全 文 ：芥子碱对大鼠脑匀浆和血清中乙酰胆碱
酯酶的抑制作用
何 玲１，２，李海涛１，郭胜伟１，刘丽芳２，邱嘉斌２，李 富２，蔡宝昌１
（１．南京中医药大学 博士后科研流动站，江苏 南京 ２１００２９；
２．中国药科大学，江苏 南京 ２１０００９）
［摘要］ 目的：考察中药单体芥子碱（３，５二甲基，４羟基苯丙烯酰胆碱，ｓｉｎａｐｉｎｅ）对大鼠血清和大鼠大脑匀浆
乙酰胆碱酯酶（ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ，ＡＣｈＥ）的体外抑制作用。方法：大鼠眼球取血后断头，取大脑，匀浆，用双缩脲
法测定脑组织匀浆总蛋白含量。采用乙酰胆碱脂酶试剂盒和改良Ｅｌｍａｎ比色法测定ＡＣｈＥ的活力，检测芥子碱对
大鼠血清和脑匀浆乙酰胆碱酯酶的抑制作用。结果：芥子碱明显抑制大鼠大脑匀浆 ＡＣｈＥ的活力，而对血浆 ＡＣｈＥ
活性的抑制相对较弱，对脑匀浆和血清ＡＣｈＥ的抑制ＩＣ５０分别为３６６和２２１μｍｏｌ·Ｌ
－１，ＩＣ５０血清／ＩＣ５０脑 ＝６０４２
（倍）。结论：芥子碱能显著抑制脑组织 ＡＣｈＥ活性，有可能作为中枢乙酰胆碱酯酶抑制剂（ａｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅｉｎｈｉｂｉ
ｔｏｒｓ，ＡＣｈＥＩｓ）具有防治阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）的应用前景。
［关键词］ 芥子碱；乙酰胆碱酯酶；胆碱酯酶抑制剂；阿尔茨海默病
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０７０８１３０３
［收稿日期］ ２００７１０１１
［基金项目］ 中国博士后科学基金面上项目（２００７０４１０３４３）；
江苏省博士后科研项目（０６０１０５０Ｂ）；江苏省药效研究平台项目
（ＢＭ２００５１０３）
［通讯作者］ 蔡宝昌，Ｔｅｌ：（０２５）８５３３９７２３，Ｅｍａｉｌ：ｂｃｃａｉ＠１２６．
ｃｏｍ；ｈｅｘｙｚ＠１６３．ｃｏｍ
芥子碱是普遍存在于十字花科植物如白芥子、
莱菔子中的一种酚类小分子生物碱。据报道，芥子
碱具有抗氧化、抗辐射、抗衰老、抗炎、抗腹泻、抗前
列腺增生和降血压作用［１４］。尽管对芥子碱的药理
活性展开了广泛的研究，但是芥子碱对乙酰胆碱酯
酶（ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ，ＡＣｈＥ）活性的影响国内外
尚未见报道。ＡＣｈＥ主要分布于神经组织，如脑白
质和灰质，脊髓、神经节内的神经细胞和神经肌肉
接头，还分布于红细胞和血清等非神经组织中。近
年来，中枢乙酰胆碱酯酶抑制剂（ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＡＣｈＥＩ如多奈哌齐（Ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ），利伐司替
明（Ｒｉｖａｓｔｉｇｍｉｎｅ），加兰他敏（Ｇａｌａｎｔｈａｍｉｎｅ）等改善
ＡＤ的症状得到广泛研究［５７］。
本研究从十字花科药用植物（白芥子、莱菔子、
葶苈子等中提取、分离得到芥子碱硫氰酸盐［８，９］，采
用ＡＣｈＥ试剂盒和改良Ｅｌｍａｎ比色法测定ＡＣｈＥ的
活力，考察芥子碱对大鼠血清和脑匀浆中 ＡＣｈＥ的
抑制作用，为芥子碱用作 ＡＣｈＥＩ防治阿尔茨海默病
（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）提供线索和奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 药品和试剂 乙酰胆碱酯酶测定试剂盒（南
京建成生物工程研究所，批号２００６０５０７），双缩脲总
蛋白测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号
２００６０４２５）；芥子碱（图１），相对分子质量为３６８，纯
度大于９８％，中国药科大学刘丽芳副教授提供，溶
于稀盐酸，用 ＰＢＳ稀释成所需浓度。其他试剂均为
市售ＡＲ级。
图１ 芥子碱硫氰酸盐
１．２ 仪器 ＵＶ－７２２紫外分光光度计（上海第三
分析仪器厂）；ＨＨ－Ｓ型电热恒温水浴锅（江苏省东
台市电器厂）；８０－１型离心沉淀机（上海手术器械
厂）；ＪＡ１００３型电子天平（上海精科天平）。
１．３ ＡＣｈＥ的制备 ＳＤ大鼠，由中国药科大学动物
中心提供，体重（２１０±２０）ｇ。眼球取血３ｍＬ后断
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第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８
头，冰台快速取大脑，放入玻璃皿中，玻璃皿加入少
量冰冷的磷酸缓冲液（ＰＢＳ漂洗，用干净的滤纸吸去
大脑组织表面的水分和血液。精密称重，大鼠脑重
约为２３５ｇ，放入小烧杯中。加入少量冰冷的 ＰＢＳ
（ｇ·Ｌ－１：ＮａＣｌ８，ＫＣｌ０２，Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ３５，
ＫＨ２ＰＯ４０２，ｐＨ７４于烧杯中，用眼科剪尽快剪碎
组织块。将剪碎的组织倒入玻璃匀浆器中，再用少
许冰冷ＰＢＳ冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒
入匀浆器中进行冰浴匀浆。然后再加入冷冻的
ＰＢＳ，按脑组织重量与匀浆总体积１∶１０的比例，稀
释混匀。将制备好的１０％脑匀浆以３０００ｒ·ｍｉｎ－１
离心１５ｍｉｎ，取上清待测。取出的血以 １０００ｒ·
ｍｉｎ－１离心８ｍｉｎ，取上层血清。测时将血清用 ＰＢＳ
按１∶９稀释。
１．４ 总蛋白含量的测定 用双缩脲法测得大鼠脑
组织匀浆总蛋白量为３９７ｍｇ·ｍＬ－１。
１．５ 大鼠血清、脑匀浆ＡＣｈＥ酶活力测定 用改良
Ｅｌｍａｎ比色法测定ＡＣｈＥ的活力［１０］，按乙酰胆碱脂
酶测定试剂盒的方法测定。设标准管组、不加药测
定管组、受试化合物测定管组（加药组），每组均设
空白对照管和测定管，大鼠脑组织匀浆液和血清取
样量为每管３０μＬ。反应体系混匀，３７℃准确反应
６ｍｉｎ，然后终止反应，混匀放置１５ｍｉｎ，在４１２ｎｍ
波长测定各管吸光度（用 ＰＢＳ调零）。受试药芥子
碱分别配制成 ００００５，０００１，０００５，００１，００５，
０１，０５，１ｍｇ·ｍＬ－１水溶液，ｎ＝１０。按下列公式
测得芥子碱对ＡＣｈＥ的抑制率。
脑匀浆中 ＡＣｈＥ活力（Ｕ·ｍｇ－１）＝（Ａ测定管 －Ａ对照管）／
（Ａ标准管 －Ａ空白管）×标准管浓度（１μｍｏｌ·ｍＬ
－１）／蛋白量（ｍｇ
·ｍＬ－１）
每毫克组织蛋白样本在３７℃保温６ｍｉｎ，水解
反应体系中１μｍｏｌ基质为１个活力单位（Ｕ）。
血清中 ＡＣｈＥ活力（Ｕ·ｍＬ－１ ＝（Ａ测定管 －Ａ对照管）／
（Ａ标准管 －Ａ空白管）×标准管浓度（１μｍｏｌ·ｍＬ
－１）×样品测试
前稀释倍数
每毫升血清样本在３７℃保温６ｍｉｎ，水解反应
体系中１μｍｏｌ基质为１个活力单位（Ｕ）。
药物对ＡＣｈＥ的抑制率（％）＝（不加药组酶活力－加药
组酶活力／不加药组酶活力×１００％
１．６ 数据处理 采用两样本均数比较的组间 ｔ检
验，结果以 珋ｘ±ｓ来表示。
２ 结果
芥子碱对大脑匀浆 ＡＣｈＥ有显著的抑制作用，
芥子碱００００５，０００１，０００５，００１，００５，０１，０５，
１ｍｇ·ｍＬ－１对脑匀浆 ＡＣｈＥ活力的抑制率分别为
２７４％，４０３％，７８９％，８３６％，９２３％，９６８％，
９９６％，１００％，ＩＣ５０为３６６μｍｏｌ·Ｌ
－１（表１）。芥子
碱对大鼠血清ＡＣｈＥ的抑制作用相对较弱，芥子碱
００００５，０００１，０００５，００１，００５，０１，０５，１ｍｇ·
ｍＬ－１对血清 ＡＣｈＥ活力的抑制率分别为 １８１％，
２９４％，４１３％，６４０％，７７９％，８５９％，９６７％，
９９８％，ＩＣ５０为２２１μｍｏｌ·Ｌ
－１（表２）。ＩＣ５０血清／
ＩＣ５０脑＝６０４２（倍）。
表１ 芥子碱对大鼠大脑匀浆ＡＣｈＥ的抑制作用
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
芥子碱
／ｍｇ·ｍＬ－１
浓度
／μｍｏｌ·Ｌ－１
酶活力
／Ｕ·ｍｇ－１
抑制率
／％
ＩＣ５０
／μｍｏｌ·Ｌ－１
不加药 ０ ０９７１±０２８３ －
００００５ １３５９ ０７０５±０１１９ ２７４
０００１ ２７１７ ０５７９±０１７８１） ４０３
０００５ １３５９ ０２０５±００４６２） ７８９
００１ ２７１７ ０１５９±００３１２） ８３６ ３６６
００５ １３５９ ００７４±００１８２） ９２３
０１ ２７１７ ００３１±００１０２） ９６８
０５ １３５９ ０００３±０００１２） ９９６
１ ２７１７ ００００±０００１２） １００
注：与不加药组相比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１（表２同）
表２ 芥子碱对大鼠血清ＡＣｈＥ的体外抑制作用
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
芥子碱
／ｍｇ·ｍＬ－１
浓度
／μｍｏｌ·Ｌ－１
酶活力
／Ｕ·ｍＬ－１
抑制率
／％
ＩＣ５０
／μｍｏｌ·Ｌ－１
不加药 ０ ８６９２±２４３３ －
００００５ １３５９ ７１１８±１７０８ １８１
０００１ ２７１７ ６１２９±１７８３ ２９４
０００５ １３５９ ５０９８±０９６９１） ４１３
００１ ２７１７ ３１２７±０８４４２） ６４０ ２２１
００５ １３５９ １９１８±０４３１２） ７７９
０１ ２７１７ １２１９±０３６５２） ８５９
０５ １３５９ ０２８４±００４９２） ９６７
１ ２７１７ ００１２±０００４２） ９９８
３ 讨论
ＡＤ是一种中枢胆碱能神经系统退行性疾病，
患者大脑皮层和海马区的乙酰胆碱含量明显减少。
近年来研究表明ＡＣｈＥＩｓ通过抑制ＡＣｈＥ的活性，增
加脑内乙酰胆碱的含量，恢复胆碱能神经传导，对
轻、中度的 ＡＤ患者取得了良好的治疗效果［１１］。
ＡＣｈＥＩｓ如他克林（Ｔａｃｒｉｎｅ），Ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ，Ｒｉｖａｓｔｉｇｍｉｎｅ
及Ｇａｌａｎｔｈａｍｉｎｅ已获得美国 ＦＤＡ批准用于治疗
ＡＤ。但现有的 ＡＣｈＥＩｓ大多还存在半衰期短、较严
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第３３卷第７期
２００８年４月
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