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仙茅属植物７个国产种的 ＳＲＡＰ遗传关系研究
李隆云，陈大霞，秦松云，李泉森，钟国跃
（重庆市中药研究院，重庆 ４０００６５）
［摘要］ 目的：研究仙茅属植物７个国产种亲缘关系。方法：通过 ＳＲＡＰ分析，利用 ＴＲＥＥＣＯＮＷ软件分析遗
传距离，ＵＰＧＭＡ方法聚类，构建亲缘关系系统图。结果：２５对引物组合共得到９２３条扩增条带，其中有９１０条呈现
多态性，占９８６％。遗传距离０６３１～０９１２。聚类结果显示仙茅属植物７个国产种分类结果与传统形态分类结果
基本一致。结论：仙茅属植物７个国产种的多态性水平高，ＳＲＡＰ用于其分类是可行的。
［关键词］ 仙茅属；相关序列扩增多态性 （ＳＲＡＰ）；亲缘关系；分类
［中图分类号］Ｓ５６７ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０２０１１７０４
［收稿日期］ ２００６１００１
［通讯作者］ 李隆云，Ｔｅｌ：（０２３）８９０２９１１８，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｌｏｎｇｙｕｎ８
＠１６３．ｃｏｍ
石蒜科仙茅属 Ｃｕｒｃｕｌｉｇｏ在全世界约有 ２０余
种，我国已知有７种，主要分布在华南与西南［１］。该
属植物药用的主要有仙茅 Ｃ．ｏｒｃｈｉｏｉｄｅｓ和大叶仙茅
Ｃ．ｃａｐｉｔｕｌａｔａ２种。商品仙茅为仙茅属仙茅的干燥
根茎，为药典收载种，大叶仙茅目前只在民间应用，
仙茅属其余种很少药用。目前在该属植物的经典分
类中，首先根据植株的高大与矮小分为大叶仙茅组
Ｓｅｃｔ．Ｍｏｌｉｎｅｒｉａ与仙茅组 Ｓｅｃｔ．Ｃｕｒｃｕｌｉｇｏ，再依据植
物花序、花排列、子房顶端喙、叶子质地等外部形态
特征进一步分类，对其鉴定研究方面也大多局限于
植物的形态特征［２，３］，关于仙茅属植物７个国产种
分子生物学方面的研究目前尚未见报道。
相关序列扩增多态性（ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄａｍｐｌｉ
ｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＲＡＰ）是最近发展起来的新型分
子标记［４］。ＳＲＡＰ自诞生以来，便以其操作简便快
速、成本低、可信度高、易于测序等特点倍受分子生
物学家的青睐。在短短的几年时间内，此标记已在
多种植物中试验过，目前ＳＲＡＰ已在植物图谱构建、
遗传多样性评价、ＱＴＬ定位以及杂种优势预测等诸
多领域研究成功应用［４８］。本研究将 ＳＲＡＰ标记技
术用于仙茅属７个国产种植物亲缘关系的分析，为
仙茅属物种的合理分类和开发利用提供分子水平上
的依据。
１ 材料和方法
１．１ 材料 仙茅属植物７个国产种（表１）于２００２
年４月至２００３年１２月采自四川、重庆、云南、广西、
海南，种植于重庆市中药研究药用植物标本园。由
本院生药栽培室秦松云副研究员、李泉森副研究员
及成都中医药大学卫莹芳教授进行物种鉴定。在成
熟植株上选择当年萌发的幼嫩叶片，低温下带回实
验室，洗净晾干后，冻于 －８０℃超低温冰箱中保存
备用。
１．２ 仪器与试剂 ＥｐｐｅｎｄｏｒｆＭａｓｔｅｒｃｙｃｌｅｒｇｒａｄｉｅｎｔ
梯度ＰＣＲ仪（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ），ＳｍａｒｔＳｐｅｅＴＭ３０００型分光
光度计（ＢＩＯＲＡＤ公司），ＤＹＣＺ－２４Ｂ型电泳槽（北
京市六一仪器厂），ＤＹＹ－６Ｃ型电泳仪（北京市六一
仪器厂），ＣａｐｌｉｏＲ４数码相机（ＲＩＣＯＨ公司）。
ＳＲＡＰ正、反向引物（北京赛百盛基因有限公司合
成），Ｔａｑ酶（ＴａＫａＲａ），ｄＮＴＰｓ（ＴａＫａＲａ），ＤＬ２０００
ＤＮＡＭａｒｋｅｒ（ＴａＫａＲａ），ＣＴＡＢ（Ａｍｒｅｓｃｏ），ＰＶＰ（Ｓｉｇ
ｍａ），β疏基乙醇（Ｓｉｇｍａ），琼脂糖（进口分装），其余
均为国产分析纯试剂。
表１ 研究所用材料
Ｎｏ． 材料名称 组别 来源
１ 仙茅 Ｃｕｒｃｕｌｉｇｏｏｒｃｈｉｏｉｄｅｓ 仙茅 四川宜宾
２ 光叶仙茅 Ｃ．ｇｌａｂｒｅｓｃｅｎｓ 仙茅 海南保葶
３ 绒叶仙茅 Ｃ．ｃｒａｓｉｆｏｌｉａ 大叶仙茅 云南文山
４ 中华仙茅 Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ 大叶仙茅 云南金平
５ 短葶仙茅 Ｃ．ｂｒｅｖｉｓｃａｐａ 大叶仙茅 广西扶绥
６ 疏花仙茅 Ｃ．ｇｒａｃｉｌｉｓ 大叶仙茅 重庆南川
７ 大叶仙茅 Ｃ．ｃａｐｉｔｕｌａｔａ 大叶仙茅 重庆南山
１．３ 基因组ＤＮＡ的提取 每个种随机取５个个体
采用ＣＴＡＢ法提取基因组 ＤＮＡ，用分光光度计测定
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其浓度和纯度。将５个个体的基因组 ＤＮＡ等量混
合组成 “基因池”，质量浓度为４０ｎｇ·μＬ－１，用于
ＳＲＡＰ分析。
１．４ 仙茅属植物 ＳＲＡＰ反应体系优化试验设计
对影响仙茅属植物ＳＲＡＰ反应的主要因素Ｍｇ２＋（设
０５，１０，１５，２０，３０，４０ｍｍｏｌ·Ｌ－１６个梯度）、
ｄＮＴＰ（设５０，１００，１５０，２００，２５０，３００，４００μｍｏｌ·Ｌ－１
７个梯度）、模板（设５，１０，２０，４０，６０，８０，１２０，２４０ｎｇ
８个梯度）、引物（设 ０１，０２，０３，０４，０５，０６
μｍｏｌ·Ｌ－１６个梯度）进行单因子实验，每一个合适
条件确定后作为后续研究的一个条件。在单因子的
基础上，对 Ｍｇ２＋与酶进行二因子实验中：设置了
１０，１５，２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１共３个 Ｍｇ２＋梯度，每个梯
度对应０５，１０，２０Ｕ的酶用量，共９个处理。
１．５ ＳＲＡＰ分析 ＳＲＡＰ引物采用 Ｌｉ等［４］已发表
的引物。本研究所用引物序列见表２。ＳＲＡＰ反应
体系：总体积２５μＬ，内含１×ＰＣＲｂｕｆｅｒ，ＭｇＣｌ２２０
ｍｍｏｌ·Ｌ－１，ｄＮＴＰｓ２５０μｍｏｌ·Ｌ－１，引物各０２μｍｏｌ
·Ｌ－１，ＴａｑＤＮＡ聚合酶 １Ｕ，模板 ４０ｎｇ，不足部分
ｄｄＨ２Ｏ补足。一滴矿物油覆盖。
表２ ＳＲＡＰ引物
正向
引物
５′→３′
反向
引物
５′→３′
ＭＥ１ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＴＡ ＥＭ１ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＡＡＴ
ＭＥ２ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＧＣ ＥＭ２ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣ
ＭＥ３ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＴ ＥＭ３ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣ
ＭＥ４ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＣＣ ＥＭ４ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＧＡ
ＭＥ５ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＧ ＥＭ５ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＡＡＣ
扩增程序采用复性变温法，共４０个循环，即９４
℃预变性５ｍｉｎ；前５个循环：９４℃变性１ｍｉｎ，３５℃
复性１ｍｉｎ，７２℃延伸１５ｍｉｎ；后３５个循环：９４℃
变性１ｍｉｎ，５０℃复性１ｍｉｎ，７２℃延伸１５ｍｉｎ；循
环结束后７２℃延伸７ｍｉｎ，４℃保存。
产物的检测：取扩增产物５μＬ在６％的非变性
聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离，以０５×ＴＢＥ为缓冲
液，稳压１５０Ｖ，电泳至溴酚蓝距凝胶边缘１ｃｍ处结
束。采用稍做改进的汪家政等［９］的方法进行银染。
染色后，用数码相机照相、记录。
２ 结果与分析
２．１ 仙茅属植物 ＳＲＡＰ反应体系的建立 对影响
仙茅属植物ＳＲＡＰ反应的主要因素 Ｍｇ２＋，ｄＮＴＰ，模
板，引物进行单因子多水平实验，在 Ｍｇ２＋单因子的
基础上，对Ｍｇ２＋与酶进行二因子实验。结果表明：
Ｍｇ２＋在１５～４０ｍｍｏｌ·Ｌ－１变化不大，Ｍｇ２＋为１０
ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，大多条带量少且较弱，Ｍｇ２＋为 ０５
ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，几乎无产物；相同酶用量下，Ｍｇ２＋浓
度为１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１时的扩增弱于其他组合，Ｍｇ２＋
浓度２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１扩增产物条带数多于其他２种
Ｍｇ２＋浓度；相同Ｍｇ２＋浓度、不同的酶用量下可得到
谱带基本一致的图谱，但 Ｍｇ２＋浓度越大，扩增效率
越高，从以上Ｍｇ２＋浓度单因子试验结果及经济的角
度考虑，本实验认为 Ｔａｑ酶 １０Ｕ，Ｍｇ２＋浓度 ２０
ｍｍｏｌ·Ｌ－１的组合比较适宜。
ｄＮＴＰ浓度的变化对条带的强弱影响较大。
ｄＮＴＰ浓度为５０μｍｏｌ·Ｌ－１时，扩增较弱；ｄＮＴＰ浓
度在 １００～３００μｍｏｌ·Ｌ－１，带型基本一致，但随
ｄＮＴＰ浓度的增高，扩增片断的亮度增加，ｄＮＴＰ浓度
为２５０，３００μｍｏｌ·Ｌ－１时的条带最清晰；当 ｄＮＴＰ浓
度为４００μｍｏｌ·Ｌ－１时，扩增则减弱。综合考虑，本
实验选用了２５０μｍｏｌ·Ｌ－１的ｄＮＴＰ浓度。
引物为０１μｍｏｌ·Ｌ－１时，扩增产物少且极弱，
而引物在０２～０６μｍｏｌ·Ｌ－１，可以得到完全一致
的扩增结果。从降低实验成本考虑，选用了 ０２
μｍｏｌ·Ｌ－１的引物浓度。
在本研究中模板含量的许可范围较大，除模板
为５ｎｇ时，扩增相对较弱外，其余浓度的模板均可
得到相同的扩增结果。考虑到模板含量过高，又会
相应增加非特异性产物的扩增，本实验以４０ｎｇ作
为扩增中模板的用量。
通过以上单因子、双因子实验进行反应体系的
优化，建立了适合仙茅属植物 ＳＲＡＰ分析的反应体
系：２５μＬ体系中内含 １×ＰＣＲｂｕｆｅｒ，２０ｍｍｏｌ·
Ｌ－１Ｍｇ２＋，２５０μｍｏｌ·Ｌ－１ｄＮＴＰ，０２μｍｏｌ·Ｌ－１引
物，４０ｎｇ模板，１ＵＴａｑ酶。
２．２ 多态性标记的筛选 本研究所采用均可扩增
出清晰、呈现多态性的条带，图１为引物 ＭＥ５ＥＭ２
的电泳结果。各ＳＲＡＰ引物组合的扩增统计结果见
表３。２５对引物组合共得到９２３条扩增带，带数在
１６～４９不等，平均每对引物组合可得到３６９条带。
在这９２３条ＤＮＡ扩增条中，有９１０条带呈多态性，
占所观察到的总扩增带的９８６％，由此可见，仙茅
属植物７个国产种之间有着很高的多态性。
２．３ 遗传距离分析 采用 ＴＲＥＥＣＯＮＷ［１０］（Ｖｅｒｓｉｏｎ
１３）分析软件对所获数据进行遗传距离的计算，将
每个多态性谱带看作一个遗传位点，根据各分子标
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图１ 引物ＭＥ５ＥＭ２的电泳结果
Ｍｍａｋｅｒ；１仙茅；２光叶仙茅；３绒叶仙茅；４中华仙茅；
５短葶仙茅；６疏花仙茅；７大叶仙茅
表３ ２５个引物组合的扩增结果
引物组合 总带数
多态性
带数
引物组合 总带数
多态性
带数
ＭＥ１ＥＭ１ １６ １５ ＭＥ３ＥＭ４ ３３ ３３
ＭＥ１ＥＭ２ １７ １７ ＭＥ３ＥＭ５ ３４ ３４
ＭＥ１ＥＭ３ ３９ ３９ ＭＥ４ＥＭ１ ２８ ２７
ＭＥ１ＥＭ４ ４９ ４９ ＭＥ４ＥＭ２ ２８ ２８
ＭＥ１ＥＭ５ ４１ ４０ ＭＥ４ＥＭ３ ３２ ３２
ＭＥ２ＥＭ１ ３５ ３４ ＭＥ４ＥＭ４ ４５ ４２
ＭＥ２ＥＭ２ ３０ ２９ ＭＥ４ＥＭ５ ３３ ３２
ＭＥ２ＥＭ３ ３５ ３４ ＭＥ５ＥＭ１ ４２ ４２
ＭＥ２ＥＭ４ ２８ ２７ ＭＥ５ＥＭ２ ４９ ４８
ＭＥ２ＥＭ５ ４５ ４５ ＭＥ５ＥＭ３ ４５ ４４
ＭＥ３ＥＭ１ ４２ ４２ ＭＥ５ＥＭ４ ３７ ３７
ＭＥ３ＥＭ２ ４８ ４８ ＭＥ５ＥＭ５ ４９ ４９
ＭＥ３ＥＭ３ ４３ ４３
记的迁移率及其有无统计所有的二无数据，按条带
有或无赋值，有带记为１，无带记为０，强带和弱带的
赋值均为１，以此作为数据记录的标准。对于多态
性位点，仅在重复实验中能稳定出现的差异带用于
数据分析。结果表明，仙茅与大叶仙茅之间的遗传
距离最大，为０９１２，表明二者亲缘关系最远；中华
仙茅与疏花仙茅之间的遗传距离最小，为０６３１，表
明二者亲缘关系最近。仙茅组与大叶仙茅组之间遗
传距离差异大，如仙茅与大叶仙茅组５个种之间的
遗传距离平均为０８９６，光叶仙茅与大叶仙茅组 ５
个种之间的遗传距离平均为０８６０（表４）。
２．４ 聚类分析 仙茅属７个国产种聚类图见图２。
从图２中可以看出，利用 ＳＲＡＰ分子标记技术可以
将仙茅属植物７个国产种完全区别开，并且明显分
为２类：仙茅与光叶仙茅聚为一类（Ａ类）；其余５种
表４ 仙茅属植物７个国产种遗传距离距阵
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７
１ ００００
２ ０７３３ ００００
３ ０９００ ０８５７ ００００
４ ０８７７ ０８５０ ０７１６ ００００
５ ０８８１ ０８６２ ０７２４ ０７８２ ００００
６ ０９０８ ０８６６ ０７５０ ０６３１ ０７６６ ００００
７ ０９１２ ０８６７ ０７３１ ０７５６ ０６３７ ０６７３ ００００
仙茅属植物聚为一大类（Ｂ类）。在 Ｂ类中，中华仙
茅与疏花仙茅首先聚在一起，其余３个种短葶仙茅
与大叶仙茅聚在一起，绒叶仙茅为单独的一支。以
上聚类结果与传统形态学分类结果极为相似。Ａ类
与Ｂ类之间的分类最可靠，可信度达１００％，Ｂ类中
大叶仙茅与短葶仙茅、疏花仙茅与中华仙茅之间的
分类较可靠，可信度为９４％，绒叶仙茅与大叶仙茅
和短葶仙茅之间的分类可信度相对差些，为５２％。
图２ 仙茅属７个国产种聚类图
３ 讨论
本实验研究表明仙茅属植物７个国产种之间存
在着较大的遗传差异。在不同物种的 ＳＲＡＰ多态性
研究中，扩增带的多态性比例差异较大，如中国甘蓝
型油菜１３０个品种间为２４％［１１］，中国花生栽培种间
为５７１２％［１２］，甜瓜为 ７２７％［５］，野牛草 ９５％［１３］。
本研究中仙茅属植物７个国产种之间的多态性比率
为９８６％。扩增带的多态性表现不同可能与所研
究的材料之间遗传关系远近有关，有的采用遗传关
系相近的品种，有的采用不同种间的、多种倍性的、
遗传关系较远的不同种质资源。本研究使用的材料
为仙茅属的７个不同种，种间的差异较大，本研究从
分子水平上证实了这一点。
遗传关系聚类图显示：ＳＲＡＰ标记聚类结果与
仙茅属形态学分类极为吻合。在仙茅属植物的传统
分类中，主要根据植物花序、花排列、子房顶端喙、叶
子质地等形态特征将仙茅分为２个组，即仙茅组与
大叶仙茅组。仙茅组植物有仙茅与光叶仙茅２种，
该组植株较为矮小，其余５个种归入大叶仙茅组，植
株较为高大。在大叶仙茅组中，大叶仙茅与短葶仙
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茅、疏花仙茅与中华仙茅分别聚为一类，二者再与单
独聚为一支的绒叶仙茅聚在一起［１］。在本研究聚
类结果中仙茅组的仙茅与光叶仙茅聚为一支（Ａ
类），大叶仙茅组的５个种聚为一支（Ｂ类），这与传
统分类完全吻合；在 Ｂ类中，大叶仙茅与短葶仙茅
聚为一类，疏花仙茅与中华仙茅聚为一类，与传统分
类也是完全吻合的，不同之处仅是大叶仙茅组中５
个种的聚类先后略有差异。以上结果说明 ＳＲＡＰ标
记聚类结果与它们之间的形态差异是相关的，传统
经典分类将仙茅分为仙茅组与大叶仙茅组是有其科
学依据的，同时也证实 ＳＲＡＰ标记技术由于使用较
高的退火温度和较长的引物，不但保证了扩增的稳
定性，而且由于该标记可检测基因的可译框区域，检
测的结果更能反映物种的遗传多样性和亲缘关系，
因此用于仙茅属物种的分类和遗传亲缘关系研究是
可行的。此外，ＳＲＡＰ引物具有通用性，其正向引物
可以与反向引物两两搭配组合，因此用少量的引物
可组配得到多个引物对，提高了引物的使用效率，降
低引物合成成本，是一种经济、有效的分子标记。
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ＬＩＬｏｎｇｙｕｎ，ＣＨＥＮＤａｘｉａ，ＱＩＮＳｏｎｇｙｕｎ，ＬＩＱｕａｎｓｅｎ，ＺＨＯＮＧＧｕｏｙｕｅ
（ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００６５，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆｓｅｖｅｎｓｐｅｃｉｅｓｏｆＣｕｒｃｕｌｉｇｏｐｌａｎｔｆｒｏｍＣｈｉｎａ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｒｏｕｇｈｓｅ
ｑｕｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＲＡＰ）ａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅｂｙＴＲＥＥＣＯＮＷｓｏｆｔｗａｒｅａｎｄｔｏｍａｋｅｕｐｔｈｅ
ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｄｉａｇｒａｍｏｆｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｙＵＰＧＭＡｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ａｔｏｔａｌｏｆ９２３ＳＲＡＰｍａｒｋｅｒｓｗｅｒｅｓｃｏｒｅｄ，ａｍｏｎｇｗｈｉｃｈ９１０
ｗｅｒｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｂａｎｄｗａｓ９８６％．Ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅｗｅｒｅｃｈａｎｇｅｄｆｒｏｍ０６３１ｔｏ０９１２．Ｂｙ
ｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｒｅｓｕｌｔｏｆＳＲＡＰｍａｒｋｅｒｂｅｔｗｅｅｎｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｏｄａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｎｓｅｖｅｎｓｐｅｃｉｅｓｏｆＣｕｒｃｕｌｉｇｏｐｌａｎｔｆｒｏｍＣｈｉ
ｎａｉｓａｌｍｏｓｔｓａｍｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎｓｅｖｅｎｓｐｅｃｉｅｓｏｆＣｕｒｃｕｌｉｇｏｐｌａｎｔｆｒｏｍＣｈｉｎａｉｓｈｉｇｈ，ｓｈｏｗｉｎｇｆｅａｓｉ
ｂｉｌｉｔｙｆｏｒＳＲＡＰｍａｒｋｅｒｉｎａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｕｒｃｕｌｉｇｏ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｃｕｒｃｕｌｉｇｏ；ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＲＡＰ）；ｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ
［责任编辑 张宁宁］
·０２１·
第３３卷第２期
２００８年１月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ２
Ｊａｎｕａｒｙ，２００８