全 文 ：双黄连制剂及其组分动物体内
化学成分的研究
汪 祺，张玉杰，姜 昊，孙万晶
（１．北京中医药大学 中药学院，北京 １００１０２）
［摘要］ 目的：比较研究大鼠灌胃双黄连粉针剂及各单味药提取物入血前后主要成分的变化，为优化双黄连
粉针剂处方提供实验依据。方法：建立双黄连粉针剂、各单味药提取物及大鼠灌胃后血浆成分的 ＨＰＬＣ指纹图谱，
分析鉴定双黄连粉针剂及其提取物给药后不同时间入血成分、相对含量、来源及其代谢产物。结果：灌胃双黄连后
８个主要成分入血，分别为黄芩苷及其３个代谢产物，绿原酸及其代谢产物和１个金银花中原型化学成分；随着给
药时间的延长绿原酸和黄芩苷等原型成分的相对含量逐渐减少，而它们的代谢物逐渐增加；未发现有明显连翘成
分入血。结论：入血成分及其代谢产物是双黄连粉针剂的体内药效物质基础，对其进行深入研究，将有助于双黄连
粉针剂的处方优化及临床合理用药。
［关键词］ 双黄连粉针剂；入血成分；血浆ＨＰＬＣ指纹图谱
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１０１１５８０４
［收稿日期］ ２００７０６０９
［通讯作者］ 张玉杰，Ｔｅｌ：（０１０）８４７３８６１８，Ｆａｘ：（０１０）８４７３８６１１，Ｅ
ｍａｉｌ：ｚｈｙｊ２２７＠１２６．ｃｏｍ
双黄连粉针剂由金银花、连翘、黄芩提取物制
成，有较强的抗菌、抗病毒作用，常用于治疗病毒性
肺炎、上呼吸道感染等病毒和细菌感染性疾病［１，２］，
但近年来该注射剂导致的不良反应引起了广大医务
工作者的重视［３，４］。本实验旨在通过研究比较双黄
连粉针剂给予大鼠灌胃后入血化学成分的变化，为
阐明双黄连粉针剂体内药效物质基础，进一步优化
双黄连粉针剂的处方提供实验依据。
１ 材料
１．１ 试药和试剂 黄芩苷（批号７１５９００３）、绿原
酸（批号 １１０７５３２００２１２）、连翘苷 （批号 ０８２１
９９０３）、黄芩素（批号１１１５９５２００３０１）等对照品购自
中国药品生物制品检定所；甲醇、乙腈为色谱纯
（ＦｉｓｈｅｒＣｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ美国），水为超纯水，其他试
剂均为市售分析纯。双黄连粉针剂（处方中金银
花、连翘及黄芩等药材的比例为１∶２∶１）及金银花、
连翘、黄芩提取物均由哈药集团中药二厂提供。
１．２ 动物 清洁级ＳＤ系雄性大鼠，体重２５０～３００
ｇ，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合
格证号ＳＣＸＫ（京）２００２．００３。
１．３ 仪器 美国Ａｎｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱仪，包
括四元梯度洗脱系统，ＤＡＤ检测器，Ａｎｇｉｌｅｎｔ色谱工
作站；ＣｌｅａｎｅｒｔＳＰＥＯＤＳ－Ｃ１８固相萃取小柱（美国
艾杰尔科技公司）。
２ 方法
２．１ 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸、连翘
苷、黄芩苷、黄芩素对照品适量，加甲醇溶解并制备
成含上述对照品００４４，０１９，００４，００１ｍｇ·ｍＬ－１
的混合标准品溶液，过０２２μｍ微孔滤膜，即得。
２．２ 双黄连粉针剂及各单味药提取物供试液的制
备 分别精密称取双黄连粉针剂和各单味药提取物
适量，加甲醇分别制成含上述各样品 １０６７，３０，
０１２１，１０６７ｍｇ·ｍＬ－１的溶液，过０２２μｍ微孔滤
膜，即得。
２．３ 含药血浆供试液的制备 取雄性 ＳＤ系大鼠，
禁食１２ｈ，但自由饮水，灌胃给予双黄连粉针剂及各
单味药提取物的供试液３ｍＬ（２１６ｇ·２５０ｇ－１），腹
腔注射２０％乌拉坦生理盐水溶液（１８ｇ·ｋｇ－１）麻
醉，做颈动脉插管，分别于给药后 １５，３０，６０，９０，
１２０，１８０，２４０ｍｉｎ取血０５ｍＬ，用３８％柠檬酸钠抗
凝（血液与柠檬酸钠溶液的比例是９∶１），４０００ｒ·
ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，分取血浆，用０１ｍｏｌ·Ｌ－１盐酸
调ｐＨ３～４，加于ＳＰＥ固相萃取小柱上，先用０５ｍＬ
水洗脱，弃去洗脱液，再用２％（ｐＨ４）酸性甲醇１０
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ｍＬ洗脱，收集洗脱液，低温挥干，残渣用３００μＬ甲
醇复溶，以０２２μｍ微孔滤膜滤过，即得。精密吸
取２０μＬ供ＨＰＬＣ测定。
２．４ 色谱条件 迪马公司 Ｃ１８钻石色谱柱（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；梯度洗脱，流动相 Ａ为乙腈，
Ｂ为１％醋酸，流速 １ｍＬ·ｍｉｎ－１；梯度洗脱程序：
０～２０ｍｉｎ，Ａ１５％ ～２０％；２０～３２ｍｉｎ，Ａ２０％ ～
３７％；３２～４０ｍｉｎ，Ａ３７％ ～４０％；４０～５０ｍｉｎ，Ａ
４０％ ～５０％；５０～６０ｍｉｎ，Ａ５０％ ～１５％。柱温
２５℃；波长采集范围 １９０～４００ｎｍ；检测波长 ２８０
ｎｍ。
２．５ 图谱分析 取双黄连粉针剂及各单味药提取
物的供试品溶液、对照品液、双黄连粉针剂及各单味
药提取物的血浆以及空白血浆样品在相同色谱条件
下进行ＨＰＬＣ分析，建立ＨＰＬＣ色谱图，比较确定入
血成分及其来源。上述３种药材提取物与双黄连粉
针剂谱峰相关性的研究：按照文献报道［５］方法分别
求算双黄连粉针剂与上述３种药材提取物指纹图中
相匹配谱峰保留时间的相对标准偏差，说明两峰之
间的相关性。
３ 结果与讨论
大鼠灌胃双黄连粉针剂９０ｍｉｎ后，血浆 ＨＰＬＣ
图谱中可见８个主要成分；其中１，２，３，５，７，８号峰
为双黄连粉针剂中原形成分，而４，６号峰为新出现
的代谢产物。经与各提取物进行比对，１号峰为绿
原酸，５号峰为黄芩苷，８号峰为黄芩素。与双黄连
原液的ＨＰＬＣ图谱比较，双黄连粉针剂９０ｍｉｎ后的
ＨＰＬＣ指纹图谱可见２号峰的峰面积的相对比例明
显增大，而５号峰面积明显减小。通过对４，６号峰
的ＤＡＤ光谱检测分析发现，其与黄芩苷的光谱极为
相似，疑为黄芩苷的代谢物。未发现连翘的几个主
要成分（包括９号峰的连翘苷）有明显的入血吸收
（图１）。
金银花、连翘、黄芩提取物大鼠灌胃后不同时间
的血浆 ＨＰＬＣ指纹图谱见图２～４。金银花提取物
灌胃给药３０ｍｉｎ后（图 ２）可检测出绿原酸（１号
峰），同时还出现了金银花提取物中没有的新成分，
即５～８号峰；６０ｍｉｎ后（图２）又出现了１个金银花
提取物中的原形成分（４号峰），而６，７号峰面积减
小，８号峰面积明显增高；９０ｍｉｎ后（图２）未见绿原
酸及６，７号峰的相对峰面积发生较大变化，而５号
峰的相对面积明显增大，８号峰面积变小。
图１ 大鼠灌胃双黄连血浆ＨＰＬＣ指纹图
Ａ．灌胃给予双黄连粉针后９０ｍｉｎ血浆谱图；Ｂ．对照品；Ｃ．双黄
连粉针剂甲醇溶液；Ｄ，Ｅ和Ｆ分别为金银花、连翘和黄芩的提取
物甲醇溶液；Ｇ．空白血浆；１．绿原酸；４，６．疑似黄芩苷代谢产物；
５．黄芩苷；２，３，７．双黄连提取物中的原形成分；８．黄芩素；９．连
翘苷
连翘提取物大鼠灌胃给药后，各时间点均未检
测到连翘苷。有文献报道证明，连翘苷在体内无论
单独给药或与其他吸收促进剂一起给药，在胃、小肠
及结肠均不被吸收［６］。但本实验中发现连翘提取
物中其他成分有少量入血，同时出现了２个新成分
（图３）。
黄芩提取物大鼠灌胃后在测定的２４０ｍｉｎ
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图２ 大鼠灌胃金银花提取物不同时间血浆ＨＰＬＣ图
ａ，ｂ和ｃ分别为灌胃给予金银花提取物后３０，６０，９０ｍｉｎ的色谱
图；ｄ．金银花提取物甲醇溶液色谱图；１．绿原酸；２，３，４．金银花
提取物中的原形成分；５，６，７，８．疑为绿原酸代谢产物
图３ 大鼠灌胃连翘提取物不同时间血浆ＨＰＬＣ图
ａ，ｂ，ｃ，ｄ，ｅ，ｆ和 ｇ分别为１５，３０，６０，９０，１２０，１８０，２４０ｍｉｎ取样；
ｈ．连翘提取物甲醇溶液；１，２，３，４．连翘提取物中原形化学成分；
５．连翘苷；６，７．疑似连翘提取物代谢成分
（图４）内黄芩苷的吸收呈现了双峰现象，并且在
２４０ｍｉｎ时达到峰值，与文献报道的黄芩苷吸收存在
肝肠循环相符［７］。ＨＰＬＣ谱图中的２号峰经采用标
准加入法确认其为黄芩素。通过比较口服黄芩提取
物及双黄连粉针剂发现黄芩苷在口服双黄连粉针剂
时的降解速度大于黄芩提取物，这与狄斌等人的研
究结果相一致［７］。
本项研究发现大鼠灌胃给予双黄连粉针剂后在
血浆中检测不到连翘苷，可以检测到微量绿原酸，但
更多的是其代谢产物。据国外文献报道，大鼠灌胃
绿原酸体内吸收较差，生物利用度不足１％。主要
原因是绿原酸很容易受到肠道菌群和肠壁代谢酶的
图４ 大鼠灌胃黄芩提取物不同时间血浆ＨＰＬＣ图
ａ，ｂ，ｃ，ｄ，ｅ，ｆ和 ｇ分别为３０，６０，９０，１２０，１８０和２４０ｍｉｎ；ｇ．黄芩
提取物甲醇溶液；１．黄芩苷；２．黄芩素
作用，绿原酸的代谢产物主要为咖啡酸、奎尼酸，上
述两种产物可继续代谢为马尿酸、安息香酸、阿魏酸
和异阿魏酸，这些代谢物可通过肠道吸收进入血液
循环［８］。提示双黄连粉针剂中直接加入金银花、连
翘提取物可能导致直接注射入血的连翘苷、绿原酸
含量过高，从而引发不良反应，该实验结果为今后探
讨双黄连注射剂的合理处方提供了初步依据；另外，
本实验中相关代谢产物的结构还需进一步研究确
定。
［参考文献］
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报，２００６，１２（５）：１０１．
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ｒａｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＪＮｕｔｒ，２００３，１３３：１８５３．
Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｒａｔｓｐｌａｓｍａｂｅｆｏｒｅ
ａｎｄａｆｔｅｒｏｒａｌｙａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｎｇＳｈｕａｎｇｈｕａｎｇｌｉａｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
ＷＡＮＧＱｉ，ＺＨＡＮＧＹｕｊｉｅ，ＪＩＡＮＧＨａｏ，ＳＵＮＷａｎｊｉｎｇ
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅｍａｔｅｒｉａｌｍｅｄｉｃａ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｊｉｎｇ１００１０２，Ｃｈｉｎａ）
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Ｍａｙ，２００８
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍａｉｎｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｂｓｏｒｂｅｄｉｎｔｈｅｂｌｏｏｄａｆｔｅｒｏｒａｌｙａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｎｇＳｈｕａｎｇｈｕａｎｇｌｉａｎ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｉｔｓｃｏｍｐｏｓｅｄｃｒｕｄｅｄｒｕｇａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇｔｈｅｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＳｈｕａｎｇｈｕａｎｇｌｉａｎｐｏｗｄｅｒｆｏｒ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｒｏｕｇｈａｎａｌｙｓｉｎｇＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂａｓｅｄｏｎｓｈｕａｎｇｈｕａｎｇｌｉａｎｐｏｗｄｅｒｆｏｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎａｎｄｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｉｔ
ｃｏｍｐｏｓｅｄｃｒｕｄｅｄｒｕｇ，ｔｈｅａｃｔｉｖｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｗｅｒｅｃａｒｉｅｄｏｕｔａｍｏｎｇｔｈｅｐｅａｋｓｏｆｃｏｎｔｒｏｌｐｌａｓｍａａｎｄｐｌａｓｍａｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｄｒｕｇｉｎｒａｔｓ，
ｓｈｕａｎｇｈｕａｎｇｌｉａｎｐｏｗｄｅｒｆｏｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎａｎｄｅｘｔｒａｃｔｏｆｉｔｓｃｏｍｐｏｓｅｄｃｒｕｄｅｄｒｕｇ．Ａｎｄｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄａｂｏｕｔｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ
ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎｅａｃｈｓａｍｐｌｅ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅｔｈｅｉｒｏｒｉｇｉｎａｌｄｒｕｇｓａｎｄｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｉｎｐｌａｓｍａｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｄｒｕｇｗｅｒｅａｓｃｅｒｔａｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：
ＥｉｇｈｔｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｐｌａｓｍａａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＳｈｕａｎｇｈｕａｎｇｌｉａｎ，ｆｏｕｒｏｆｔｈｅｍｗｅｒｅｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｃｏｍｐｏｕｎｄｓｃｏｎ
ｔａｉｎｅｄｉｎＳｈｕａｎｇｈｕａｎｇｌｉａｎｐｏｗｄｅｒｆｏｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｒｅｅｏｆｔｈｅｍｗｅｒｅｒｅｌａｔｉｖｅｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ．Ｉｔｈａｓａｌｓｏｆｏｕｎｄｔｈａｔｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｏｒｉｇｉｎａｌ
ｃｏｍｐｏｕｎｄｓｓｕｃｈａｓｂａｉｃａｌｉｎａｎｄｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄｆｅｌｏｆｇｒａｄｕａｌｙ，ｂｕｔｔｈｅｉｒｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｒａｔｐｌａｓｍａｉｎｖｉｖｏ．Ｗｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ
ｔｉｍｅｔｈｅｍａｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆｆｏｒｓｙｔｈｉａｈａｖｅｎｏｔｂｅｅｎｄｅｔｅｃｔｅｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙｉｎｒａｔｓｐｌａｓｍａ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｉｎｓｏｍｅｅｘｔｅｎｔ，ｔｈｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓ
ａｂｓｏｒｂｅｄｉｎｔｏｂｌｏｏｄｆｒｏｍＳｈｕａｎｇｈｕａｎｇｌｉａｎｐｏｗｄｅｒｆｏｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｉｒｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓａｒｅｔｈｅｅｆｅｃｔｉｖｅｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ，ａｎｄｉｔｓｐｌａｓｍａｐｈａｒ
ｍａｃｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｓｈｏｕｌｄｂｅｓｕｂｊｅｃｔｔｏｉｌｕｍｉｎａｔｅｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｅｃｔｓａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｓｈｕａｎｇｈｕａｎｇｌｉａｎｐｏｗｄｅｒｆｏｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｐｌａｓｍａＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｃｈｅｍｉｃａｌ；ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｂｓｏｒｂｅｄｉｎｂｌｏｏｄ
［责任编辑 王亚君］
［收稿日期］ ２００７０８０１
［基金项目］ 山东银香伟业集团资助项目“卫星搭载对几种中
药种子遗传特性的影响”（０５０９０１）；扬州大学大学生科技创新基金
“卫星搭载对牛膝种子的影响”（０６９９）
［通讯作者］ 李金贵，Ｔｅｌ：（０５１４）７９７９０３１，Ｅｍａｉｌ：ｊｉｎｇｕｏ＿ｌｉ＠
１６３ｃｏｍ
航天搭载对牛膝 ＳＰ１化学成分的影响
李金贵１，朱 奎１，谷文英２，刘宗平１
（１．扬州大学 兽医学院，江苏 扬州 ２２５００９；
２．扬州大学 动物科学院，江苏 扬州 ２２５００９）
［摘要］ 目的：研究航天搭载牛膝种子ＳＰ１代植株化学成分的变化。方法：利用紫外可见光谱、红外光谱、Ｘ
射线衍射和蛋白质的ＳＤＳＰＡＧＥ进行分析。结果：牛膝根紫外可见、红外、Ｘ射线衍射和蛋白质指纹图谱的特征明
显，其中紫外可见图谱不能区分出航天组和对照组牛膝的差异，但红外图谱和Ｘ射线衍射以及醇溶蛋白质图谱则
能区别航天组牛膝和对照组牛膝。结论：航天组与对照组牛膝根的化学成分种类无明显差异，但航天组某些化学
成分的含量有明显下降。
［关键词］ 化学成分；航天搭载；牛膝
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１０１１６１０４
太空微重力、强辐射、高真空及多因素复合效应
的空间环境，为诱变育种创造了传统育种无法比拟
的特殊诱变源［１］。中药航天育种起步较晚，王志
芬、高文远等报道已搭载的药用植物包括桔梗、红
花、藿香、甘草、肉苁蓉等［２，３］，而搭载牛膝种子的相
关试验尚未见报道。牛膝为苋科植物牛膝的干燥
根，具有补肝肾、强筋骨、逐瘀通经、引血下行的功
效［４］。笔者利用航天搭载过的牛膝种子为材料，收
获的ＳＰ１代植株，分析其根中化学成分的紫外、红外
和Ｘ射线粉末衍射的图谱，并通过 ＳＤＳＰＡＧＥ分离
醇溶性蛋白而分析蛋白质化学成分。本研究首次报
道关于牛膝化学成分的不同类型指纹图谱，为牛膝
的质量控制探索较好的鉴定方法；同时探讨航天搭
载引发的牛膝ＳＰ１根中化学成分的变异。
１ 材料
牛膝种子购自亳州药材市场，经扬州大学中兽
医教研组鉴定为怀牛膝种子。精选无损伤，籽粒饱
满者分成２份。１份作为对照组（ＣＫ）；１份于２００５
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第３３卷第１０期
２００８年５月
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ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １０
Ｍａｙ，２００８