全 文 ：基于有效组分检测与理化表征相结合的
蜣螂有效部位制备工艺研究
马家骅!+! 谭承佳)! 衣文娇+! 杨明+!
f西南科技大学! 四川 绵阳 #+$$%+f成都中医药大学! 四川 成都 #)%%
)f绵阳师范学院! 四川 绵阳 #+$$$#
$摘要%!目的&优选蜣螂有效部位的制备工艺$探索通过提取液理化表征来进行过程控制的可行性( 方法&采用单因素
试验法$主要以有效组分多肽与氨基酸的含量为指标$结合流变学%表面化学%电学等方面的表征$系统考察影响蜣螂有效部
位制备相关的提取%浓缩%分离%纯化%干燥各环节的各因素( 结果&确定了蜣螂有效部位的制备工艺条件$即#取蜣螂药材粉碎
为粗粉$用 ) 倍量的 (g乙醇浸泡 &( ?$加 (g乙醇 $ 倍量$以 & 0F-0R2d-[Dd的速度渗漉$收集漉液$滤过$滤液在 $ j
h浓缩至 r$冷藏除脂后$通过I4+$5<大孔树脂柱$先后用 M\水与 & M\%$g乙醇为洗脱剂进行洗脱$分别收集洗脱
液( 水洗脱液浓缩$干燥$加 (g乙醇洗涤 + 次$取洗液$与 %$g乙醇洗脱液合并$浓缩$干燥$即得( 同时$本实验对有效部位
制备各环节的液相体系进行表征$发现与有效物质多肽相关的表面张力基本未变$而与无效物质盐密切相关的电导率降低了
约 *$g$最大限度地保留了药物治病的有效信息$去除了无效信息( 结论&筛选的蜣螂有效部位制备工艺条件稳定可靠$通过
提取液理化表征来进行过程控制切实可行(
$关键词%!蜣螂)有效部位)有效组分)理化表征)制备工艺
$稿件编号%!+$$$$$
$基金项目%!国家自然科学基金项目!)$($$$)$*$+$$)绵阳
市科技计划项目!$*8$$+5+
$通信作者%!!杨明$NQV#!$+( #($$+%$H50BRV#6B2D0R2D# 3
+#f./0
$作者简介%!马家骅$主要从事物理药剂学$中药新制剂%新剂型的
研究$H50BRV#1RB?WB0B3#)f./0
!!中药制剂在制备过程中$大多采用终端控制$即
最后检测制剂成品的质量$而缺乏过程控制$尤其是
对提取液的质量往往不加考虑$而直接进入下道工
序$使得成品的质量差异较大$疗效不稳定$存在安
全隐患( 因此$亟待加强中药制备工艺过程的质量
控制( 近年来$也出现了一些新的评价方法$郭立
玮*+等以中药水提液的物理化学参数为指标$探讨
了不同处理方法对提取液的纯化效果等$这些有益
的探索对中药的评价提供了一种新的思路$但缺乏
对提取液系统而全面的表征研究( 为此$有必要在
当前这些评价方法的基础上$探索一种更趋于全面
的过程质量评价模式(
本文通过对蜣螂有效部位制备各环节液体分散
体系宏观理化性质的表征$结合现代微观化学成分
的指认$对蜣螂有效部位的制备工艺进行研究( 本
课题组前期研究初步发现$蜣螂中所含多肽%氨基酸
可能为其治疗良性前列腺增生症的主要物质基础$
文中根据有效部位的化学性质$选择适宜的提取与
分离方法$采用单因素试验法$以组分含量为指标$
结合流变学%表面化学%电学等方面的表征$对影响
制备各环节的关键因素进行系统研究$以期筛选出
蜣螂有效部位最佳制备工艺(
!材料
MG+I电子天平!德国 8BC@/CRWS公司$_\5
\:8 %$$ 分光光度计 !日本 8J:94Ia_公司$
G?6SR.B9<>$ 型流变仪!奥地利安东帕有限公
司$aQ@BSRYQC;B2/8激光粒度仪!9BVcQC2仪器有限
公司$I<4N 表面=界面张力仪$II85)$%4电导
率仪!上海雷磁精密仪器厂)
蜣螂!成都荷花池中药材市场由成都中医药
大学杨明教授鉴定$丙氨酸对照品!中国药品生物
制品检定所$&$#($5+$$&$$牛血清白蛋白 \!瑞
士>/.?Q公司$批号4($+$$I4+$5<大孔树脂!江
苏苏青水处理工程集团有限公司$水为蒸馏水$其
余试剂均为分析纯(
!方法与结果
]!评价指标的选择与表征方法
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]]!多肽!多肽为蜣螂抗良性前列腺增生症的
主要有效组分$故以多肽的含量作为乙醇渗漉提取
工艺的评价指标之一(
对照品溶液制备#精密称取牛血清白蛋白对照
品 $f+) +D$置 0F量瓶中$加水溶解并稀释至刻
度$摇匀$即得(
供试品溶液的制备#取各试验所得提取液调整
总量至 #$$ 0F$摇匀$精密吸取 +$ 0F置蒸发皿中$
在水浴上蒸发至适量$转移至 $ 0F量瓶中$加
(g乙醇至刻度$摇匀$即得(
测定法#精密量取供试品溶液 + 0F置玻璃试管
中$加水至 +f$ 0F$加双缩脲试剂 &f$ 0F$混匀$置 )%
h水浴中 )$ 0R2$以相应的溶剂为空白$照紫外5可见
分光光度法!&中国药典+$$ 年版三部附录 4$在
波长 &$ 20处测定吸光度$计算多肽的含量(
]]!氨基酸!氨基酸为蜣螂抗良性前列腺增生
症的另一有效组分$其测定常用茚三酮显色法$该法
灵敏度高$重现性好$简便准确$便于工艺控制$故采
用茚三酮显色法测定氨基酸的含量(
对照品溶液制备#精密称取丙氨酸对照品
#f() 0D$置 $$ 0F量瓶中$加 $g异丙醇溶解并
稀释至刻度$摇匀( 精密量取 0F$置 $ 0F量瓶
中$加水至刻度$摇匀$即得(
供试品溶液的制备#取各试验所得提取液调整
总量至 #$$ 0F$摇匀$精密量取 0F$置 $ 0F量瓶
中$加 (g乙醇稀释至刻度$摇匀$即得(
测定法#精密量取供试品溶液 + 0F置 $ 0F量
瓶中$加水至 +f 0F$精密加入 g维<溶液!新鲜
配制$f 0F$茚三酮溶液 )f$ 0F$摇匀$置 ($ h水
浴中加热 0R2$取出$迅速冷至室温$加 #$g乙醇
至刻度$摇匀$即得( 以相应的溶剂为空白$照紫外5
可见分光光度法!&中国药典+$$ 年版三部附录
4$在 %$ 20波长处测定吸光度$计算含量(
]]&!出膏率!出膏率是药品日服量$单服剂量及
包装规格确定的依据$能够部分代表药物的综合疗
效$故以其作为乙醇渗漉提取工艺的另一评价指标$
照&中国药典附录项下方法测定(
]]Y!理化参数!本实验用流变仪进行流变学表
征$电导率仪测定电导率进行电学表征$表面=界面
张力仪测定表面张力进行表面化学表征(
]!提取工艺条件考察
为保证制剂的有效性$根据物质基础研究的结
果及实际生产的可行性$以多肽与氨基酸的含量及
出膏率为评价指标$采用单因素法对乙醇用量%渗漉
速度等因素进行考察( 试验中称取蜣螂药材粗粉适
量$加乙醇渗漉$收集漉液$回收乙醇$照 ] 项下方
法分别测定各指标( 对于渗漉溶剂用量$比较了加
入 ( 倍量%$ 倍量%+ 倍量 (g乙醇渗漉的效果$
结果加 $ 倍量 (g乙醇$多肽与氨基酸含量及出
膏率均较高!与 + 倍量接近$故确定加 $ 倍量)
对于渗漉速度$比较了 +$&$# 0F-0R2d-[Dd的
速度进行渗漉的效果$结果以 & 0F-0R2d-[Dd
的速度渗漉$多肽与氨基酸含量及出膏率均较高
!与 + 0F-0R2d-[Dd接近$故确定以 & 0F-
0R2
d
-[D
d速度渗漉$采用上述最佳条件对蜣螂渗
漉工艺进行验证$结果见表 (
表 !蜣螂渗漉工艺验证试验 g
批次 多肽 氨基酸 出膏率
)f##) $f#%( +(f%*
+ )f%#+ $f#& +(f($
) )f%)( $f#& +(f%+
结果最佳渗漉工艺条件为取蜣螂药材粉碎为粗
粉$用 ) 倍量的 (g乙醇浸泡 &( ?$加 (g乙醇 $
倍量$以 & 0F-0R2d-[Dd的渗漉速度渗漉$收集
漉液即可( ) 次验证试验结果表明$该提取条件稳
定可行$重复性好(
]&!浓缩工艺研究
本工艺考虑采用减压浓缩$以多肽%氨基酸的含
量为指标考察浓缩前后成分变化$照 ] 项下方法
分别测定$结果见表 +$同时对浓缩液进行理化表
征$结果见表 )(
表 +!蜣螂有效部位浓缩工艺考察 g
温度
=h
多肽质量分数 氨基酸质量分数
浓缩前 浓缩后 浓缩前 浓缩后
$ )f%$$ $f#&(
#$ )f%+$ )f#) $f# $f#)+
%$ )f+% $f%
表 )!蜣螂有效部位制备过程的信息传变
过程 黏度=GB-S 表面张力=0;-0d 电导率=0S-.0d
提取 $f$$ *# +&f**& k$f$++ $f)
浓缩 $f$$ %+ +&f()+ k$f$+ $f+#
分离 $f$$ % +f$&$ k$f$+) $f+(
纯化 $f$$ # +&f* k$f$+) $f$+
!!注#流体类别均为牛顿流体(
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结果表明$在 $$#$ h下$浓缩前后多肽与氨基
酸含量变化不大$而在 %$ h$指标成分含量有比较
明显的减少$考虑到在最大限度地保留有效成分的
同时$提高生产效率$选择浓缩温度为 $ j#$ h(
]Y!脱脂工艺考察
由于蜣螂含有大量的脂肪$将药液回收至无乙
醇后冷藏放置过夜$药液表面会凝固一层脂肪$影响
后续工艺的进行$由于脂肪部位无抗良性前列腺增
生症的药理活性$故考虑用冷藏法将其除去( 试验
中$对提取液的浓缩比例进行了考察$即取渗漉液 )
份$分别在 h将药液浓缩为 r$r+$r)!原药
材5提取液$静置$抽滤除去脂类成分( 取滤液与沉
淀测定多肽%氨基酸的含量及出膏率$结果见表 &$
同时对脱脂液进行理化表征$结果表明$浓缩比例为
r 时$多肽与氨基酸损失较少$同时又可基本除去
油脂$故选定浓缩比例为 r(
表 &!) 批样品质量分数测定 g
批次 氨基酸 多肽
#f&( #&f(
+ %f)* %+f(
) #f*# %$f+
]$!纯化工艺考察
通过前期药效物质基础研究$表明蜣螂的药效
组分主要为多肽等生物活性物质$但蜣螂作为动物
药$在产地常采用盐水烫制的方法进行加工$使得药
材中含有大量的无机盐$影响对其有效部位生物活
性的分析%药效物质基础的筛选%后续制剂的研究$
故有必要对其提取液进行脱盐( 文献*+5)+表明
I4+$5<大孔吸附树脂对于蛋白酶%多肽等化合物
具有脱盐效果好%活性组分保留率高的优点$因此本
研究直接采用其对蜣螂提取液的脱盐工艺进行研
究$并对大孔树脂吸附处理后的过柱液进行理化表
征$结果见表 +$&(
结果用 M\!树脂床体积$M\水即可将盐基
本除去$脱除率达到 *(f(g$用 %$g乙醇约 # M后$可以将大部分吸附的多肽洗脱下来$回收率达到
(%f)*g( 表明I4+$5<大孔吸附树脂对蜣螂提取
液中蛋白%多肽具有较好的吸附特性$能够从盐溶液
中将多肽类成分分离出来$以达到脱盐及纯化的
效果(
][!干燥工艺考察
浓缩工艺研究表明$在 $$#$ h下$浓缩前后多
肽与氨基酸含量变化不大$故干燥时采用减压干燥$
温度为 $ j#$ h(
]%!制备工艺小结
由表 ) 可知$药液纯化后仍为牛顿流体!2Q,@/5
2RB2 TVWRU$黏度和表面张力基本未变$而电导率显
著降低( 表明在整个制备过程中与有效物质多肽相
关的表面张力基本未变$而与无效物质盐密切相关
的电导率有了很大变化$降低约 *$g$表明该工艺
能最大限度地保留药物治病的有效物质$去除无效
物质$工艺稳定可行(
综合提取%分离%浓缩%纯化的考察结果$确定蜣
螂有效部位的制备工艺条件为#取蜣螂药材粉碎为
粗粉$用 ) 倍量的 (g乙醇浸泡 &( ?$加 (g乙醇
$ 倍量$以 & 0F-0R2d-[Dd的渗漉速度渗漉$收
集漉液$滤过$ 滤液在 $ j h浓缩至 r$冷藏除
脂后$通过I4+$5<大孔树脂柱$先后用 M\水与
& M\%$g乙醇为洗脱剂进行洗脱$分别收集洗脱
液( 水洗脱液浓缩$干燥$加 (g乙醇洗涤 + 次$取
洗液$与 %$g乙醇洗脱液合并$浓缩$干燥$即得(
&!讨论
前期研究发现$蜣螂中所含多肽为其治疗良性
前列腺增生症的主要物质基础$而多肽作为小分子
蛋白$具有较强的表面活性$可通过表面张力的变化
来推测体系中多肽的多寡$通过制备过程中各环节
的表征$发现与其实际含量一样基本未变$表明以表
面张力作为整个制备过程的评价指标具有较强的可
行性与可信度(
电导率能反映出体系中电解质的存在程度$体
系中电解质的浓度不同$则溶液导电的程度也不同$
可通过测定体系的电导率来分析电解质的多寡( 本
研究中$电导率在纯化后降低约 *$g$与实际盐含
量的降低数值基本一致$表明无效物质盐基本已被
除去$以电导率作为纯化评价指标准确可信(
本研究还对蜣螂有效部位制备各环节的液体体
系进行了流变学%粒径分布等方面的测定$结果整个
过程未见明显变化$可能与体系中的有效或无效物
质关系不密切所致$规律待寻(
总之$通过对提取液宏观理化性质的表征$结合
现代微观化学成分的指认$可以建立一种符合中医
药特色的中药质量评价体系和模式$达到对中药质
量基于微观之上的系统控制与过程控制$从而促进
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中医药的现代化和国际化(
$参考文献%
*+!柳扬$姚薇薇$郭立玮f4M5( 大孔树脂对黄连解毒汤不同药物
组合物理化学参数影响的初步研究*X+f化工时刊$+$$#$+$
!*#$f
*++!宫霞$赵骏f大孔吸附树脂对酪蛋白酶解液的脱盐作用研究
*X+f食品科学$+$$#$+%!#)$f
*)+!赵利$王璋$许时婴f大孔吸附树脂对酪蛋白非磷肽的脱盐和
色谱分离*X+f无锡轻工大学学报$+$$)$++!&##*f
LD>J,D,A-?@A>QB@?.?RC ?I>I>QA-O>ID,QA-?@?I7%#0%$1()22(
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$责任编辑!周驰%
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