全 文 ：［收稿日期］ 20160619(007)
［基金项目］ 中医药行业科研专项(201307002)
［第一作者］ 王永丽，硕士，助理实验师，从事中药活性成分与质量标准研究，Tel:021-50271706，E-mail:ylwang521@ 126. com
［通讯作者］ * 侴桂新，博士，教授，博士生导师，从事中药活性成分与质量标准研究，Tel:021-50271706，E-mail:chouguixinzyb@ 126. com
牛耳枫的化学成分及抗胆碱酯酶活性分析
王永丽1，2，刘伟1，3，尉小慧1，侴桂新1，2*
(1. 上海中医药大学 中药研究所，上海 201203;2. 上海中药标准化研究中心，
上海 201203;3. 上海中医药大学 附属曙光医院 肝病研究所，上海 201203)
［摘要］ 目的:研究牛耳枫水提物的化学成分及其抗胆碱脂酶活性。方法:采用硅胶柱色谱，Sephadex LH-20 柱色谱，
MCI柱色谱和制备液相色谱等方法对牛耳枫的化学成分进行分离纯化，并根据理化性质、核磁共振谱法、质谱法以及参考相
关文献鉴定化合物结构;采用 UPLC-MS /MS方法测定化合物的抗乙酰胆碱酯酶 (AChE)及丁酰胆碱酯酶 (BChE)活性。结
果:从牛耳枫乙酸乙酯部位和正丁醇部位分离得到 7 个化合物，分别鉴定为 5-oxymaltol (1)，secodaphniphylline (2) ，2，6-
dimethyl-3-hydroxychromone (3) ，deoxycalyciphylline B (4) ，calyciphylline A (5) ，daphnezzomine M (6) ，deoxyisocalyciphylline B
(7)。其中化合物 4 和 7 具有抗 AChE活性，半数抑制浓度(IC50)分别为(128. 83 ± 21. 41)μmol·L
－1和(56. 15 ± 11. 02)μmol·
L －1;化合物 2，4，5 和 7 具有抗 BChE酶活性，IC50分别为(0. 31 ± 0. 15)，(54. 53 ± 3. 33) ，(811. 17 ± 22. 49)μmol·L
－1和(8. 13 ±
0. 78)μmol·L －1。结论:化合物 1 和 3 为首次从该植物中分离获得，化合物 2 和化合物 7 具有较强的抗 BChE 活性，具有开发
为胆碱酯酶抑制剂的潜力。
［关键词］ 牛耳枫;化学成分;乙酰胆碱酯酶;丁酰胆碱酯酶;胆碱酯酶抑制剂
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2016)20-0053-05
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2016200053
Chemical Constituents from Daphniphyllum calycinum and
Their Anti-Cholinesterase Activity
WANG Yong-li1，2，LIU Wei1，3，WEI Xiao-hui1，CHOU Gui-xin1，2*
(1. Institute of Chinese Materia Medica，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (TCM)，Shanghai
201203，China;2. Shanghai Ｒ＆D Centre for Standardization of Chinese Medicines，Shanghai 201203，
China;3. Institute of Liver Diseases，Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of
TCM，Shanghai 201203，China)
［Abstract］ Objective:To study the chemical components of Daphniphyllum calycinum and their anti-
cholinesterase activity． Method:The chemical constituents of D． calycinum were isolated and purified by silica gel
column chromatography，Sephadex LH-20 column chromatography，MCI column chromatography and preparative
HPLC． Their structures were identified according to their physicochemical properties，nuclear magnetic resonance
spectroscopy (NMＲ ) ，mass-spectrography (MS ) and literature analysis． Furthermore， the anti-
acetylcholinesterase and anti-butyrylcholinesterase activities of compounds were measured by UPLC-MS /MS
method． Ｒesult:Eight compounds were isolated from D． calycinum and their structures were identified as 5-
oxymaltol (1) ，secodaphniphylline (2) ，2，6-dimethyl-3-hydroxychromone (3) ，deoxycalyciphylline B (4) ，
calyciphylline A (5) ，daphnezzomine M (6) ，and deoxyisocalyciphylline B (7)． Compound 4 and 7 were showed
anti-acetylcholinesterase activity，the IC50 values of compound 4 and 7 were (128. 83 ± 21. 41)μmol·L
－1 and
(56. 15 ± 11. 02)μmol·L －1，respectively． And compound 2，4，5 and 7 were showed anti-butyrylcholinesterase
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activity，the IC50 values of compound 2，4，5 and 7 were (0. 31 ± 0. 15)μmol·L
－1，(54. 53 ± 3. 33)μmol·
L －1，(811. 17 ± 22. 49)μmol·L －1 and (8. 13 ± 0. 78)μmol·L －1，respectively． Conclusion:Compound 1
and 3 were isolated from this plant for the first time． Compound 2 and 7 were showed strong anti-
butyrylcholinesterase activity，and were the potential of cholinesterase inhibitors．
［Key words ］ Daphniphyllum calycinum; chemical constituents; acetylcholinesterase;
butyrylcholinesterase;cholinesterase inhibitors
阿尔兹海默病 (Alzheimer’s disease，AD)是一
种常见的老年性神经退行性疾病，表现为认知和神
经精神方面的症状。最近研究表明，AD 患者认知
功能衰退的主要原因是大脑皮质等区域胆碱能神经
递质 (乙酰胆碱 ACh)持续下降［1-2］。乙酰胆碱酯
酶 (AChE)和丁酰胆碱酯酶 (BChE)是水解突触间
隙中胆碱能神经递质乙酰胆碱 (ACh)的水解酶。
尽管病因尚不明确，但在 AD 发展的不同阶段控制
胆碱酯酶 (ChE)的活性是非常有必要的。其中有
效的治疗策略是通过抑制 AChE 和 BChE 的活性从
而提高脑内 ACh 的水平。目前，AChE 和 BChE 的
抑制剂已被批准用于治疗 AD，如他克林、多奈哌
齐、新斯的明、加兰他敏［3］。从天然植物中分离或
对活性化合物进行结构修饰是发现和获得新的胆碱
酯酶抑制剂最主要的方式，发现具有防止和延迟神
经退化病理过程及副作用更小的候选药物一直是医
药化学家的目标。
牛耳枫 (Daphniphyllum calycinum)又称南岭虎
皮楠、老虎耳、牛耳铃，为虎皮楠科植物［4］。常绿灌
木，主要分布于云贵、海南、两广等地，是我国传统的
民间药用植物。其功效为祛风止痛、解毒消肿，主治
风湿骨痛、跌打骨折、无名肿痛、毒蛇咬伤、久
痢［5-6］。临床多用于急性肠胃炎、急性湿疹等的治
疗［7］。文献报道牛耳枫的化学成分主要为生物碱
和黄酮类等成分，其中生物碱为其主要的化学成分，
具有复杂的多环结构和新颖的骨架，并且这种结构
的化合物仅在虎皮楠属植物中发现，具有较强的专
属性。对牛耳枫药理活性的研究主要集中在生物碱
的抗肿瘤活性和黄酮类化合物的抗氧化性研究方
面，但并未发现活性很好的化合物［8-9］。课题组前
期预实验发现牛耳枫水提物具有显著的抗 AChE 及
抗 BChE 活性，具有开发成为胆碱酯酶抑制剂用于
AD防治的潜力。因此本研究将对牛耳枫水提取物
化学成分进行分离制备，并评价其抗 AChE 及抗
BChE活性，以期发现活性较好的候选或先导化合
物。最终本实验从牛耳枫水提取物中分离鉴定了 5
个生物碱类成分和 2 个其他类成分，分别为 5-
oxymaltol (1)，secodaphniphylline (2) ，2 6-dimethyl-
3-hydroxyc hromone (3) ，deoxycalyciphylline B (4) ，
calyciphylline A (5 ) ，daphnezzomine M (6 ) ，
deoxyisocalyciphylline B (7)。通过 UPLC-MS /MS 法
对分离获得的化合物抗 AChE 及抗 BChE 活性进行
测定，发现化合物 4 和 7 具有一定的抗 AChE 活性，
化合物 2，4，7 表现出较强的抗 BChE活性。
1 材料
乙酰 胆 碱 酯 酶 (AChE) 来 自 于 电 鳗
Electrophorus electricus，丁酰胆碱酯酶(BChE，批号
078K7015)来自于马血清、氯化乙酰胆碱 (ACh，批
号 100909957)，氯 化 丁 酰 胆 碱 (BCh，批 号
SLBB084)，氯化胆碱 (Ch，批号 101244069)，矮壮
素 (内标，IS 批号 007-003-00-6)和加兰他敏
(galanthamine，批号 PHＲ1623)均购买于 Sigma
公司。
ACQUITYTM UPLC 系 统 (美 国 Waters)，
Micromass Quattro Premier XE 型串联三重四级杆质
谱 (美国 Waters)，ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱
(2. 1 mm ×100 mm，1. 8 μm)。Finnigan LCQTM离子
阱质谱仪 (ESI 离子源，美国 Thermo Finnigan)，AV-
400，500 型核磁共振光谱仪 (Germany，Bruker) ，
EYELA N-1000 型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限
公司)，CA-1111 型冷阱 (上海爱朗仪器有限公司)，
BT25S型电子分析天平 (北京赛多利斯公司)。
HG/T2354-92 型薄层色谱硅胶 (青岛海洋化工
有限公司，) ，柱薄层硅胶 (青岛海洋化工厂，100 ～
200，200 ～ 300 目，批号 0120171)，HSGF254硅胶预制
板 (烟台江友硅胶开发有限公司)，HSGF254高效制
备硅胶板 (烟台江友硅胶开发有限公司)，Sephadex
LH-20 型羟甲基葡聚糖凝胶 (瑞典通用电气医疗集
团)，ODS (美国赛分科技，40 ～ 60 μm);MCI小孔树
脂凝胶(日木三菱，75 ～ 150 μm)。
牛耳枫药材由上海中医药大学侴桂新教授鉴定
为虎皮楠科虎牛耳枫 Daphniphyllum calycinum 的干
燥地上部分，牛耳枫水提取物干浸膏由广西柳州中
药厂提供(批号 GXLZ20140813-02)。
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2 提取与分离
取牛耳枫水提取物干浸膏 5 kg，加水约 55 L制
成混悬溶液，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取。合并各
部分萃取液，浓缩得各部位浸膏。将乙酸乙酯部位
用乙醇溶解，硅胶拌样，通过硅胶柱色谱 (石油醚-
乙酸乙酯系统洗脱)得到 13 个洗脱部位，每个部位
通过反复硅胶柱色谱，Sephadex LH-20 凝胶柱色谱，
ODS柱色谱等，得到化合物 1，3。将正丁醇部位加
氨水调 pH 9 ～ 10，依次用二氯甲烷、正丁醇萃取，合
并各部分萃取液，浓缩得各部位浸膏。将二氯甲烷
部位首先经 MCI 柱色谱粗分为 12 个部位，然后经
反复 Sephadex LH-20 凝胶柱色谱，制备薄层，ODS
柱色谱，得到化合物 4 ～ 7。
3 结构鉴定
化合物 1 近无色棱晶 (甲醇)，1H-NMＲ
(DMSO-d6，400 MHz)δ:8. 93 (1H，s，H-3)，8. 76
(1H，s，H-5) ，7. 93 (1H，s，H-6) ，2. 21 (3H，s，
H-7) ;13C-NMＲ (DMSO-d6，100 MHz)δ:141. 3 (C-
2)，149. 2 (C-3) ，168. 5 (C-4) ，144. 2 (C-5) ，
139. 0 (C-6) ，14. 5 (C-7)。以上数据与文献报道
［10-11］基本一致，故鉴定化合物 1 为 5-oxymaltol。
化合物 2 无色晶体，ESI-MS m/z 470. 363 2
［M + H］+，1H-NMＲ (CD3OD，400 MHz)δ:3. 43
(1H，br s，H-1)，1. 64 (1H，m，H-2) ，1. 78 (1H，
m，H-3) ，2. 05 (3H，m，H-3，4，15) ，1. 68 (3H，m，
H-4，6，9) ，2. 66 (1H，m，H-7) ，3. 15 (1H，m，H-
11) ，3. 64 (1H，m，H-11) ，1. 51 (1H，m，H-12) ，
1. 54 (2H，m，H-12，14) ，2. 08 (2H，m，H-13) ，
1. 98 (1H，m，H-14) ，1. 81 (1H，m，H-15) ，1. 71
(1H，m，H-16) ，2. 02 (1H，m，H-16) ，2. 97 (1H，
m，H-17) ，3. 06 (1H，m，H-17) ，1. 09 (1H，m，H-
18) ，1. 04 (3H，d，J = 6. 0 Hz，H-19) ，1. 10 (3H，
d，J = 4. 4 Hz，H-20) ，1. 37 (3H，s，H-21) ，0. 82
(3H，s，H-24) ，3. 61 (1H，d，J = 12. 1 Hz，H-25) ，
4. 30 (1H，d，J = 12. 0 Hz，H-25) ，4. 63 (1H，d，
J = 5. 6 Hz，H-26) ，1. 88 (1H，m，H-27) ，2. 08
(1H，m，H-27) ，1. 92 (1H，m，H-28) ，2. 12 (1H，
m， H-28 ) ，1. 92 (3H， s， H-30 ) ;13C-NMＲ
(CD3OD，100 MHz)δ:65. 4 (C-1)，31. 5 (C-2) ，
22. 0 (C-3) ，40. 9 (C-4) ，38. 2 (C-5) ，38. 7 (C-
6) ，51. 8 (C-7) ，48. 5 (C-8) ，40. 2 (C-9) ，78. 6
(C-10) ，47. 1 (C-11) ，24. 0 (C-12) ，25. 4 (C-
13) ，30. 0 (C-14) ，28. 8 (C-15) ，26. 7 (C-16) ，
36. 8 (C-17) ，25. 2 (C-18) ，21. 1 (C-19) ，21. 6
(C-20) ，23. 9 (C-21) ，213. 3 (C-22) ，51. 0 (C-
23) ，17. 7 (C-24) ，66. 2 (C-25) ，82. 2 (C-26) ，
26. 2 (C-27) ，34. 7 (C-8) ，106. 6 (C-29) ，24. 2
(C-30)。以上数据与文献［12-13］报道一致，故鉴
定化合物 2 为 secodaphniphylline。
化合物 3 无色块晶，1H-NMＲ (CD3OD，400
MHz)δ:7. 90 (1H，br s，H-5)，7. 52 (1H，dd，J =
8. 6，6. 6 Hz，H-7) ，7. 42 (1H，d，J = 8. 6 Hz，H-
8) ，2. 44 (6H，s，H-11，12) ;13C-NMＲ (CD3OD，
100 MHz)δ:139. 8 (C-2)，152. 2 (C-3) ，174. 0
(C-4) ，125. 1(C-5) ，135. 7(C-6) ，135. 6(C-7) ，
119. 0(C-8) ，155. 1 (C-9) ，123. 1 (C-10) ，20. 9
(C-11) ，15. 0 (C-12)。以上数据与文献［14］报道
一 致，故 鉴 定 化 合 物 3 为 2，6-dimethyl-3-
hydroxychromone。
化合物 4 无色方晶，ESI-MS m/z 342. 243 3
［M + H］+，1H-NMＲ (CD3OD，400 MHz)δ:3. 18
(1H，d，J = 17. 1 Hz，H-1)，2. 70 (1H，m，H-2) ，
1. 62 (1H，m，H-3) ，1. 88 (1H，m，H-3) ，1. 47
(1H，m，H-4) ，1. 73 (1H，m，H-4) ，2. 04 (1H，
m，H-6) ，3. 55 (1H，d，J = 7. 9 Hz，H-7) ，2. 60
(1H，m，H-10) ，1. 39 (1H，m，H-11) ，1. 80 (1H，
m，H-11) ，1. 11 (1H，m，H-12) ，1. 78 (1H，m，
H-12) ，1. 67 (1H，m，H-13) ，1. 96 (1H，m，H-
13) ，1. 50 (1H，m，H-14) ，2. 40 (1H，m，H-14) ，
5. 64 (1H，d，J = 2. 6 Hz，H-15) ，2. 36 (2H，m，
H-16) ，1. 39 (1H，m，H-17) ，2. 26 (1H，m，H-
17) ，2. 41 (1H，m，H-18) ，3. 11 (1H，dd，J =
8. 6，13. 1 Hz，H-19) ，2. 14 (1H，dd，J = 13. 2，
17. 7 Hz，H-19) ，1. 07 (3H，d，J = 10. 2 Hz，H-
20) ，1. 33 (3H，s，H-21) ;13C-NMＲ (CD3OD，100
MHz)δ:70. 5 (C-1)，48. 2 (C-2) ，21. 5 (C-3) ，
37. 5 (C-4) ，88. 5 (C-5) ，49. 4 (C-6) ，57. 8 (C-
7) ，53. 2 (C-8) ，145. 2 (C-9) ，39. 2 (C-10) ，31. 5
(C-11) ，21. 1 (C-12) ，30. 5 (C-13) ，28. 3 (C-
14) ，129. 4 (C-15) ，32. 7 (C-16) ，33. 7 (C-17) ，
36. 5 (C-18) ，60. 4 (C-19) ，13. 0 (C-20) ，19. 9
(C-21) ，175. 7 (C-22)。以上数据与文献［15］报道
一致，故鉴定化合物 4 为 deoxycalyciphylline B。
化合 物 5 淡 黄 色 油 状 物，ESI-MS m/z
386. 233 1［M + H］+，1H-NMＲ (CD3OD，600 MHz)
δ:2. 34 (1H，m，H-2)，0. 88 (1H，m，H-3) ，2. 32
(1H，m，H-3) ，3. 69 (1H，br s，H-4) ，2. 76 (1H，
m，H-6) ，3. 10 (1H，t，J = 10. 9 Hz，H-7) ，3. 24
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(1H，m，H-7)，1. 95 (1H，m，H-11) ，2. 06 (1H，
m，H-11) ，1. 49 (1H，m，H-12) ，1. 83 (2H，m，
H-12，16) ，2. 55 (1H，m，H-13) ，2. 69 (1H，m，
H-13) ，2. 70 (1H，m，H-14) ，3. 30 (1H，m，H-
15) ，1. 24 (1H，m，H-16) ，2. 29 (1H，dd，J =
10. 8，16. 6 Hz，H-17) ，2. 52 (1H，m，H-17) ，2. 40
(1H，m，H-18) ，2. 92(1H，dd，J = 8. 8，13. 5 Hz，
H-19) ，3. 45 (1H，dd，J = 6. 7，13. 4 Hz，H-19) ，
1. 11 (3H，d，J = 6. 9 Hz，H-20) ，1. 48 (3H，s，H-
21) ，3. 53 (3H，s，H-23) ;13C-NMＲ (CD3OD，150
MHz)δ:215. 9 (C-1)，43. 6 (C-2) ，19. 5 (C-3) ，
89. 5 (C-4) ，62. 7 (C-5) ，49. 5 (C-6) ，74. 4 (C-
7) ，52. 8 (C-8) ，141. 0 (C-9) ，140. 9 (C-10) ，
27. 1 (C-11) ，29. 9 (C-12) ，41. 6 (C-13) ，42. 7
(C-14) ，54. 2 (C-15) ，28. 2 (C-16) ，41. 5 (C-
17) ，32. 7 (C-18) ，67. 4 (C-19) ，19. 3 (C-20) ，
27. 7 (C-21) ，176. 0 (C-22) ，51. 8 (C-23)。以上
数据与文献［16］报道一致，故鉴定化合物 5 为
calyciphylline A。
化合物 6 白色粉末，ESI-MS m/z 346. 274 6
［M + H］+，1H-NMＲ (CD3OD，600 MHz)δ:3. 43
(1H，s，H-1)，1. 46 (1H，m，H-2) ，1. 38 (1H，
m，H-3) ，1. 82 (4H，m，H-3，4，11，12) ，1. 31
(1H，m，H-4) ，2. 13 (1H，t，J = 5. 3 Hz，H-6) ，
3. 07 (1H，d，J = 4. 5 Hz，H-7) ，2. 00 (1H，m，H-
9) ，1. 74 (2H，m，H-11，H-17) ，1. 61 (1H，m，H-
12) ，1. 72 (2H，m，H-13) ，2. 05 (2H，m，H-14，
15) ，2. 25 (1H，m，H-14) ，1. 52 (1H，m，H-15) ，
1. 55 (1H，m，H-16) ，1. 78 (2H，m H-16，17) ，
1. 44 (1H，m，H-18) ，1. 05 (3H，d，J = 6. 1 Hz，
H-19) ，1. 00 (3H，d，J = 6. 1 Hz，H-20) ，0. 92
(3H，s，H-21) ;13C-NMＲ (CD3OD，150 MHz)δ:
51. 7 (C-1)，42. 0 (C-2) ，20. 9 (C-3) ，37. 2 (C-
4) ，45. 8 (C-5) ，59. 1 (C-6) ，37. 7 (C-7) ，54. 1
(C-8) ，49. 7 (C-9) ，40. 7 (C-10) ，23. 7 (C-11) ，
30. 1 (C-12) ，33. 9 (C-13) ，30. 6 (C-14) ，26. 8
(C-15) ，36. 2 (C-16) ，29. 4 (C-17) ，20. 8 (C-
18) ，20. 7 (C-19) ，20. 9 (C-20) ，181. 6 (C-21)。
以上数据与文献［17-18］报道一致，故鉴定化合物 6
为 daphnezzomine M。
化合物 7 粉末，ESI-MS m/z 342. 243 3 ［M +
H］+，1H-NMＲ (CD3OD，600 MHz)δ:3. 15 (1H，
d，J = 4. 2 Hz，H-1)，2. 70 (1H，m，H-2) ，1. 68
(1H，m，H-3) ，1. 95 (1H，m，H-3) ，1. 71 (1H，
m，H-4) ，2. 03 (1H，m，H-4) ，2. 33 (1H，m，H-
6) ，3. 87 (1H，d，J = 6. 9 Hz，H-7) ，2. 60 (1H，
m，H-10) ，1. 06 (1H，d，J = 6. 7 Hz，H-11) ，1. 97
(1H，m，H-11) ，1. 74 (2H，m，H-12，13) ，1. 91
(1H，m，H-12) ，2. 02 (1H，m，H-13) ，2. 78 (2H，
dd，J = 6. 3，8. 4 Hz，H-14) ，5. 70 (1H，d，J = 1. 6
Hz，H-15) ，1. 51 (1H，m，H-16) ，2. 30 (2H，m，
H-16，17) ，2. 17 (1H，m，H-17) ，2. 41 (1H，m，
H-18) ，2. 99 (1H，dd，J = 7. 8，10. 6 Hz，H-19) ，
2. 58 (1H，m，H-19) ，1. 06 (3H，d，J = 6. 7 Hz，
H-20) ，1. 51 (3H，s，H-21) ;13C-NMＲ (CD3OD，
150 MHz)δ:75. 6 (C-1)，49. 7 (C-2) ，23. 4 (C-
3) ，33. 9 (C-4) ，87. 2 (C-5) ，44. 2 (C-6) ，60. 8
(C-7) ，50. 1 (C-8) ，147. 5 (C-9) ，42. 8 (C-10) ，
33. 2 (C-11) ，25. 3 (C-12) ，30. 2 (C-13) ，26. 9
(C-14) ，130. 1 (C-15) ，31. 6 (C-16) ，31. 4 (C-
17) ，36. 8 (C-18) ，61. 4 (C-19) ，14. 5 (C-20) ，
22. 5 (C-21) ，174. 8 (C-22)。以上数据与文献
［15］ 报 道 一 致，故 鉴 定 化 合 物 7 为
deoxyisocalyciphylline B。
4 抗胆碱酯酶活性
采用刘伟等［19］建立的 UPLC-MS /MS 法对化合
物 1 ～7抗 AChE和 BChE 活性进行测定。操作如下:
样品组首先加入新配好的受试样品 10 μL，然后加入
酶溶液(AChE为0. 003 5 U·mL －1，BChE为0. 008 U·
mL －1)40 μL 混合，放置 15 min，加入底物 (ACh 为
5. 505 μmol·L －1，BCh 为 7. 152 μmol·L －1)50 μL，25
℃反应 20 min，立即用含有 1. 899 μmol·L －1 IS 的冰
乙腈 (0 °C)300 μL 终止反应，15 000 × g 离心 10
min，取上清液采用 UPLC-MS /MS 法对生成的 Ch 含
量进行检测。空白组仅在样品组基础上将最先加入
的受试样品 10 μL换成缓冲溶液 10 μL，其余步骤均
同样品组。抑制率计算公式为:抑制率 =(C空白组 －
C样品组)/C空白组(100%，C空白组表示空白组生成 Ch的含
量，C样品组表示待测样品组生成 Ch的含量。半数抑制
浓度(IC50)通过 Prism 5软件进行计算。
最终完成各化合物抗 AChE 和 BChE 活性
(IC50)测定，结果见表 1，化合物 4 和 7 具有抗
AChE活性，IC50分别为(128. 83 ± 21. 41)，(56. 15 ±
11. 02)μmol·L －1;化合物 2，4，5 和 7 具有抗 BChE
酶活性，IC50分别为(0. 31 ± 0. 15)，(54. 53 ± 3. 33) ，
(811. 17 ± 22. 49) ，(8. 13 ± 0. 78)μmol·L －1。
5 结论与讨论
本文通过对牛耳枫乙酸乙酯及正丁醇部位的主
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第 22 卷第 20 期
2016 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 22，No． 20
Oct．，2016
表 1 不同化合物对 AChE和 BChE的 IC50抑制活性(珋x ± s)
Table 1 AChE and BChE inhibitory activities of various
compounds(珋x ± s) μmol·L －1
化合物 AChE BChE
加兰他敏 0. 05 ± 0. 00 0. 25 ± 0. 00
1 ＞ 1 000 ＞ 1 000
2 ＞ 1 000 0. 31 ± 0. 15
3 ＞ 1 000 ＞ 1 000
4 128. 83 ± 21. 41 54. 53 ± 3. 33
5 ＞ 1 000 811. 17 ± 22. 49
6 ＞ 1 000 ＞ 1 000
7 56. 15 ± 11. 02 8. 13 ± 0. 78
要化学成分的分析，分离、鉴定了 7 个化合物，发现
化合物 1 和 3 为首次从该植物中分离获得。采用
UPLC-MS /MS法对分离获得的化合物进行体外抗
AChE和 BChE 活性研究，发现化合物 4 与化合物 7
均同时具有抗 AChE和抗 BChE活性，其中化合物 4
在两方面的活性均为中等强度，而化合物 7 具有中
等强度的抗 AChE 活性及较强的抗 BChE 活性;而
化合物 2 与 5 均仅具有抗 BChE活性，并且化合物 2
活性非常强，与阳性药加兰他敏 ［IC50 (0. 25 ±
0. 00)μmol·L －1］的活性相当，具有开发成为选择
性 BChE抑制剂的潜力。本研究结果同时可以为牛
耳枫用于 AD等重大疾病的防治提供科学依据。
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［责任编辑 顾雪竹］
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第 22 卷第 20 期
2016 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 22，No． 20
Oct．，2016