（ＴＰＡ）对羟基离子的清除能力（表
２）。结果显示：５５４８％ＴＦＡ清除羟基离子的能力
是０５９％ＴＦＡ的 ４２０倍，是 ０３６％ＴＦＡ的 ８１５
倍；６０％ＴＳＡ清除羟基离子的能力是 ８５％ＴＳＡ的
１８２倍，是９８％ＴＳＡ的３７７倍；３３％ＴＰＡ清除羟基
离子的能力是８６％ＴＰＡ的１４９倍。
另外，本实验还比较了３种不同纯度的总黄酮
（ＴＦＡ）、３种不同纯度的总皂苷（ＴＳＡ）以及２种不同
纯度的总多糖（ＴＰＡ）对过氧化氢的清除能力（表
３）。结果显示：５５４８％ＴＦＡ清除过氧化氢的能力
是０５９％ＴＦＡ的１５倍，是０３６％ＴＦＡ的２１５４倍；
６０％ＴＳＡ清除过氧化氢的能力是８５％ＴＳＡ的１２６
倍，是９８％ＴＳＡ的１５０倍；３３％ＴＰＡ清除过氧化氢
的能力是８６％ＴＰＡ的１５２倍。
以上３项实验均显示出相同的规律，即总黄酮
清除自由基的能力随样品纯度的提高而明显升高，
而总皂苷和总多糖则与之相反，清除自由基的能力
随样品纯度的提高而降低。这可能是由于纯度小的
总皂苷及总多糖混入的黄酮类等成分较多，而黄酮
类又是抗氧化活性最强的部分，黄酮类成分对抗氧
化活性的影响大于皂苷类及多糖类成分。
本文采用了３种活性氧检测体系，其中超氧阴
离子是体内最早形成的自由基，也是最主要的活性
氧，羟基离子和过氧化氢则是导致体内脂质过氧化
的主要活性氧。化学发光法中发光强度与活性氧的
数量呈负相关，因此可用于检测黄芪的不同品种药
材、不同提取部位以及不同单体化合物清除活性氧
的作用。
［参考文献］
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·Ｌ－１．Ｒｅｓｕｌｔ：Ａｌｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｓｓｈｏｗｅｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ３ｄｉｆｅｒｅｎｔｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓｗｉｔｈｏｂｖｉｏｕｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｃａｖｅｎ
ｇｉｎｇｃａｐａｃｉｔｙｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ．ＴｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＴＦＡｗａｓｔｈｅｓｔｒｏｎｇｅｓｔａｍｏｎｇｔｈｅｍ．ＴｈｅＩＣ５０ｏｆｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅａｎｉｏｎｒａｄｉ
ｃａｌｓｏｆＴＦＡ（５５４８％ＴＦＡ，０５９％ＴＦＡａｎｄ０３６％ＴＦＡ）ｗｅｒｅ０６５４２，４６５４４ａｎｄ６０５５２ｇ·Ｌ－１，ｔｈｅＩＣ５０ｏｆｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｈｙ
ｄｒｏｘｙｌａｎｉｏｎｗｅｒｅ００６０５，０２５４４ａｎｄ０４９３０ｇ·Ｌ－１，ａｎｄｔｈｅＩＣ５０ｏｆｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅｗｅｒｅ００１０４，０１５６０ａｎｄ
０２２４０ｇ·Ｌ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｓａｒｅｍｏｒｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅａｎｄｈｙｄｒｏｘｙｌａｎｉｏｎｔｈａｎｔｏｓｕｐｅｒｏｘ
ｉｄｅａｎｉｏｎｒａｄｉｃａｌｓ．ＴＦＡｏｆＡ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓＢｕｎｇｅｉｓｔｈｅｍａｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ，ｗｈｉｌｅＴＳＡａｎｄＴＰＡｈａｖｅ
ｗｅａｋｅｒａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ．ＴｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＴＦＡｉｎｃｒｅａｓｅｓｗｉｔｈｔｈｅｒｉｓｅｏｆｉｔｓｐｕｒｉｔｙ．Ｏｎｔｈｅｃｏｎｔｒａｒｙ，ｔｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉ
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第３４卷第２２期
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Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２２
Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２００９