全 文 ：高速逆流色谱结合大孔树脂从龙胆中
快速分离高纯度龙胆苦苷
许有威 o齐 艳 o韩 旭 o许丽娜 o徐奇玮 o彭金咏 3
k大连医科大学 药学院 o大连 ttysuzl
≈摘要   目的 }建立龙胆中高纯度龙胆苦苷的快速分离制备方法 ∀方法 }药材醇提取液经 ⁄tst大孔吸附树脂
柱的层析物直接进行高速逆流色谱 k«¬ª«2¶³¨ §¨¦²∏±·¨µ2¦∏µµ¨±·¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼o‹ ≥≤≤≤ l分离纯化 o以醋酸乙酯 2正丁
醇 2水 kuΒtΒvl为溶剂系统 o下相为流动相 o流速 t1x °# °¬±pt o检测波长 uxw ±°o分离温度 vs ε o所得产物经高效
液相色谱与质谱分析检测 o并与标准品对照 ∀结果 }在此条件下 o经一步分离从 vss °ª粗提物中得到 tvy °ª纯度
为 ||1yh的龙胆苦苷 ∀结论 }该法简便 !快速 !所得产物纯度高 o适合于龙胆苦苷标准品的制备 ∀
≈关键词   龙胆 ~高速逆流色谱 ~大孔树脂 ~龙胆苦苷
≈中图分类号   • u{wqt ≈文献标识码   „ ≈文章编号  tsst2xvsukusszluw2ux|x2sv
≈收稿日期   ussz2sv2sz
≈通讯作者   3 彭金咏 oר¯}kswttl{wzusszyo∞2°¤¬¯}­¬±¼²±ª2
³¨ ±ªussxƒ tyvq¦²°
龙胆为龙胆科植物龙胆 Γεντιανα σχαβρα …ª¨ q!
条叶龙胆 Γ. µ ανσηυριχα Ž¬·¤ªq!三花龙胆 Γ. τριφλορα
°¤¯tq!坚龙胆 Γ. ριγεσχεν󃵤±¦«q的干燥根及根茎 o
性寒 !味苦 ~归肝 !胆经 ~具有清热燥湿 !泻肝胆火的
功效 ≈t  ∀近年来用于健胃 !抗肿瘤 !治疗急慢性肝
炎 !乙型脑炎等疾病亦取得良好疗效 ≈u  ∀龙胆中主
要的化学成分是裂环烯醚萜类化合物 o如龙胆苦苷
kª¨ ±·¬²³¬¦µ¬±l!獐牙菜苦苷 k¶º µ¨·¬¤°¤µ¬±l!獐牙菜苷
k¶º µ¨²¶¬§¨ l等 o其中龙胆苦苷是龙胆的主要有效成
分 ∀目前分离制备龙胆苦苷多采用传统硅胶柱色谱
法或聚酰胺柱色谱法 ≈v  o这些方法不仅费时费力 !
污染环境 o而且所用固定相对样品有不可逆性吸附
作用 ∀高速逆流色谱 k‹≥≤≤≤ l是一种较新型的液
液分配色谱技术 o它不用任何固体支撑体或载体而
克服了传统分离方法对样品的不可逆性吸附作用 o
因而样品回收率高 o同时还具有应用范围广 !仪器操
作简单 !分离量大等优点 ≈wox  ∀本研究中采用溶剂
提取和大孔树脂柱色谱得到粗提物 o以此粗提物直
接进行 ‹≥≤≤≤分离纯化 o经一步洗脱分离得到纯度
高于 ||h的龙胆苦苷 o该法操作简单 !快速 !产物纯
度高 ∀目前 o尚未见快速 !简便制备高纯度龙胆苦苷
的报道 ∀
1 仪器与材料
ׅ∞ pvss„高速逆流色谱仪 k上海同田生物技
术有限公司 lo配有聚四氟乙烯管 k°×ƒ∞l分离柱
k内径 t1y °°o分离柱体积 uyy °l!≥tssz„型恒
流泵 !{{uv„˜∂检测器 k北京宾达英创科技有限公
司 l!‘usss色谱工作站 k浙江大学智达信息工程有
限公司 l∀ „ª¬¯¨ ±·tuss高效液相色谱系统 o包括
Štvtt„四元泵 !Štvtw…∂ • ⁄检测器 !Štvu|„自动
进样器 !Štvuu„在线脱气机 !„ª¬¯¨ ±·≤系统化学
工作站 o„°Œvsus质谱仪甲醇为色谱纯 k×∞⁄Œ„公
司 lo水为自制重蒸馏水 o其余试剂均为分析纯 o
⁄tst大孔树脂 k天津农药厂 l∀龙胆苦苷对照品
k中国药品生物制品检定所 o批号 ttszzs2ussyttl~
龙胆购自大连大仁堂药店 o经辽宁中医药大学药学
院李峰教授鉴定为 Γ1 σχαβρα的干燥根 ∀
2 提取分离
2q1 高效液相色谱分析条件
¬¦«µ²¶³«¨ µ≤t{色谱柱 kw1y °° ≅ txs °°ox
Λ°l大连中汇达有限公司 o流动相甲醇 2s1xh冰醋
酸 kuxΒzxlo流速 t1s °# °¬±pt o检测波长 uvs ±°o
柱温为室温 o进样量 ts ˏ∀在此条件下龙胆粗提
物色谱图见图 t∀
2q2 龙胆粗提物制备
称取龙胆药材 xss ªo加 w sss °ysh乙醇加
热回流提取 u次 o每次 t1x «o滤过 o合并滤液减压浓
缩至无醇味 ∀将浓缩液通过 ⁄tst大孔树脂柱 kws

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第 vu卷第 uw期
ussz年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz
图 t 龙胆粗提物 k„l和 ‹ ≥≤≤≤分离流份
´ k…l的 ‹ °≤图
tq龙胆苦苷
°° ≅ wxs °°lo依次用水 otsh oush ovsh owsh乙
醇各 xss °洗脱 o分段收集洗脱液 o每 tss °为 t
份 o共收集 ux份 ∀最后 o用 |xh乙醇 xss °洗脱 o
再生树脂柱 ∀
采用建立的 ‹°≤分析方法测定每份洗脱液中
龙胆苦苷的含量 o绘制相应的洗脱曲线见图 u∀根
据洗脱曲线 o合并含量高于 ysh的第 y ∗ tv份洗脱
液 o减压浓缩后真空干燥得红棕色粉末 |1ss ªo置干
燥器中保存 o备用 ∀精密称取 vss °ª进行 ‹≥≤≤≤
分离制备 ∀
图 u 龙胆苦苷在 ⁄tst大孔树脂上的洗脱曲线图
2q3 高速逆流色谱分离制备
在 ‹≥≤≤≤分离过程中 o最关键在于选择合适
的两相溶剂系统 o要通常注意以下几个方面的问
题 ≈y  }≠不造成样品的分解或变性 ~ 足够高的样
品溶解度 ~≈ 样品在溶剂系统中合适的分配系数
值 ~…固定相能实现足够高的保留 ∀后两点对高
速逆流色谱仪显得特别重要 o需要经过测定或实
验判断 ∀样品成分在溶剂系统中的分配系数和管
柱中固定相的保留值均会影响分离效果 ∀一般情
况下 o调整固定相达保留值在 xsh以上 o分配系数
s1x ∗ u能得到最满意的分离效果 ∀本研究中 o根
据所分离化合物特性 o考察了醋酸乙酯 2正丁醇 2水
kwΒtΒxouΒtΒvotΒtΒuotΒuΒvl和正丁醇 2水 ktΒtl
等不同溶剂系统中龙胆苦苷的分配情况 o并根据
文 献 ≈z  来 计 算 分 配 系 数 o 即 分 配 系 数
Κ € Α∏³³¨ µrΑ¯²º µ¨o结果见表 t∀
表 t 不同溶剂系统中龙胆苦苷的分配系数
溶液系统 k∂ r∂ l 分配系数
醋酸乙酯 2正丁醇 2水 k wΒtΒxl s1s|
醋酸乙酯 2正丁醇 2水 k uΒtΒvl s1vv
正丁醇 2水 k tΒtl s1xz
醋酸乙酯 2正丁醇 2水 ktΒtΒul s1x{
醋酸乙酯 2正丁醇 2水 k tΒuΒv s1yu
由表 t可知溶剂系统醋酸乙酯 2正丁醇 2水在 tΒt
Βu和 tΒuΒv及正丁醇 2水 ktΒtl中 o龙胆苦苷具有较合
适的分配系数 o但其固定相保留值均低于 ush o而醋
酸乙酯 2正丁醇 2水 kwΒtΒxl这一体系中 o龙胆苦苷的
分配系数太小 o无法分离 o由此选择醋酸乙酯 2正丁醇 2
水 kuΒtΒvl为分离龙胆苦苷的两相溶剂系统 ∀
在分液漏斗中配制醋酸乙酯 2正丁醇 2水 kuΒtΒ
vl两相溶剂系统 o充分振摇后静止 o使用前分取上
下相 o超声脱气后泵入逆流色谱仪 ∀先将 ‹≥≤≤≤分
离管中充满上相 o调整主机转速为 {ss µ# °¬±pt o再
以 t1x °# °¬±pt流速泵入下相 o待流动相从柱出
口流出 o表明两相在分离管中建立了动态平衡 o由进
样阀进样 o流出液用紫外检测器在 uxw ±°处进行检
测 o同时记录色谱图 o逆流色谱图见图 vo根据色谱
图接收流分 Œ∀
图 v 龙胆粗提物 ‹ ≥≤≤≤图
Œq接受流分
3 分离所得产物的结构鉴定及纯度分析
流分 Œ减压回收溶剂后真空干燥得白色粉末 tvy
°ªo取少量粉末用甲醇溶解后进行 ‹°≤和 ∞≥Œ2 ≥分
析 o并与标准品对照 o结果表明流分 Œ为龙胆苦苷 o同时
采用 ‹°≤外标法测定流分 Œ纯度为 ||1yh ∀
4 讨论
本实验采用大孔树脂柱色谱与高速逆流色谱法
结合 o从龙胆中直接分离得到纯度高于 ||h的龙胆
苦苷 o简便 !快速 ∀在逆流色谱分离过程中 o进样量
为 vss °ªo分离得到的龙胆苦苷总量为 tvy °ªo其
余部分主要是最易溶于流动相和固定相的化合物 o
分别为最早出峰 k第 t个平头峰 l和最迟出峰 k保留
在固定相中 lo除此之外还有部分没有吸收的化合
物 o这样就将龙胆苦苷与杂质分开 o达到快速分离 !
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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纯化的目的 ∀
≈参考文献  
≈t  中国药典 ≈≥ q一部 qussx}ywq
≈u  杨树彬 o王 承 q龙胆化学成分和药理作用研究进展 ≈ q中医
药学报 oussxovvkyl}xwq
≈v  罗集鹏 o楼之岑 q中药龙胆中龙胆苦苷 !獐牙菜苦苷和当药苷
的分离与鉴定 ≈ q中草药 ot|{yotzkwl}tq
≈w  • ¤±ª÷o • ¤±ª≠ ± o Š ±¨ª≠ o ·¨¤¯qŒ¶²¯¤·¬²± ±¨§³∏µ¬©¬¦¤·¬²± ²©
«²±²®¬²¯ ¤±§°¤ª±²¯²¯ ©µ²° ¦²µ·¨¬ ²ª±²¯¬¤¨ ’©©¬¦¬±¤¯¬¶¥¼«¬ª«2¶³¨ §¨
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≈y  张天佑 q逆流色谱技术 ≈   q北京 }北京科学技术出版社 o
t||t}uzwq
≈z   ¤±§¤√¤‘…o Œ·² ≠ 1 ≤²∏±·¨µ¦∏µµ¨±·¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼o ·«¨ ²µ¼ ¤±§
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Πρεπαρατιϖε σεπαρατιον οφ Γ εντιοπιχριν φροµ Ρ αδιξ Γ εντιαναε βψ ηιγη2σπεεδ
χουντερ2χυρρεντ χηροµ ατογραπηψ ωιτη µ αχροπορουσρεσιν
÷˜ ≠ ²∏2º ¬¨o ± Œ≠ ¤±o ‹ „‘÷∏o ÷ ˜ ¬2±¤o ÷ ˜ ±¬2º ¬¨o ° ±¨ª­¬±2¼²±ª
(Χολλεγε οφ Πηαρµ αχψ, ∆αλιαν ΜεδιχαλΥνιϖερσιτψ, ∆αλιαν ttysuz, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨ √¨¯²³¤° ·¨«²§©²µ·«¨ ³µ¨³¤µ¤·¬√¨¶¨³¤µ¤·¬²± ²©ª¨ ±·¬²³¬¦µ¬± ©µ²° Ραδιξ Γεντιαναε ¥¼ «¬ª«2¶³¨ §¨
¦²∏±·¨µ2¦∏µµ¨±·¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ k‹ ≥≤≤≤lq Μετηοδ : ׫¨ ¦µ∏§¨ ¤¯¦²«²¯ ¬¨·µ¤¦·¶º µ¨¨ ¨¯∏·¨§²± ¤°¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬± ¦²¯∏°± ¤±§·«¨ ±
³∏µ¬©¬¨§¥¼ «¬ª«¶³¨ §¨¦²∏±·¨µ2¦∏µµ¨±·¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ k‹ ≥≤≤≤ lq „ ·º²2³«¤¶¨ ¶²¯√ ±¨·¶¼¶·¨° ¦²°³²¶¨§²© ·¨«¼¯ ¤¦¨·¤·¨Β±2¥∏·¤±²¯ Β
º¤·¨µkuΒtΒvl º¤¶∏¶¨§o ¤±§·«¨ ²¯º µ¨³«¤¶¨ º¤¶∏¶¨§¤¶·«¨ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ¤·¤©¯²º µ¤·¨ ²©tqx °# °¬±pt o º«¬¯¨ ·«¨ ¤³³¤µ¤·∏¶µ²2
·¤·¨§¤·{ss µ# °¬±pt ¤±§·«¨ ¨¯∏¤·¨º¤¶§¨ ·¨¦·¨§¤·uxw ±°q Ρ εσυλτ: tvy °ªª¨ ±·¬²³¬¦µ¬± º¬·«³∏µ¬·¼ ²©||qyh §¨ ·¨µ°¬± §¨¥¼ ‹°≤
º µ¨¨ ²¥·¤¬± §¨©µ²° vss °ª¦µ∏§¨ ¬¨·µ¤¦·¬²± ²± ¼¯ ¬± ²± 2¨¶·¨³¶¨³¤µ¤·¬²± ¤±§¯¨¶¶·«¤± uss °¬±∏·¨¶q Χονχλυσιον: ׫¨ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §° ·¨«2
²§¬¶¶¬°³¯ o¨ «¬ª« ©¨©¬¦¬¨±¦¼ ¤±§¶∏¬·¤¥¯¨©²µ ¤¯µª¨ 2¶¦¤¯¨¶¨³¤µ¤·¬²± ²©ª¨ ±·¬²³¬¦µ¬±q
[ Κεψ ωορδσ] • ¤§¬¬Š ±¨·¬¤±¤¨ ~ «¬ª«2¶³¨ §¨¦²∏±·¨µ2¦∏µµ¨±·¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼~ °¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬±~ ª¨ ±·¬²³¬¦µ¬±
≈责任编辑 鲍 雷  
≈收稿日期   ussz2sy2st
≈基金项目   河北省科技公关计划项目 ksyuzyt|xyl
≈通讯作者   3 蒋晔 oר¯}ksvttl{yuyysy|o∞2°¤¬¯}­¬¤±ª¼¨ ƒ «¨ ¥°∏q §¨∏q¦±
• °2 ‹°≤快速测定清胃黄连片中
w种指标成分的含量
李艳荣 o蒋 晔 3 o郝 福 o丁翔宇
k河北医科大学 药学院 o河北 石家庄 sxsstzl
≈摘要   目的 }建立 • °2‹ °≤测定清胃黄连片中栀子苷 !黄芩苷 !盐酸小檗碱和甘草酸铵 w种指标成分含量
的方法 ∀方法 }采用 ‹ ¼³¨ µ¶¬¯ ≤t{色谱柱 kw1y °° ≅ uxs °°ox1s Λ°l~流动相为乙腈 2s1xh 三乙胺水溶液 k磷酸调
³‹ v1sl采用梯度洗脱 o检测波长 uvs ±°~流速 t1s °# °¬±pt ∀结果 }栀子苷 !黄芩苷 !盐酸小檗碱和甘草酸铵的线
性范围分别为 }w1{u ∗ zz1uox1{s ∗ |u1{ot1yv ∗ uy1t oy1ws ∗ tsu Λª# °pt ks1||| z  ρ s1||| |lo平均回收率均
#z|xu#
第 vu卷第 uw期
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ uw
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