全 文 ：金银花同源四倍体的诱导和鉴定
向增旭１，高山林２
（１．南京农业大学 中药材研究所，江苏 南京 ２１００９５；
２．中国药科大学 中药学院 遗传育种研究室，江苏 南京 ２１００３８）
［收稿日期］ ２００７０９１４
［通讯作者］ 向增旭，Ｔｅｌ：（０２５）８４３９６５９１，Ｅｍａｉｌ：ｚｘｘｉａｎｇ＠
ｎｊａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
金银花是忍冬科忍冬属植物忍冬 Ｌｏｎｉｃｅｒａｊａ
ｐｏｎｉｃａＴｈｕｎｂ．的干燥花蕾或带初开的花，具有清热
解毒，凉风散热之功效［１］，是中医常用药。药用植
物多倍体具有药效成分含量高，抗逆性强等特
点［２］。利用生物技术进行多倍体诱导，诱导效率
高，嵌合体少［３］。本研究利用生物技术，在离体组
织水平上进行出金银花同源四倍体的诱导，以期为
选育金银花四倍体新品种提供技术支持。
１ 材料和方法
１．１ 外植体初生培养
金银花顶芽用自来水冲洗３０ｍｉｎ，用７５％乙醇
处理３０ｓ，０１％汞消毒５ｍｉｎ，用蒸馏水清洗后，接
入Ｂ５＋ＢＡ２０ｍｇ·Ｌ
－１＋ＫＴ０５ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＡＡ
０５ｍｇ·Ｌ－１培养基中，１个月转接继带１次。２～３
代后得到具有丛生芽的愈伤组织。以丛生芽的芽尖
作为诱导多倍体的材料。每日光照１６ｈ，光强１２００
Ｌｘ，培养室温度２５℃。
１．２ 多倍体诱导
用２种方法诱导多倍体：将愈伤组织块接种在
添加不同浓度秋水仙素的培养基 Ｂ５＋ＢＡ２０ｍｇ·
Ｌ－１＋ＫＴ０５ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＡＡ０５ｍｇ·Ｌ－１上，培养１
个月后，把培养物转到不含秋水仙素的上述培养基
上，使其分化成苗，并继代扩大培养，以建立株系；将
带有丛生芽的愈伤组织块用含有０２％秋水仙素和
２％二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）的水溶液分别浸泡１２，２４，
２６，４８，９６，１２０ｈ，无菌水洗３次，然后接种在 Ｂ５＋
ＢＡ２０ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ０５ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＡＡ０５ｍｇ·
Ｌ－１培养基上，使其分化成苗，再继代扩大培养。上
述２种方法处理得到的株系在 １／２ＭＳ＋ＮＡＡ０５
ｍｇ·Ｌ－１。培养基上诱导生根，待根长至０５～１ｃｍ
时，切取根尖。经３次以上做染色体鉴定观察确认
为四倍体的株系，予以保留并扩大繁殖。
１．３ 根尖细胞的染色体检查 待根尖长至０５～１
ｃｍ长时分别切取变异小苗和二倍体对照植株根尖
０５ｃｍ左右，在蒸馏水中漂洗干净，放入０１％秋水
仙碱溶液中处理３０ｍｉｎ，用蒸馏水冲洗３次，放入卡
诺固定液中固定２ｈ，０５ｍｏｌ·Ｌ－１盐酸６０℃软化
处理５ｍｉｎ，切取根尖，改良石碳酸品红液染色，压
片、镜检。
２ 结果与分析
从表１中可以看出，培养基中添加不同浓度的
秋水仙素对金银花四倍体的诱导均有一定的效果。
其中以添加４０ｍｇ·Ｌ－１秋水仙素处理组诱导率最
高，达到２０％；随着秋水仙素浓度的提高，外植体的
死亡率也上升，总诱导率下降。因而处理中以添加
４０ｍｇ·Ｌ－１秋水仙素较为合适；从表２中可以看出，
用秋水仙素溶液浸泡处理丛生芽，四倍体的诱导率
明显低于培养基添加４０ｍｇ·Ｌ－１秋水仙素处理组，
诱导率最高只有１５％。
表１ 培养基中添加秋水仙素对金银花四倍体诱导的结果
接种芽数
秋水仙素
／ｍｇ·Ｌ－１
存活芽数 获得四倍体数
诱导率
／％
１５ ０ １５ ０ ０
１５ ２０ １２ １ ６７
１５ ４０ ９ ３ ２０
１５ ６０ ５ ３ ２０
１５ ８０ ５ ２ １３４
１５ １００ ４ １ ６７
１５ １２０ ３ ０ ０
比较表１和表２的实验结果，可以看出诱导金
银花多倍体较好的方法是将从生芽接种在添加４０
ｍｇ·Ｌ－１秋水仙素 Ｂ５＋ＢＡ２０ｍｇ·Ｌ
－１＋ＫＴ０５
ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＡＡ０５ｍｇ·Ｌ－１培养基中，１个月后转
接入不含秋水仙素的培养基中继代培养，诱导率达
到２０％，是较为理想的诱导方法。
金银花二倍体和四倍体根尖染色体鉴定结果分
别为２ｎ＝２ｘ＝１８，２ｎ＝４ｘ＝３６（图１，图２）。本鉴定
·６９６·
第３３卷第６期
２００８年３月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ６
Ｍａｒｃｈ，２００８
表２ 秋水仙素浸泡丛生芽对金银花四倍体诱导的效果
浸泡芽数
浸泡时间
／ｍｉｎ
存活芽数 获得四倍体数
诱导率
／％
２０ ０ ２０ ０ ０
２０ ２４ １８ １ ５
２０ ４８ １６ ２ １０
２０ ７２ １１ ３ １５
２０ ９６ ９ １ ５
２０ １２０ ４ ０ ０
研究经共获得１８个金银花同源四倍体株系，为进一
步进行优良品种的选育奠定了基础。
图１ 金银花二倍体（２ｘ＝１８）
３ 结论
诱导金银花多倍体较好的方法是将从生芽接种
在添加４０ｍｇ·Ｌ－１秋水仙素的 Ｂ５＋ＢＡ２０ｍｇ·
Ｌ－１＋ＫＴ０５ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＡＡ０５ｍｇ·Ｌ－１培养基
图２ 金银花四倍体（４ｘ＝３６）
中。１个月后转接入没有秋水仙素的培养基中继代
培养，诱导率达到２０％。经过３次根尖鉴定后确定
为多倍体的植株在 Ｂ５＋ＢＡ２０ｍｇ·Ｌ
－１＋ＫＴ０５
ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＡＡ０５ｍｇ·Ｌ－１培养基中扩大繁殖，共
建立了１８个多倍体株系。
［参考文献］
［１］ 中国药典［Ｓ］．一部．２００５：１５２．
［２］ 张旺凡，汪友蓉．多倍体育种技术在药用植物领域应用进展
［Ｊ］．中医药导报，２００６，１２（２）：８３．
［３］ 张爱民，常 莉，薛建平．药用植物多倍体诱导研究进展［Ｊ］．
中国中药杂志，２００５，３０（９）：６４５．
［责任编辑 张宁宁］
［收稿日期］ ２００７０１２１
［通讯作者］ 付志文，Ｔｅｌ：１３４７５６０２３２４，Ｅｍａｉｌ：ｆｕｚｈｉｗｅｎ１００
＠１２６．ｃｏｍ
桔梗配方施肥方法研究
王 玲１，付志文２，董其亭２，蔡爱民２
（１．山东中医药大学 附属医院，山东 济南 ２５００００；
２．山东鼎立中药材科技有限公司，山东 淄博 ２５５０８６）
桔梗 Ｐｌａｔｙｃｅｄｏｎｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｒｎ（Ｊａｃｑ）Ａ．ＤＣ，为
桔梗科多年生草本植物［１］，桔梗原产中国，多生于
海拔 ２００～８５０ｍ的干燥向阳山坡、林缘及灌丛
间［２］，主产我国东北至华南。朝鲜、日本、俄罗斯远
东地区都有分布［３］。目前关于桔梗施肥相关的报
道很少。桔梗在生长期间对氮（Ｎ）、磷（Ｐ）、钾（Ｋ）
的需求量较大，因此需要以肥料的形式将Ｎ，Ｐ，Ｋ补
充给土壤。桔梗施用肥料时多用有机肥或复合肥
料。复合肥料的养分比例固定，不能满足桔梗生长
对养分的要求。本试验用正交法筛选合适的 Ｎ，Ｐ，
Ｋ配比，为大田种植桔梗获得较高的产量提供了一
个参考。
１ 材料与方法
１．１ 材料 山东省淄博市沂源县鼎立药源基地。
土壤类型是沙壤土，仅施过基肥，基肥为有机肥。每
６６７ｍ２施用量为２５００ｋｇ。土壤的基本养分状况见
表１。
山东鼎立药源基地自产桔梗种子，经过山东农
业大学王建华教授鉴定为桔梗科植物桔梗Ｐ．
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第３３卷第６期
２００８年３月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ６
Ｍａｒｃｈ，２００８