全 文 ：Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｎｅ，ｓｏｐｈｏｒｉｄｉｎｅａｎｄｏｘｙｍａｔｒｉｎｅｉｎ
ｃｏｍｐｏｕｎｄＫｕｓｈｅｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎｂｙＨＰＬＣ
ＴＩＡＮＪｕａｎ１，２，ＷＡＮＧＷｅｉｈａｏ１，ＧＡＯＨｕｉｍｉｎ１，ＷＡＮＧＺｈｉｍｉｎ１
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＳｃｉＴｅｃｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｎｅ，
ｓｏｐｈｏｒｉｄｉｎｅａｎｄｏｘｙｍａｔｒｉｎｅｉｎＣｏｍｐｏｕｎｄＫｕｓｈｅｎＩｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａｌｔｉｍａａｍｉｎｏｃｏｌｕｍｎｗａｓｕｓｅｄｗｉｔｈａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ３％ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ
ａｃｉｄｅｔｈｙｌａｌｃｏｈｏｌ（８０∶１０∶１０）ａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓａｔ２２０ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｍｅａｎｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆｍａ
ｔｒｉｎｅ，ｓｏｐｈｏｒｉｄｉｎｅａｎｄｏｘｙｍａｔｒｉｎｅｉｎＣｏｍｐｏｕｎｄＫｕｓｈｅｎＩｎｊｅｃｔｉｏｎｗａｓ９９５１％ （ＲＳＤ１５８％），９９２４％ （ＲＳＤ１４４％）ａｎｄ
１００２２％ （ＲＳＤ１８５％），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｑｕａｌｉｔｙ
ｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＨＰＬＣ；ｃｏｍｐｏｕｎｄＫｕｓｈｅｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｍａｔｒｉｎｅ；ｓｏｐｈｏｒｉｄｉｎｅ；ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ
［责任编辑 鲍 雷］
蟾皮和华蟾素注射液中蟾蜍噻咛含量测定
代丽萍１，王智民２，高慧敏２，姜 旭２，丁广治２
（１．河南中医学院，河南 郑州 ４５０００８；
２．中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：建立蟾皮中蟾蜍噻咛的含量测定方法，比较不同产地及养殖方式对蟾皮中蟾蜍噻咛含量的影
响。方法：采用高效液相色谱法测定了不同产地蟾皮中蟾蜍噻咛的含量，色谱柱ＬｉｃｈｒｏｓｏｂＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ），流动相乙腈水（１０∶９０），检测波长２２５ｎｍ，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１。结果：回归方程为Ｙ＝７４８９×１０４＋２７９１×
１０５Ｘ，ｒ＝０９９９９，平均回收率为９９２％，蟾皮中蟾蜍噻咛的质量分数在３６４～６４１８μｇ·ｇ－１，华蟾素注射液中的
质量分数在２２４７～３３１６μｇ·ｍＬ－１。结论：蟾皮中蟾蜍噻咛在野生和养殖品种中的差异较大。该方法快速简便，
重复性良好，可用于蟾皮和华蟾素注射液中蟾蜍噻咛的含量测定。
［关键词］ 蟾皮；华蟾素注射液；蟾蜍噻咛；高效液相色谱法
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）０３０２２４０３
［收稿日期］ ２００５１１２０
［通讯作者］ 王智民，Ｔｅｌ：（０１０）８４０１４１２８，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｍｗ１２３
＠２６３．ｎｅｔ
蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Ｂｕｆｏｂｕｆｏｇａｒｇａ
ｒｉｚａｎｓＣａｎｔｏｒ的干燥皮，具有清热解毒、利水消胀之
功效［１］，蟾皮水溶性部位主要含有蟾蜍噻咛、Ｎ苯
基乙萘胺、氨基酸类化合物［２５］，其中蟾蜍噻咛是其
主要成分，而且体外抗肿瘤试验表明蟾蜍噻咛肿瘤
抑制率为８７０６％。以其水溶性成分开发的药品已
有多个上市，临床应用表明华蟾素注射液具有确切
的抗肿瘤疗效，而其药材和成品没有合适的有效成
分定量指标，难以控制制剂的质量。鉴于有关蟾蜍
噻咛的含量测定方法尚未见报道，作者拟采用高效
液相色谱法建立蟾蜍噻咛的含量测定方法，并对８
个产地的蟾皮药材中蟾蜍噻咛含量进行测定。实验
结果表明该法分离度好、精密度、重复性均满足要
求，可作为蟾皮药材和华蟾素注射液的质量控制方
法。
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第３２卷第３期
２００７年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ ３
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００７
１ 仪器与试药
Ｗａｔｅｒｓ９９６高效液相色谱仪；ＬＡ－２０４电子天
平，乙腈为色谱纯，水为纯净水（自制），其余试剂均
为分析纯。蟾皮药材北京、安徽、浙江、江苏四地为
市售，余为野生，样品经中国中医科学院中药研究所
生药室何希荣主管药师鉴定；蟾蜍噻咛对照品（实
验室自制，经 ＩＲ，１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ，ＦＡＢＭＳ鉴定
结构，ＨＰＬＣ归一化法纯度为９９３％）。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＬｉｃｈｒｏｓｏｂＣ１８色谱柱，（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ），检测波长２２５ｎｍ；流动相乙腈水
（１０∶９０）；流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１。在选定的色谱条件
下，蟾蜍噻咛分离度良好，如图１。
图１ 蟾皮药材及注射液ＨＰＬＣ图
Ａ．对照品；Ｂ．药材；Ｃ．华蟾素注射液；１．蟾蜍噻咛
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取蟾蜍噻咛对照
品１９４ｍｇ，５０％甲醇超声溶解，定容至 １０ｍＬ量
瓶，得０１９４ｍｇ·ｍＬ－１对照品溶液备用。
２．３ 供试品溶液的制备 取蟾皮药材粉末（８０℃干
燥，过６０目筛）１０ｇ，精密称定，置１００ｍＬ具塞磨口
锥形瓶中，精密加入５０％乙醇３０ｍＬ，称重，超声提取
１ｈ，补足重量，精密吸取２０ｍＬ，置于蒸发皿中，水浴
蒸干，放冷，残渣加甲醇溶解，定容于５ｍＬ量瓶中，摇
匀，备用。０４５μｍ微孔滤膜滤过进样分析。
２．４ 线性关系考察 精密吸取蟾蜍噻咛对照品储备
溶液１ｍＬ置于５ｍＬ的量瓶中，用５０％乙醇稀释至刻
度，依次吸取２，４，６，１０，１２μＬ进行液相分析，以进样
量为横坐标Ｘ，对照品峰面积为纵坐标Ｙ，得回归方程
为Ｙ＝７４８９×１０４＋２７９１×１０５Ｘ，ｒ＝０９９９９，线性范
围００７７２～０４６３２μｇ。
２．５ 精密度试验 精密吸取样品溶液，重复进样５
次，结果峰面积ＲＳＤ０７４％。
２．６ 稳定性试验 精密吸取上述样品溶液，分别在
０，３，６，９，１２ｈ各测定一次，其 ＲＳＤ为１８０％，表明
处理后的样品溶液在１２ｈ内稳定。
２．７ 重复性试验 精密称取蟾皮药材共５份，照
２．２方法制备供试品溶液，测定峰面积，其平均质量
分数为４１５１９μｇ·ｇ－１，ＲＳＤ１０４％。
２．８ 加样回收率 取上述已知含量的蟾皮药材共
５份，每份０５ｇ，分别精密加入与其所含蟾蜍噻咛
相当的对照品，照２．２项样品制备方法制备供试品
溶液，进样１０μＬ，计算加样回收率，结果见表１。
表１ 蟾蜍噻咛加样回收率
称样量
／ｇ
加入量
／μｇ
测得量
／μｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
０５０００ ２３０ ４４７９ １０３０
０５００１ ２４０ ４５２４ １００６
０５００２ ２４０ ４５１０ １０００ ９９２ ３０
０５００１ ２３０ ４３２３ ９６２
０５００２ ２２０ ４２２４ ９６１
注：样品中含量均为２１１μｇ
２．９ 样品测定 取不同产地的蟾皮药材约１ｇ，精
密称定，按２．２项样品制备方法制备供试品溶液，进
样分析；注射液用微孔滤膜过滤后直接进样。外标
两点法计算含量，结果见表２，３。
表２ 药材中蟾蜍噻咛质量分数
产地 药材来源 蟾蜍噻咛／μｇ·ｇ－１
安徽 饲养 ４４４７
浙江 饲养 ３２９３
北京 饲养 ３６４
河南商丘 饲养 ６４１８
江苏 饲养 １８６６
广东珠海 野生 －
山西长治 野生 －
陕西咸阳 野生 －
表３ 华蟾素注射液中蟾蜍噻咛质量浓度
批号 蟾蜍噻咛／μｇ·ｍＬ－１ 批号 蟾蜍噻咛／μｇ·ｍＬ－１
０１０２０１ ２５８２ ０２０２０２ ３０８７
０１０２０２ ２７４７ ０２０２０３ ３２９６
０１０４０１ ２７１８ ０２０６１９ ２６１５
０１０４０２ ２２４７ ０２０７０１ ３２２０
０２０２０１ ２６２２ ０２０７０２ ３３１６
３ 讨论
３．１ 流动相的选择 先后试过不同比例的甲醇
水、乙腈水、甲醇乙腈水为流动相进行了测定，结
果表明乙腈的洗脱效果优于甲醇，峰形较好。
３．２ 供试品的制备 蟾蜍噻咛在５０％的乙醇中溶
解性良好，考虑到其热稳定性较差的特点，在提取中
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第３２卷第３期
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Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００７
选用５０％的乙醇为提取溶剂，并辅以超声波助溶，
经过优选确定了生药中蟾蜍噻咛的提取方法。结果
表明部分产地蟾皮中蟾蜍噻咛的含量较低，如不浓
缩直接进样测定，其峰形较差，故测定时对供试液进
行了浓缩处理。
３．３ 不同产地养殖的蟾皮中蟾蜍噻咛的质量分数
在３６４～６４１８μｇ·ｇ－１，含量差别很大；华蟾素注
射液的主要成分为蟾蜍噻咛。本实验首次建立了蟾
皮药材和华蟾素注射液的 ＨＰＬＣ含量测定方法，为
临床用药和生产提供了科学依据；而野生中华大蟾
蜍皮用本法进行测定，无法检测到蟾蜍噻咛成分，因
此该方法也可为饲养品和野生品的鉴别提供帮助。
［参考文献］
［１］ 江苏新医学院．中药大辞典［Ｍ］．下册．上海：上海人民出版
社，１９７７：２７１３．
［２］ 金向群．蟾蜍化学及药理研究进展［Ｊ］．中草药，１９９６，２７（４）：
２４６．
［３］ 杨立宏，张豁中，张 冰．中华大蟾蜍皮化学成分的研究［Ｊ］．
药学学报，１９９２，２７（９）：６７９．
［４］ 杨立宏，金向群，张 薇．中华大蟾蜍皮化学成分的研究［Ｊ］．
沈阳药科大学学报，２０００，１７（４）：２９２．
［５］ 金向群，张豁中，张海霞．中华大蟾蜍皮化学成分的研究［Ｊ］．
中草药，１９９２，（３）：１１７．
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｂｕｆｏｔｈｉｏｎｉｎｅｉｎＳｋｉｎｏｆＢｕｆｏｂｕｆｏｇａｒｇａｒｉｚａｎｓ
ａｎｄＨｕａｃｈａｎｓｕｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
ＤＡＩＬｉｐｉｎｇ１，ＷＡＮＧＺｈｉｍｉｎ２，ＧＡＯＨｕｉｍｉｎ２，ＪＩＡＮＧＸｕ２，ＤＩＮＧＧｕａｎｇｚｈｉ２
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｂｕｆｏｔｈｉｏｎｉｎｅｉｎｔｈｅｓｋｉｎｏｆＢｕｆｏｂｕｆｏｇａｒｇａｒｉｚａｎｓａｎｄＨｕａｃｈａｎｓｕｉｎｊｅｃ
ｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｕｓｉｎｇａＬｉｃｈｒｏｓｏｂＣ１８ｃｏｌｕｍｎｗｉｔｈＣＨ３ＣＮＨ２Ｏ（１０∶９０）ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ．Ｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ
ａｔ１０ｍＬ·ｍｉｎ－１ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓａｔ２２５ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｏｆｂｕｆｏｔｈｉｏｎｉｎｅｗａｓｌｉｎｅａｒｏｖｅｒｔｈｅｒａｎｇｅ
ｏｆ００７７２０４６３２μｇａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９９２％．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｂｕｆｏｔｈｉｏｎｉｎｅｗｅｒｅｆｌｕｃｔｕａｔｅｄｆｒｏｍ３６４６４１８μｇ·ｇ－１
ｉｎｔｈｅｓｋｉｎｏｆＢｕｆｏｂｕｆｏｇａｒｇａｒｉｚａｎｓａｎｄ２２４７３３１６μｇ·ｍＬ－１ｉｎＨｕａｃｈａｎｓｕｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ
ｂｕｆｏｔｈｉｏｎｉｎｅｗｅｒｅｇｒｅａｔｌｙｄｉｆｅｒｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎｃｕｌｔｕｒｅｄａｎｄｗｉｌｄｓｐｅｃｉｅｓ．ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔｈｅｓｋｉｎｏｆＢｕｆｏ
ｂｕｆｏｇａｒｇａｒｉｚａｎｓａｎｄｉｔｓｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｓｋｉｎｏｆＢｕｆｏｂｕｆｏｇａｒｇａｒｉｚａｎｓ；Ｈｕａｃｈａｎｓｕｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｂｕｆｏｔｈｉｏｎｉｎｅ；ＨＰＬＣ ［责任编辑 鲍 雷］
第七届“德彪ＣＣＲＦ”中国奖（２００７年度）
“德彪ＣＣＲＦ”中国奖由瑞士德彪集团和中国癌症基金会于１９９４年９月共同创办。瑞士德彪集团是一家专门从事新药研开的科研投资公
司。其经营策略是与科学家合作，把他们的研究成果开发成药品，然后进行全球销售。
“德彪ＣＣＲＦ”中国奖旨在为中国科学家和国际制药工业间搭起一座桥梁，鼓励在癌症、老年性痴呆、糖尿病、心血管等领域的中国新药开
发事业，包括生物制剂、天然提取物、合成分子等。主要面向国内所有从事高科技项目和从天然产物中提取新分子的中国科学家、实验室、研究
所、大学和制药工业等。德彪奖已成功举办了６届，中外评委本着“实事求是，公正透明”的原则，嘉奖了一批既有相当学术水平又有一定开发
应用前景的项目，并对一些项目提供了开发建议。其中第三届一等奖项目《石杉碱甲衍生物ＺＴ１的抗老年性痴呆作用》，正是通过参评德彪
奖，被德彪集团确认立项，投入大量资金进行国际合作开发，目前已完成国际多中心的Ｉ期临床研究。
德彪奖目前已在中国新药开发领域特别是肿瘤药方面树立了较高的信誉，成为向欧洲乃至世界展示中国医药科学进步的窗口。“德彪奖
ＣＣＲＦ”中国奖根据申报项目的科研价值和新颖性颁发一、二、三等奖各１名，鼓励奖若干名：一等奖８０００瑞士法郎（约５万人民币），二等奖６
０００瑞士法郎（约３７万人民币），三等奖４０００瑞士法郎（约２５万人民币），鼓励奖人民币若干及精美纪念品。热忱欢迎对德彪奖有兴趣的个
人和单位申请。可致函秘书处报名领取申请表，然后将申请文件挂号寄给新一届秘书长：“德彪ＣＣＲＦ中国奖”秘书处 陈凯先院士 （信封上请
注明：参评德彪奖）。上海浦东祖冲之路５５５号，中国科学院上海药物研究所陈凯先院士，邮编：２０１２０３。
具体事项可直接致电德彪公司中国联络站的徐晓雁女士咨询详情或领取报名表。电话：０２１５８３３２９４７（９ｈ１９ｈ），传真：０２１５８３３４４３１，手
机：１３９０１８１７１４０，Ｅｍａｉｌｚｈａｏｘｕｄ＠ｏｎｌｉｎｅ．ｓｈ．ｃｎ。受理截止日为２００７年４月２５日。
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Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ ３
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００７