全 文 ：超临界 ≤u萃取鹿茸中的性激素研究
徐志红 o李淑芬 3 o王金宇 o周 冉 o田松江
k天津大学 化工学院 绿色合成与转化教育部重点实验室 o天津 vssszul
≈摘要 目的 }研究超临界 ≤u萃取技术提取鹿茸中性激素 ∀方法 }超临界 ≤u萃取鹿茸中的性激素并采用
放射免疫法分析其含量 o利用 ≤ 2 ≥o×≤和 °≤分析了萃取物中其他成分 ∀结果 }以 {xh乙醇为夹带剂 o夹带
剂 Β原料 tk°# ªpt lo萃取压力 vs °¤o萃取温度 yx ε o总提取率为 t1xyh o雌二醇和孕酮的质量分数分别为
v1szozzy1t{ ±ª# ªpt ∀结论 }采用超临界 ≤u萃取技术提取鹿茸中的性激素是可行的 ∀
≈关键词 超临界 ≤u ~鹿茸 ~性激素 ~雌二醇 ~孕酮
≈中图分类号 u{wqt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusszlt|2usss2sw
≈收稿日期 ussy2s|2tt
≈通讯作者 3 李淑芬 oר¯}ksusluzwsuzuso∞2°¤¬¯}¶«©¯¬ ·∏q
§¨∏q¦±
鹿茸是传统名贵中药 o具有 /壮肾阳 !益精血 !
强筋骨 0和治疗女性 /宫冷不孕 0等功效 ≈t ∀文献报
道 ≈uov o鹿茸中含有天然雌激素 k雌二醇 l和孕酮等
性激素 ∀目前 o合成雌激素如己烯雌酚 !乙炔雌二醇
等已被广泛用于治疗女性更年期综合征 o但因其副
作用较大 o不宜长期使用 ∀有研究表明 ≈w o单纯用
雌激素替代治疗会增加绝经后妇女子宫内膜癌的发
生 ∀但联合应用雌激素和孕激素治疗可在许多方面
产生有益的改变 ≈x ∀因此 o将鹿茸提取物开发成预
防和治疗女性更年期综合征的产品 o具有效果明确 !
安全性高的特点 ∀
鹿茸中雌二醇含量尚未达到药用水平 o需采用
科学技术将其富集浓缩 ∀雌二醇 !孕酮属弱极性物
质 o利用环境友好的超临界 ≤u萃取鹿茸中雌二醇 !
孕酮将具有明显的优点 o而有关的工艺研究尚未见
文献报道 ∀本研究目的是探讨超临界 ≤u萃取技术
提取雌二醇 !孕酮的可行性 ∀
1 仪器与试药
≥³¨ p §¨≥ƒ∞超临界流体萃取仪 k美国 ³³¯¬¨§2
≥ ³¨¤µ¤·¬²±¶公司 l~整枝三杈花鹿茸 k由天津神草动
物养殖有限公司提供和鉴定为梅花鹿 ≤ µ¨√∏¶±¬³³²±
× °¨°¬±¦®lo粉碎后过 ys目筛备用 ~ ≤u k纯度
||1|h o天津四知气体有限公司 l~乙醇 k分析纯 o天
津大学科威有限公司 l∀
2 方法
2q1 超临界流体萃取
2q1q1 超临界 ≤u流体萃取工艺 将经夹带剂浸泡过
的鹿茸粉末 k各条件下均为 y ªl装入萃取釜 o对 ≥ƒ∞系
统加热 o当温度达到预定温度时 o将压力达到预定压
力 o先静态萃取 vs °¬±o后动态萃取 ys °¬±o从出口阀接
物料 o通过真空减压干燥去除夹带剂 o获得萃取物 ∀
2q1q2 实验设计 在超临界流体萃取过程中 o夹带
剂浓度 !夹带剂用量 !萃取压力和温度等因素对总提
取率及萃取物成分有较为明显的影响 ∀本研究选用
总提取率 ΨΤ !雌二醇含量 ΧΕ和孕酮含量 ΧΠ为目标
函数 ∀
ΨΤ µ t rµ s ≅ tssh kµ t }总提取物质量 oª~µ s }鹿茸原料
质量 oªl
ΧΕ µ Ε / µ t kµ Ε }萃取物中雌二醇质量 o±ªl~ΧΠ µ Π / µ t
kµ Π}萃取物中孕酮质量 o±ªl
2q2 分析方法
2q2q1 放射免疫法 雌二醇放射免疫试剂盒 o天津
市协和医药科技有限公司生产 ~孕酮放射免疫试剂
盒 o北京科美东雅生物技术有限公司生产 ∀激素 Χ
放射免疫计数器 o≤ 2|tt中国科技大学开发研究院
中国同位素公司生产 ∀
样品处理 称取 xs ∗ tss °ª超临界萃取物 o加
入 x °甲醇溶解 ow sss µ# °¬±pt离心 ts °¬±o收集
上清液 o并记下体积 ∀取出 t °甲醇溶液挥干 o用
含 s1uh白蛋白磷酸盐缓冲液 k³ z1sl补充至 t
°o摇匀 ow ε 冰箱保存 o作为待测样品 ∀
雌二醇 !孕酮测定步骤按照试剂盒说明书进行 ∀
2q2q2 ≤ 2 ≥分析鉴定鹿茸超临界流体萃取物中
脂溶性成分 y{|s p x|zv型 ≤ 2 ≥分析仪 kª¬2
#sssu#
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¯¨ ±·o美国 l~° p x ≥石英毛细管柱 ks1ux Λ° ≅
uxs Λ° ≅ vs °l~气化室温度 u{s ε ~程序升温 {s
ε kt °¬±lψ kts ε # °¬±pt lψ u{s ε ktx °¬±l~载
气 k¨||1|||h l~载气流速 t1x °# °¬±pt ~进样 t
Λo分流比 tΒtss∀
质谱分析条件 }离子源温度 uvs ε ∀电子能量
zs √¨o扫描质量范围 µ / ζ ts ∗ xss∀
2q2q3 薄层色谱法 k×≤l鉴定鹿茸超临界流体萃
取物中磷脂的组成 参考文献方法 ≈y o用 ×≤法定
性分析了鹿茸超临界流体萃取物中磷脂的组成 ∀
2q2q4 °≤测定萃取物中对羟基苯甲醛和次黄
嘌呤的含量 ¤¥¯¯¬¤±¦¨ ¶¨µ¬¨¶¶高压液相色谱
泵 o¤¥¯¯¬¤±¦¨ ²§¨ ¯xss紫外检测器 o±¶·¤µ色谱
工作站 ~×∏µ± µ¨≤t{柱 kw1y °° ≅ uxs °°ox Λ°l~流
动相 s1u °²¯ # pt ¤u °w k含甲醇 th l2s1t °²¯
# pt氯化钠 ~流速 t1s °# °¬±pt ~检测波长 ux{
±°~柱温为室温 ~进样量 us Λ∀样品处理过程参见
文献 ≈z ∀
3 结果与讨论
3q1 超临界 ≤u萃取工艺的研究
3q1q1 夹带剂浓度的影响 雌二醇和孕酮具有一
定的极性 ∀而超临界 ≤u对极性物质的溶解能力
较弱 o乙醇因其无毒 o方便易得 o且可以通过加水改
变乙醇极性 o所以本实验选择乙醇为夹带剂 ∀本研
究考察了 {s ε ows °¤o夹带剂 r原料为 tk°Β
ªlo乙醇体积分数对萃取的影响 ∀由图 t可看出 o
萃取物中的孕酮含量比雌二醇质量分数大 ~总提取
率和孕酮质量分数随乙醇体积分数增加而增加 o而
雌二醇随乙醇体积分数增加而下降 ∀经分析 o雌二
醇含有 u个羟基 o而孕酮只含有一个酮基 o所以雌
二醇极性较孕酮大 ∀随着乙醇体积分数的增加 o即
夹带剂极性随之减小 o根据相似相溶原理 o故孕酮
随极性减小更易被萃取出来 ∀由图 t可以看出 o当
乙醇体积分数为 {xh时 o总提取率最大 o且雌二醇
和孕酮质量分数也较大 o故考虑使用 {xh 乙醇作
为夹带剂 ∀
3q1q2 夹带剂用量的影响 本实验考察了 yx ε o
us °¤下 o{xh乙醇为夹带剂 o{xh乙醇用量对实
验结果的影响 ∀由表 t可见 o总提取率 !雌二醇和孕
酮质量分数随 {xh乙醇用量的增加而增加 ∀当夹
带剂 k°l和干鹿茸 kªl的比为 t时 o再增加夹带剂
用量 o雌二醇和孕酮质量分数并没有较明显的变化 ∀
图 t 乙醇体积分数对总提取率和性激素含量的影响
从节约溶剂和方便样品后处理以及主要产品的含量
等因素考虑 o确定夹带剂 k°l和干鹿茸 kªl的比值
为 t∀
表 t 夹带剂用量对各指标的影响
夹带剂 r原料
r°# ªpt
总提取率
rh
雌二醇
r±ª# ªpt
孕酮
r±ª# ªpt
s1x s1{u u1xy utx1st
t t1uw w1yz vy{1su
u u1sz w1{{ vzy1ut
3q1q3 萃取压力的影响 图 u给出了 yx ε 下 o
{xh乙醇为夹带剂 o{xh乙醇 Β原料 to萃取压力对
实验结果的影响 ∀萃取压力是超临界流体萃取过程
中重要参数之一 o它是影响被萃取物在超临界流体
中溶解度的主要因素 ∀萃取压力的增加导致超临界
流体密度增大 o从而使溶解力增强 o提高总提取率 ∀
但压力与总提取率之间并不是线性关系 o当压力增
大到 vs °¤以上时 o总提取率增加缓慢 ∀雌二醇和
孕酮质量分数变化趋势相一致 ∀雌二醇质量分数保
持在 u1{s ∗ v1sz ±ª# ªpt ∀从经济和安全方面考
虑 o作者选择 us ∗ vs °¤为较佳压力范围 o确定最
佳压力为 vs °¤∀
图 u 萃取压力对总提取率和性激素含量的影响
3q1q4 萃取温度的影响 在前面萃取压力考察的
基础上 o得到在 us ∗ vs °¤各项考察指标较好 ∀从
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ t|
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经济方面考虑 o故拟定了在 us °¤下 o乙醇体积分
数为 {xh o夹带剂和鹿茸用量比为 t时 o考察萃取
温度对实验结果的影响 ∀由图 v可知 o总提取率随
温度升高而增加 ~雌二醇和孕酮质量分数在低于 xs
ε 时随温度升高而减小 o在高于 xs ε 时随温度升高
而增加 ∀这说明低于 xs ε 时 o随温度升高 o超临界
≤u密度逐渐减小 o此时萃取物的蒸气压和扩散系
数及传质系数影响很小 o即 ≤u密度起主要作用 o故
溶解雌二醇和孕酮能力降低 ~高于 xs ε 时 o随温度
升高 o雌二醇和孕酮的蒸气压和扩散系数及传质系
数大大提高 o分子热运动加剧 o相互碰撞几率增强 o
超过了 ≤u密度的影响 o从而使溶解度提高 ∀作者
选择 yx ∗ {s ε 为较佳温度范围 o确定最佳温度为
yx ε ∀
图 v 温度对总提取率和性激素含量的影响
综上所知 o本研究最佳工艺条件为 {xh乙醇为
夹带剂 o{xh 乙醇和鹿茸用量比为 to压力为 vs
°¤o温度为 yx ε ∀
3q2 鹿茸萃取物中其他化学组成分析
3q2q1 ≤ 2 ≥法分析萃取物中脂类物质组成 通
过 ≤ 2 ≥分析 o从萃取物中共解析出了 uu种物质 o
以脂肪酸种类为主 o饱和脂肪酸 tw种 o以硬脂酸为
主 o占 {1vwh ~其中不饱和脂肪酸主要以十八碳烯
酸为主 o油酸含量最高 o还含有少量花生四烯酸 ~胆
固醇含量较高 o占 tt1wvh ∀
3q2q2 萃取物中磷脂组成的定性分析 据文献报
道 ≈z o鹿茸磷脂具有抗衰老作用 ∀经薄层色谱分
离 o在使用夹带剂的超临界流体萃取物鉴定出含有
卵磷脂 k°≤lo脑磷脂 k°∞lo溶血卵磷脂 k°≤ lo溶
血脑磷脂 k°∞lo神经鞘磷脂 k≥° l∀而采用纯
≤u萃取 o不管是在高压下 kws °¤l还是低压 kus
°¤l下 o萃取物中都没有检测到 x种已知的磷脂 o
只有一未知点 ∀这说明由于各种磷脂的极性比较
强 o纯 ≤u几乎不能将鹿茸中的磷脂萃取出来 ∀本
研究还试探性考察了 yx ε ous °¤下动态加入夹
带剂的情况 o夹带剂用量与静态加入所用量一致 ∀
当加入 {xh乙醇作夹带剂后 o超临界流体的极性增
大 o因此 o不管采用静态还是动态加入方式 o都可以
萃取出鹿茸中的磷脂 ∀
3q2q3 °≤分析萃取物中抗衰老成分 因萃取物
中含有多种活性成分 o本实验还测定了最佳工艺条件
下萃取物中抗衰老成分次黄嘌呤 k÷ l!对羟基苯甲
醛 k°
⁄l含量 o分别为 t1wyos1yv °ª# ªpt ∀
4 结论
当 {xh乙醇为夹带剂 o夹带剂和鹿茸用量比为
to压力为 vs °¤o温度为 yx ε 时 o总提取率可达
t1xyh o萃取物中雌二醇和孕酮质量分数分别为
v1szozzy1t{ ±ª# ªpt ∀
通过 ≤ 2 ≥和 ×≤分析 o从萃取物中共解析出
了 uu种物质和分析出 x种磷脂 ∀
萃取物中抗衰老成分次黄嘌呤 k÷ l!对羟基
苯甲醛 k°
⁄l质量分数达到毫克级 o说明萃取物
具有抗衰老作用 ∀
本实验试探性考察了动态加入夹带剂时萃取物
中磷脂成分 o尚未优化其工艺条件 o有待进一步的研
究 ∀
≈参考文献
≈t 中国药典 ≈≥ q一部 qusss}uywq
≈u 李春旺 q麋鹿茸与梅花鹿茸雌二醇含量比较 ≈ q动物学报 o
ussvow|ktl}tuwq
≈v 董万超 o赵景辉 o潘久如 o等 q梅花鹿七种产品的化学成分研究
≈ q特产研究 ot||woktl}vyq
≈w 孙 倩 o胡爱莲 o刘学义 q激素替代治疗女性更年期症状与恶
性肿瘤 ≈ q中国肿瘤临床 oussvovskxl}vz{q
≈x µ¨«¤µ§ o • ¤¯¶«
• o פº¤®²¯ o ·¨¤¯q ∞¶·µ¤§¬²¯ ·«¨ µ¤³¼
¦²°¥¬± §¨ º¬·« ³µ²ª¨ ¶·¨µ²±¨ ¤±§ ±¨§²·«¨ ¬¯∏°2§¨ ³¨ ±§¨ ±·√¤¶²§¬¯¤2
·¬²± ¬± ³²¶·° ±¨²³¤∏¶¤¯ º²° ±¨≈ q ≤¬µ¦∏¯¤·¬²±o t||{o|{ktul}
ttx{q
≈y 段传凤 o王金和 q梅花鹿茸磷脂和脂肪酸组成研究 ≈ q特产研
究 ot||sokvl}w{q
≈z 王金宇 q鹿茸中活性成分的提取及一种新型微胶囊的制备
≈⁄ q天津 }天津大学 oussxq
≈{ 陈晓光 o王本祥 o吴延东 q鹿茸磷脂对单胺氧化酶的抑制作用
≈ q中药药理与临床 ot||soykyl}twq
#ussu#
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Εξτραχτιον οφ σεξ ηορµ ονε φροµ αντλερ ϖελϖετ ωιτη συπερχριτιχαλΧΟu
÷ «¬2«²±ªo ≥«∏2©¨±o • ¬±2¼∏o ¤±o ×≥²±ª2¬¤±ª
(Κεψ Λαβορατορψ φορΓρεεν Χηεµ ιχαλΤεχηνολογψ οφ Στατε Εδυχατιον Μινιστρψ,
Σχηοολοφ Χηεµ ιχαλΕνγινεερινγ & Τεχηνολογψ, Τιανϕιν Υνιϖερσιτψ, Τιανϕιν vssszu, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ° ·¨«²§²© ¬¨·µ¤¦·¬²± ²©¶¨¬ «²µ°²±¨©µ²° ¤±·¯¨µ√¨¯√ ·¨º¬·«¶∏³¨ µ¦µ¬·¬¦¤¯ ≤u q Μετηοδ :
≥∏³¨ µ¦µ¬·¬¦¤¯ ©¯∏¬§ ¬¨·µ¤¦·¬²± k≥ƒ∞l º¤¶∏¶¨§·² ¬¨·µ¤¦·¶¨¬«²µ°²±¨©µ²° ¤±·¯¨µ√¨¯√ ·¨¤±§µ¤§¬²¬°°∏±²¤¶¶¤¼ k l º¤¶∏¶¨§·²¤±¤2
¼¯½¨ ·«¨ ¬¨·µ¤¦·¶q ׫¨ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²°³²¶¬·¬²±¶¬± ¬¨·µ¤¦·¶º µ¨¨ ¬§¨ ±·¬©¬¨§¥¼ ≤ 2 ≥o ×≤ ¤±§°≤o µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼q Ρ εσυλτ: ׫¨ ¬¨³¨ µ¬2
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·µ¤¦·¬²± ³µ¨¶¶∏µ¨ ²©vs °¤q ∞¶·µ¤§¬²¯ ¤±§³µ²ª¨ ¶·¨µ²±¨¬± ·«¨ ¬¨·µ¤¦·¶º µ¨¨ v1szo zzy1t{ ±ª# ªpt µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼q Χονχλυσιον: ·¬¶
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[ Κεψ ωορδσ] ¤±·¯¨µ√¨¯√ ·¨~ ¶∏³¨ µ¦µ¬·¬¦¤¯ ¦¤µ¥²± §¬²¬¬§¨ ~ ¶¨¬«²µ°²± ~¨ ¶¨·µ¤§¬²¯~ ³µ²ª¨ ¶·¨µ²±¨
≈责任编辑 鲍 雷
≈收稿日期 ussz2st2s{
≈基金项目 国家博士后科研工作站四川科伦实业集团有限
公司博士后在研项目
≈通讯作者 3 蔡勤 oר¯}ksu{l{v|vvwtxo∞2°¤¬¯} ¬¯∏µ¶«ussy
tyvq¦²°
川芎油自乳化释药系统体外评价
蔡 勤 tou3 o梁 隆 u o黄艳萍 u o侯世祥 v
ktq四川大学 华西药学院 博士后流动站 o四川 成都 ytsswt~
uq四川科伦实业集团 o四川 成都 ytsxss~ vq四川大学 华西药学院 o四川 成都 ytsswtl
≈摘要 目的 }探讨川芎油自乳化释药系统 k∂ ≤ ≥∞⁄⁄≥l体外评价方法 ∀方法 }通过研究 ∂ ≤ ≥∞⁄⁄≥自乳
化效率 !成乳后乳剂性质和体外溶出行为对 ∂ ≤ ≥∞⁄⁄≥进行体外评价 ∀结果 }优选出的自乳化处方 x °¬±内已基
本乳化完全 o乳化后乳滴的平均粒径为 tsu ±°左右 oΦ电位均在 2vs °∂左右 o离心稳定性良好 ~成乳后得到 r• 型
乳剂 ~处方重现性高 ~以藁本内酯为指标 o体外溶出结果表明 vs °¬±内药物的体外溶出可达 {sh ~光照和高温条件
下稳定性良好 ∀结论 }∂ ≤ ≥∞⁄⁄≥自乳化能力强 o稳定性好 o体外溶出率高 ∀
≈关键词 川芎油 ~自乳化释药系统 ~体外评价
≈中图分类号 u{v ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusszlt|2ussv2sw
自乳化传递系统 k¶¨ ©¯2¨ °∏¯¶¬©¼¬±ª§µ∏ª§¨ ¬¯√ µ¨¼2
¶¼¶·¨°¶o≥∞⁄⁄≥l是包含油相 !乳化剂 !助溶剂的固体
或液体系统 o乳化所需要的自由能非常低 o在体外
vz ε 水浴 o温和搅拌下或体内胃肠道的蠕动下自发
成乳 o形成微小的乳滴 ∀ ≥∞⁄⁄≥物理稳定性好 o并
且体积小 o是比乳剂更好的口服给药形式 ≈t ∀
川芎是临床最常用的中药之一 o在临床上常用
来治疗各种血症 o有 /血中之气药 0的美称 ∀近年来
研究发现 o川芎油 k√²¯¤·¬¯¨ ²¬¯ ©µ²° µ«¬½²°¨²© ¬¯ª∏¶·¬2
¦∏° ≤«∏¤±¬¬²±ªo∂ ≤ lo特别是其中的苯酞类化合
物在川芎所起药理作用中起较大作用 ≈u ∀目前临
床上并无 ∂ ≤的制剂 o而 ∂ ≤为具有特殊气味的
油状物 o不方便直接使用 ∀为使 ∂ ≤发挥效用 o有
必要开发出临床上能用的制剂 ∀本研究通过对油
相 !乳化剂 !助乳化剂等的选择 o成功制备了 ∂ ≤
≥∞⁄⁄≥∀ ∂ ≤ ≥∞⁄⁄≥是否适宜工业化生产和能否
真正使用于临床 o则需要首先在体外进行多方考察 o
包括自乳化效率 !成乳后乳剂性质 !体外溶出行为和
稳定性等 ∀
#vssu#
第 vu卷第 t|期
ussz年 ts月
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ t|
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