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牛耳枫的化学成分及抗胆碱酯酶活性分析



全 文 :[收稿日期] 20160619(007)
[基金项目] 中医药行业科研专项(201307002)
[第一作者] 王永丽,硕士,助理实验师,从事中药活性成分与质量标准研究,Tel:021-50271706,E-mail:ylwang521@ 126. com
[通讯作者] * 侴桂新,博士,教授,博士生导师,从事中药活性成分与质量标准研究,Tel:021-50271706,E-mail:chouguixinzyb@ 126. com
牛耳枫的化学成分及抗胆碱酯酶活性分析
王永丽1,2,刘伟1,3,尉小慧1,侴桂新1,2*
(1. 上海中医药大学 中药研究所,上海 201203;2. 上海中药标准化研究中心,
上海 201203;3. 上海中医药大学 附属曙光医院 肝病研究所,上海 201203)
[摘要] 目的:研究牛耳枫水提物的化学成分及其抗胆碱脂酶活性。方法:采用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20 柱色谱,
MCI柱色谱和制备液相色谱等方法对牛耳枫的化学成分进行分离纯化,并根据理化性质、核磁共振谱法、质谱法以及参考相
关文献鉴定化合物结构;采用 UPLC-MS /MS方法测定化合物的抗乙酰胆碱酯酶 (AChE)及丁酰胆碱酯酶 (BChE)活性。结
果:从牛耳枫乙酸乙酯部位和正丁醇部位分离得到 7 个化合物,分别鉴定为 5-oxymaltol (1),secodaphniphylline (2) ,2,6-
dimethyl-3-hydroxychromone (3) ,deoxycalyciphylline B (4) ,calyciphylline A (5) ,daphnezzomine M (6) ,deoxyisocalyciphylline B
(7)。其中化合物 4 和 7 具有抗 AChE活性,半数抑制浓度(IC50)分别为(128. 83 ± 21. 41)μmol·L
-1和(56. 15 ± 11. 02)μmol·
L -1;化合物 2,4,5 和 7 具有抗 BChE酶活性,IC50分别为(0. 31 ± 0. 15),(54. 53 ± 3. 33) ,(811. 17 ± 22. 49)μmol·L
-1和(8. 13 ±
0. 78)μmol·L -1。结论:化合物 1 和 3 为首次从该植物中分离获得,化合物 2 和化合物 7 具有较强的抗 BChE 活性,具有开发
为胆碱酯酶抑制剂的潜力。
[关键词] 牛耳枫;化学成分;乙酰胆碱酯酶;丁酰胆碱酯酶;胆碱酯酶抑制剂
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2016)20-0053-05
[doi] 10. 13422 / j. cnki. syfjx. 2016200053
Chemical Constituents from Daphniphyllum calycinum and
Their Anti-Cholinesterase Activity
WANG Yong-li1,2,LIU Wei1,3,WEI Xiao-hui1,CHOU Gui-xin1,2*
(1. Institute of Chinese Materia Medica,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (TCM),Shanghai
201203,China;2. Shanghai R&D Centre for Standardization of Chinese Medicines,Shanghai 201203,
China;3. Institute of Liver Diseases,Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of
TCM,Shanghai 201203,China)
[Abstract] Objective:To study the chemical components of Daphniphyllum calycinum and their anti-
cholinesterase activity. Method:The chemical constituents of D. calycinum were isolated and purified by silica gel
column chromatography,Sephadex LH-20 column chromatography,MCI column chromatography and preparative
HPLC. Their structures were identified according to their physicochemical properties,nuclear magnetic resonance
spectroscopy (NMR ) ,mass-spectrography (MS ) and literature analysis. Furthermore, the anti-
acetylcholinesterase and anti-butyrylcholinesterase activities of compounds were measured by UPLC-MS /MS
method. Result:Eight compounds were isolated from D. calycinum and their structures were identified as 5-
oxymaltol (1) ,secodaphniphylline (2) ,2,6-dimethyl-3-hydroxychromone (3) ,deoxycalyciphylline B (4) ,
calyciphylline A (5) ,daphnezzomine M (6) ,and deoxyisocalyciphylline B (7). Compound 4 and 7 were showed
anti-acetylcholinesterase activity,the IC50 values of compound 4 and 7 were (128. 83 ± 21. 41)μmol·L
-1 and
(56. 15 ± 11. 02)μmol·L -1,respectively. And compound 2,4,5 and 7 were showed anti-butyrylcholinesterase
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activity,the IC50 values of compound 2,4,5 and 7 were (0. 31 ± 0. 15)μmol·L
-1,(54. 53 ± 3. 33)μmol·
L -1,(811. 17 ± 22. 49)μmol·L -1 and (8. 13 ± 0. 78)μmol·L -1,respectively. Conclusion:Compound 1
and 3 were isolated from this plant for the first time. Compound 2 and 7 were showed strong anti-
butyrylcholinesterase activity,and were the potential of cholinesterase inhibitors.
[Key words ] Daphniphyllum calycinum; chemical constituents; acetylcholinesterase;
butyrylcholinesterase;cholinesterase inhibitors
阿尔兹海默病 (Alzheimer’s disease,AD)是一
种常见的老年性神经退行性疾病,表现为认知和神
经精神方面的症状。最近研究表明,AD 患者认知
功能衰退的主要原因是大脑皮质等区域胆碱能神经
递质 (乙酰胆碱 ACh)持续下降[1-2]。乙酰胆碱酯
酶 (AChE)和丁酰胆碱酯酶 (BChE)是水解突触间
隙中胆碱能神经递质乙酰胆碱 (ACh)的水解酶。
尽管病因尚不明确,但在 AD 发展的不同阶段控制
胆碱酯酶 (ChE)的活性是非常有必要的。其中有
效的治疗策略是通过抑制 AChE 和 BChE 的活性从
而提高脑内 ACh 的水平。目前,AChE 和 BChE 的
抑制剂已被批准用于治疗 AD,如他克林、多奈哌
齐、新斯的明、加兰他敏[3]。从天然植物中分离或
对活性化合物进行结构修饰是发现和获得新的胆碱
酯酶抑制剂最主要的方式,发现具有防止和延迟神
经退化病理过程及副作用更小的候选药物一直是医
药化学家的目标。
牛耳枫 (Daphniphyllum calycinum)又称南岭虎
皮楠、老虎耳、牛耳铃,为虎皮楠科植物[4]。常绿灌
木,主要分布于云贵、海南、两广等地,是我国传统的
民间药用植物。其功效为祛风止痛、解毒消肿,主治
风湿骨痛、跌打骨折、无名肿痛、毒蛇咬伤、久
痢[5-6]。临床多用于急性肠胃炎、急性湿疹等的治
疗[7]。文献报道牛耳枫的化学成分主要为生物碱
和黄酮类等成分,其中生物碱为其主要的化学成分,
具有复杂的多环结构和新颖的骨架,并且这种结构
的化合物仅在虎皮楠属植物中发现,具有较强的专
属性。对牛耳枫药理活性的研究主要集中在生物碱
的抗肿瘤活性和黄酮类化合物的抗氧化性研究方
面,但并未发现活性很好的化合物[8-9]。课题组前
期预实验发现牛耳枫水提物具有显著的抗 AChE 及
抗 BChE 活性,具有开发成为胆碱酯酶抑制剂用于
AD防治的潜力。因此本研究将对牛耳枫水提取物
化学成分进行分离制备,并评价其抗 AChE 及抗
BChE活性,以期发现活性较好的候选或先导化合
物。最终本实验从牛耳枫水提取物中分离鉴定了 5
个生物碱类成分和 2 个其他类成分,分别为 5-
oxymaltol (1),secodaphniphylline (2) ,2 6-dimethyl-
3-hydroxyc hromone (3) ,deoxycalyciphylline B (4) ,
calyciphylline A (5 ) ,daphnezzomine M (6 ) ,
deoxyisocalyciphylline B (7)。通过 UPLC-MS /MS 法
对分离获得的化合物抗 AChE 及抗 BChE 活性进行
测定,发现化合物 4 和 7 具有一定的抗 AChE 活性,
化合物 2,4,7 表现出较强的抗 BChE活性。
1 材料
乙酰 胆 碱 酯 酶 (AChE) 来 自 于 电 鳗
Electrophorus electricus,丁酰胆碱酯酶(BChE,批号
078K7015)来自于马血清、氯化乙酰胆碱 (ACh,批
号 100909957),氯 化 丁 酰 胆 碱 (BCh,批 号
SLBB084),氯化胆碱 (Ch,批号 101244069),矮壮
素 (内标,IS 批号 007-003-00-6)和加兰他敏
(galanthamine,批号 PHR1623)均购买于 Sigma
公司。
ACQUITYTM UPLC 系 统 (美 国 Waters),
Micromass Quattro Premier XE 型串联三重四级杆质
谱 (美国 Waters),ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱
(2. 1 mm ×100 mm,1. 8 μm)。Finnigan LCQTM离子
阱质谱仪 (ESI 离子源,美国 Thermo Finnigan),AV-
400,500 型核磁共振光谱仪 (Germany,Bruker) ,
EYELA N-1000 型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限
公司),CA-1111 型冷阱 (上海爱朗仪器有限公司),
BT25S型电子分析天平 (北京赛多利斯公司)。
HG/T2354-92 型薄层色谱硅胶 (青岛海洋化工
有限公司,) ,柱薄层硅胶 (青岛海洋化工厂,100 ~
200,200 ~ 300 目,批号 0120171),HSGF254硅胶预制
板 (烟台江友硅胶开发有限公司),HSGF254高效制
备硅胶板 (烟台江友硅胶开发有限公司),Sephadex
LH-20 型羟甲基葡聚糖凝胶 (瑞典通用电气医疗集
团),ODS (美国赛分科技,40 ~ 60 μm);MCI小孔树
脂凝胶(日木三菱,75 ~ 150 μm)。
牛耳枫药材由上海中医药大学侴桂新教授鉴定
为虎皮楠科虎牛耳枫 Daphniphyllum calycinum 的干
燥地上部分,牛耳枫水提取物干浸膏由广西柳州中
药厂提供(批号 GXLZ20140813-02)。
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2 提取与分离
取牛耳枫水提取物干浸膏 5 kg,加水约 55 L制
成混悬溶液,依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取。合并各
部分萃取液,浓缩得各部位浸膏。将乙酸乙酯部位
用乙醇溶解,硅胶拌样,通过硅胶柱色谱 (石油醚-
乙酸乙酯系统洗脱)得到 13 个洗脱部位,每个部位
通过反复硅胶柱色谱,Sephadex LH-20 凝胶柱色谱,
ODS柱色谱等,得到化合物 1,3。将正丁醇部位加
氨水调 pH 9 ~ 10,依次用二氯甲烷、正丁醇萃取,合
并各部分萃取液,浓缩得各部位浸膏。将二氯甲烷
部位首先经 MCI 柱色谱粗分为 12 个部位,然后经
反复 Sephadex LH-20 凝胶柱色谱,制备薄层,ODS
柱色谱,得到化合物 4 ~ 7。
3 结构鉴定
化合物 1 近无色棱晶 (甲醇),1H-NMR
(DMSO-d6,400 MHz)δ:8. 93 (1H,s,H-3),8. 76
(1H,s,H-5) ,7. 93 (1H,s,H-6) ,2. 21 (3H,s,
H-7) ;13C-NMR (DMSO-d6,100 MHz)δ:141. 3 (C-
2),149. 2 (C-3) ,168. 5 (C-4) ,144. 2 (C-5) ,
139. 0 (C-6) ,14. 5 (C-7)。以上数据与文献报道
[10-11]基本一致,故鉴定化合物 1 为 5-oxymaltol。
化合物 2 无色晶体,ESI-MS m/z 470. 363 2
[M + H]+,1H-NMR (CD3OD,400 MHz)δ:3. 43
(1H,br s,H-1),1. 64 (1H,m,H-2) ,1. 78 (1H,
m,H-3) ,2. 05 (3H,m,H-3,4,15) ,1. 68 (3H,m,
H-4,6,9) ,2. 66 (1H,m,H-7) ,3. 15 (1H,m,H-
11) ,3. 64 (1H,m,H-11) ,1. 51 (1H,m,H-12) ,
1. 54 (2H,m,H-12,14) ,2. 08 (2H,m,H-13) ,
1. 98 (1H,m,H-14) ,1. 81 (1H,m,H-15) ,1. 71
(1H,m,H-16) ,2. 02 (1H,m,H-16) ,2. 97 (1H,
m,H-17) ,3. 06 (1H,m,H-17) ,1. 09 (1H,m,H-
18) ,1. 04 (3H,d,J = 6. 0 Hz,H-19) ,1. 10 (3H,
d,J = 4. 4 Hz,H-20) ,1. 37 (3H,s,H-21) ,0. 82
(3H,s,H-24) ,3. 61 (1H,d,J = 12. 1 Hz,H-25) ,
4. 30 (1H,d,J = 12. 0 Hz,H-25) ,4. 63 (1H,d,
J = 5. 6 Hz,H-26) ,1. 88 (1H,m,H-27) ,2. 08
(1H,m,H-27) ,1. 92 (1H,m,H-28) ,2. 12 (1H,
m, H-28 ) ,1. 92 (3H, s, H-30 ) ;13C-NMR
(CD3OD,100 MHz)δ:65. 4 (C-1),31. 5 (C-2) ,
22. 0 (C-3) ,40. 9 (C-4) ,38. 2 (C-5) ,38. 7 (C-
6) ,51. 8 (C-7) ,48. 5 (C-8) ,40. 2 (C-9) ,78. 6
(C-10) ,47. 1 (C-11) ,24. 0 (C-12) ,25. 4 (C-
13) ,30. 0 (C-14) ,28. 8 (C-15) ,26. 7 (C-16) ,
36. 8 (C-17) ,25. 2 (C-18) ,21. 1 (C-19) ,21. 6
(C-20) ,23. 9 (C-21) ,213. 3 (C-22) ,51. 0 (C-
23) ,17. 7 (C-24) ,66. 2 (C-25) ,82. 2 (C-26) ,
26. 2 (C-27) ,34. 7 (C-8) ,106. 6 (C-29) ,24. 2
(C-30)。以上数据与文献[12-13]报道一致,故鉴
定化合物 2 为 secodaphniphylline。
化合物 3 无色块晶,1H-NMR (CD3OD,400
MHz)δ:7. 90 (1H,br s,H-5),7. 52 (1H,dd,J =
8. 6,6. 6 Hz,H-7) ,7. 42 (1H,d,J = 8. 6 Hz,H-
8) ,2. 44 (6H,s,H-11,12) ;13C-NMR (CD3OD,
100 MHz)δ:139. 8 (C-2),152. 2 (C-3) ,174. 0
(C-4) ,125. 1(C-5) ,135. 7(C-6) ,135. 6(C-7) ,
119. 0(C-8) ,155. 1 (C-9) ,123. 1 (C-10) ,20. 9
(C-11) ,15. 0 (C-12)。以上数据与文献[14]报道
一 致,故 鉴 定 化 合 物 3 为 2,6-dimethyl-3-
hydroxychromone。
化合物 4 无色方晶,ESI-MS m/z 342. 243 3
[M + H]+,1H-NMR (CD3OD,400 MHz)δ:3. 18
(1H,d,J = 17. 1 Hz,H-1),2. 70 (1H,m,H-2) ,
1. 62 (1H,m,H-3) ,1. 88 (1H,m,H-3) ,1. 47
(1H,m,H-4) ,1. 73 (1H,m,H-4) ,2. 04 (1H,
m,H-6) ,3. 55 (1H,d,J = 7. 9 Hz,H-7) ,2. 60
(1H,m,H-10) ,1. 39 (1H,m,H-11) ,1. 80 (1H,
m,H-11) ,1. 11 (1H,m,H-12) ,1. 78 (1H,m,
H-12) ,1. 67 (1H,m,H-13) ,1. 96 (1H,m,H-
13) ,1. 50 (1H,m,H-14) ,2. 40 (1H,m,H-14) ,
5. 64 (1H,d,J = 2. 6 Hz,H-15) ,2. 36 (2H,m,
H-16) ,1. 39 (1H,m,H-17) ,2. 26 (1H,m,H-
17) ,2. 41 (1H,m,H-18) ,3. 11 (1H,dd,J =
8. 6,13. 1 Hz,H-19) ,2. 14 (1H,dd,J = 13. 2,
17. 7 Hz,H-19) ,1. 07 (3H,d,J = 10. 2 Hz,H-
20) ,1. 33 (3H,s,H-21) ;13C-NMR (CD3OD,100
MHz)δ:70. 5 (C-1),48. 2 (C-2) ,21. 5 (C-3) ,
37. 5 (C-4) ,88. 5 (C-5) ,49. 4 (C-6) ,57. 8 (C-
7) ,53. 2 (C-8) ,145. 2 (C-9) ,39. 2 (C-10) ,31. 5
(C-11) ,21. 1 (C-12) ,30. 5 (C-13) ,28. 3 (C-
14) ,129. 4 (C-15) ,32. 7 (C-16) ,33. 7 (C-17) ,
36. 5 (C-18) ,60. 4 (C-19) ,13. 0 (C-20) ,19. 9
(C-21) ,175. 7 (C-22)。以上数据与文献[15]报道
一致,故鉴定化合物 4 为 deoxycalyciphylline B。
化合 物 5 淡 黄 色 油 状 物,ESI-MS m/z
386. 233 1[M + H]+,1H-NMR (CD3OD,600 MHz)
δ:2. 34 (1H,m,H-2),0. 88 (1H,m,H-3) ,2. 32
(1H,m,H-3) ,3. 69 (1H,br s,H-4) ,2. 76 (1H,
m,H-6) ,3. 10 (1H,t,J = 10. 9 Hz,H-7) ,3. 24
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(1H,m,H-7),1. 95 (1H,m,H-11) ,2. 06 (1H,
m,H-11) ,1. 49 (1H,m,H-12) ,1. 83 (2H,m,
H-12,16) ,2. 55 (1H,m,H-13) ,2. 69 (1H,m,
H-13) ,2. 70 (1H,m,H-14) ,3. 30 (1H,m,H-
15) ,1. 24 (1H,m,H-16) ,2. 29 (1H,dd,J =
10. 8,16. 6 Hz,H-17) ,2. 52 (1H,m,H-17) ,2. 40
(1H,m,H-18) ,2. 92(1H,dd,J = 8. 8,13. 5 Hz,
H-19) ,3. 45 (1H,dd,J = 6. 7,13. 4 Hz,H-19) ,
1. 11 (3H,d,J = 6. 9 Hz,H-20) ,1. 48 (3H,s,H-
21) ,3. 53 (3H,s,H-23) ;13C-NMR (CD3OD,150
MHz)δ:215. 9 (C-1),43. 6 (C-2) ,19. 5 (C-3) ,
89. 5 (C-4) ,62. 7 (C-5) ,49. 5 (C-6) ,74. 4 (C-
7) ,52. 8 (C-8) ,141. 0 (C-9) ,140. 9 (C-10) ,
27. 1 (C-11) ,29. 9 (C-12) ,41. 6 (C-13) ,42. 7
(C-14) ,54. 2 (C-15) ,28. 2 (C-16) ,41. 5 (C-
17) ,32. 7 (C-18) ,67. 4 (C-19) ,19. 3 (C-20) ,
27. 7 (C-21) ,176. 0 (C-22) ,51. 8 (C-23)。以上
数据与文献[16]报道一致,故鉴定化合物 5 为
calyciphylline A。
化合物 6 白色粉末,ESI-MS m/z 346. 274 6
[M + H]+,1H-NMR (CD3OD,600 MHz)δ:3. 43
(1H,s,H-1),1. 46 (1H,m,H-2) ,1. 38 (1H,
m,H-3) ,1. 82 (4H,m,H-3,4,11,12) ,1. 31
(1H,m,H-4) ,2. 13 (1H,t,J = 5. 3 Hz,H-6) ,
3. 07 (1H,d,J = 4. 5 Hz,H-7) ,2. 00 (1H,m,H-
9) ,1. 74 (2H,m,H-11,H-17) ,1. 61 (1H,m,H-
12) ,1. 72 (2H,m,H-13) ,2. 05 (2H,m,H-14,
15) ,2. 25 (1H,m,H-14) ,1. 52 (1H,m,H-15) ,
1. 55 (1H,m,H-16) ,1. 78 (2H,m H-16,17) ,
1. 44 (1H,m,H-18) ,1. 05 (3H,d,J = 6. 1 Hz,
H-19) ,1. 00 (3H,d,J = 6. 1 Hz,H-20) ,0. 92
(3H,s,H-21) ;13C-NMR (CD3OD,150 MHz)δ:
51. 7 (C-1),42. 0 (C-2) ,20. 9 (C-3) ,37. 2 (C-
4) ,45. 8 (C-5) ,59. 1 (C-6) ,37. 7 (C-7) ,54. 1
(C-8) ,49. 7 (C-9) ,40. 7 (C-10) ,23. 7 (C-11) ,
30. 1 (C-12) ,33. 9 (C-13) ,30. 6 (C-14) ,26. 8
(C-15) ,36. 2 (C-16) ,29. 4 (C-17) ,20. 8 (C-
18) ,20. 7 (C-19) ,20. 9 (C-20) ,181. 6 (C-21)。
以上数据与文献[17-18]报道一致,故鉴定化合物 6
为 daphnezzomine M。
化合物 7 粉末,ESI-MS m/z 342. 243 3 [M +
H]+,1H-NMR (CD3OD,600 MHz)δ:3. 15 (1H,
d,J = 4. 2 Hz,H-1),2. 70 (1H,m,H-2) ,1. 68
(1H,m,H-3) ,1. 95 (1H,m,H-3) ,1. 71 (1H,
m,H-4) ,2. 03 (1H,m,H-4) ,2. 33 (1H,m,H-
6) ,3. 87 (1H,d,J = 6. 9 Hz,H-7) ,2. 60 (1H,
m,H-10) ,1. 06 (1H,d,J = 6. 7 Hz,H-11) ,1. 97
(1H,m,H-11) ,1. 74 (2H,m,H-12,13) ,1. 91
(1H,m,H-12) ,2. 02 (1H,m,H-13) ,2. 78 (2H,
dd,J = 6. 3,8. 4 Hz,H-14) ,5. 70 (1H,d,J = 1. 6
Hz,H-15) ,1. 51 (1H,m,H-16) ,2. 30 (2H,m,
H-16,17) ,2. 17 (1H,m,H-17) ,2. 41 (1H,m,
H-18) ,2. 99 (1H,dd,J = 7. 8,10. 6 Hz,H-19) ,
2. 58 (1H,m,H-19) ,1. 06 (3H,d,J = 6. 7 Hz,
H-20) ,1. 51 (3H,s,H-21) ;13C-NMR (CD3OD,
150 MHz)δ:75. 6 (C-1),49. 7 (C-2) ,23. 4 (C-
3) ,33. 9 (C-4) ,87. 2 (C-5) ,44. 2 (C-6) ,60. 8
(C-7) ,50. 1 (C-8) ,147. 5 (C-9) ,42. 8 (C-10) ,
33. 2 (C-11) ,25. 3 (C-12) ,30. 2 (C-13) ,26. 9
(C-14) ,130. 1 (C-15) ,31. 6 (C-16) ,31. 4 (C-
17) ,36. 8 (C-18) ,61. 4 (C-19) ,14. 5 (C-20) ,
22. 5 (C-21) ,174. 8 (C-22)。以上数据与文献
[15] 报 道 一 致,故 鉴 定 化 合 物 7 为
deoxyisocalyciphylline B。
4 抗胆碱酯酶活性
采用刘伟等[19]建立的 UPLC-MS /MS 法对化合
物 1 ~7抗 AChE和 BChE 活性进行测定。操作如下:
样品组首先加入新配好的受试样品 10 μL,然后加入
酶溶液(AChE为0. 003 5 U·mL -1,BChE为0. 008 U·
mL -1)40 μL 混合,放置 15 min,加入底物 (ACh 为
5. 505 μmol·L -1,BCh 为 7. 152 μmol·L -1)50 μL,25
℃反应 20 min,立即用含有 1. 899 μmol·L -1 IS 的冰
乙腈 (0 °C)300 μL 终止反应,15 000 × g 离心 10
min,取上清液采用 UPLC-MS /MS 法对生成的 Ch 含
量进行检测。空白组仅在样品组基础上将最先加入
的受试样品 10 μL换成缓冲溶液 10 μL,其余步骤均
同样品组。抑制率计算公式为:抑制率 =(C空白组 -
C样品组)/C空白组(100%,C空白组表示空白组生成 Ch的含
量,C样品组表示待测样品组生成 Ch的含量。半数抑制
浓度(IC50)通过 Prism 5软件进行计算。
最终完成各化合物抗 AChE 和 BChE 活性
(IC50)测定,结果见表 1,化合物 4 和 7 具有抗
AChE活性,IC50分别为(128. 83 ± 21. 41),(56. 15 ±
11. 02)μmol·L -1;化合物 2,4,5 和 7 具有抗 BChE
酶活性,IC50分别为(0. 31 ± 0. 15),(54. 53 ± 3. 33) ,
(811. 17 ± 22. 49) ,(8. 13 ± 0. 78)μmol·L -1。
5 结论与讨论
本文通过对牛耳枫乙酸乙酯及正丁醇部位的主
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2016 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 22,No. 20
Oct.,2016
表 1 不同化合物对 AChE和 BChE的 IC50抑制活性(珋x ± s)
Table 1 AChE and BChE inhibitory activities of various
compounds(珋x ± s) μmol·L -1
化合物 AChE BChE
加兰他敏 0. 05 ± 0. 00 0. 25 ± 0. 00
1 > 1 000 > 1 000
2 > 1 000 0. 31 ± 0. 15
3 > 1 000 > 1 000
4 128. 83 ± 21. 41 54. 53 ± 3. 33
5 > 1 000 811. 17 ± 22. 49
6 > 1 000 > 1 000
7 56. 15 ± 11. 02 8. 13 ± 0. 78
要化学成分的分析,分离、鉴定了 7 个化合物,发现
化合物 1 和 3 为首次从该植物中分离获得。采用
UPLC-MS /MS法对分离获得的化合物进行体外抗
AChE和 BChE 活性研究,发现化合物 4 与化合物 7
均同时具有抗 AChE和抗 BChE活性,其中化合物 4
在两方面的活性均为中等强度,而化合物 7 具有中
等强度的抗 AChE 活性及较强的抗 BChE 活性;而
化合物 2 与 5 均仅具有抗 BChE活性,并且化合物 2
活性非常强,与阳性药加兰他敏 [IC50 (0. 25 ±
0. 00)μmol·L -1]的活性相当,具有开发成为选择
性 BChE抑制剂的潜力。本研究结果同时可以为牛
耳枫用于 AD等重大疾病的防治提供科学依据。
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[责任编辑 顾雪竹]
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