全 文 ：毒扁豆碱鼻腔给药对小鼠学习记忆功能的影响
李　辉　董兰娟 　张华明　 (大理医学院药理学教研室　大理 671000)
【摘要】　目的: 研究毒扁豆碱鼻腔给药对小鼠学习记忆功能的影响。 方法: 采用水迷宫和被动回避性条件反应 (跳台法 ,避暗
法 )试验观察毒扁豆碱鼻腔给药对小鼠学习记忆功能的影响 ,并测定鼻腔给药后血浆和脑组织内乙酰胆碱酯酶 ( Ach E)的活
力。结果: 毒扁豆碱鼻腔给药对东莨菪碱所致的记忆障碍有改善作用 ,并能明显降低血浆和大脑组织中 Ach E的活力。结论:毒
扁豆碱鼻腔给药对小鼠学习记忆功能有明显的促进作用。
【关键词】　毒扁豆碱 ;　鼻腔给药 ;　学习记忆 ;　乙酰胆碱酯酶
【中图分类号】R971+ . 9;　 R965　　【文献标识码】A　　【文章编号】1007-4406( 2001) 03-0165-03
Effects of physostigmine intranasal administration on learning and memory
function in mice
Li Hui, Dong Lanjuan
*
, Zhang Huaming　 (Department of Pharmacology , Dali Medical College , Dali
671000)
【ABSTRACT】　AIM: To study the inf luence of physostigmine ( Phy ) intranasal administration on learning
and memo ry function in mice. METHODS: The influence o f Phy int ranasal administration on learning and
memory function in mice w as investiga ted by wa ter maze test and passiv e avoidance responses test ( step-
down test and step-through test ) , a nd the acety lcholin esterase ( Ach E) activi ty o f the plasma and brain
w as measured after Phy int ranasal administ ration. RESULTS: Phy intranasal administ ration improved the
dysmnesia induced by scoplamine and decreased the Ach E activi ty o f the plasma and brain. CONCLU-
SION: Phy int ranasal administraton obviously improves learning and memo ry function in mice.
【KEY WORDS】　 physostigmine;　 int ranasal administ ra tion;　 learning memory;　 acetylcho lin esterase
　　鼻腔给药多为局部治疗 ,但目前已有少数滴鼻
剂用作全身性治疗 ,如安乃近、普萘洛尔及某些小分
子肽类药物等 [1 ]。 因鼻腔容量小加上某些药物刺激
性大等原因 ,鼻用制剂用于全身性治疗一直未被广
泛采用。毒扁豆碱 ( ph yso stigmine, Phy )为胆碱酯
酶抑制剂 ,有较强的促进学习记忆功能的作用 ,但口
服给药不良反应多且毒性明显而难以用于临床。由
于鼻腔给药可使药物经鼻黏膜吸收入血 ,且部分药
物经鼻腔与颅腔之间的筛孔直接进入颅内 ,有利于
药物在颅内发挥作用并减少不良反应的发生。 为此
我们就小鼠鼻腔给 Phy 后对东莨菪碱 ( scopo-
lamine, Scop)致学习记忆障碍的影响进行了研究。
1　材料和方法
1. 1 药物与试剂　氢溴酸东莨菪碱 (广州侨光制药
厂 ,批号 950504-5) ;水杨酸毒扁豆碱 (上海医药采
购供应站 ,批号 880305) ,用 0. 05 mol /L的磷酸缓
冲液 ( p H 6. 0)配成所需浓度 ;乙酰胆碱酯酶 ( AchE)
测定试剂盒 (南京建成生物工程研究所 ,批号
20000310) ,其余试剂均为分析纯。
1. 2 动物　昆明种小鼠 (云南省天然药物药理重点
实验室动物室 ,云南省实验动物质量合格证:
0000474) ,体重 ( 21± 1. 1) g,雌雄兼有 ,共 160只。
·165·　中国临床药学杂志　 CHINESE JOU RN AL OF CLIN ICAL PHARM ACY　 2001年第 10卷第 3期　
大理医学院药学专业 2000届毕业生
1. 3 仪器　 722型分光光度计 ,水迷宫 (自制 ) ,跳台
试验盒 (自制 ) ,避暗试验盒 (自制 )。
1. 4 实验方法
1. 4. 1 小鼠水迷宫试验 [2 ]　水迷宫规格为 40 cm×
57 cm× 25 cm ,水深 13 cm ,水温 ( 27± 1)℃。实验时
将小鼠随机分成 5组 ,每组 12只 ,即:生理盐水对照
组 , Scop组 , Phy灌胃组 , Phy鼻腔给药小剂量组及
大剂量组 ; Phy灌胃及鼻腔给药组在迷宫训练前 30
min分别给 Phy ,训练前 15 min腹腔注射 Scop。对
照组及 Scop组则在训练前 30 min鼻腔给 N S,训练
前 15 min分别腹腔注射 N S或 Scop。小鼠鼻腔给药
容量为 10μl /10 g。小鼠每天训练一次 ,第一天路线
含一个岔路 ,以后每天增加一个岔路 , d 5达全程 ,
共训练 6 d,记录每天游至安全平台的时间 ,大于 5
min的记为 5 min。
1. 4. 2 小鼠跳台试验 [3 ]　分组及给药方法同上。d 1
给药后进行 5 min的跳台训练 , 24 h后进行测验 ,记
录各组小鼠的潜伏期和 5 min内错误次数 ,潜伏期
大于 5 min的计为 5 min。
1. 4. 3 小鼠避暗试验 [3 ]　分组及给药方法同上。d 1
给药后进行 5 min的避暗训练 , 24 h后进行测验 ,记
录各组小鼠的潜伏期和 5 min内错误次数 ,潜伏期
大于 5 min的计为 5 min。
1. 4. 4 小鼠脑及血浆中 AchE的活性测定　取 40
只小鼠随机分成 4组 ,即: 生理盐水对照组 , Phy灌
胃组 , Phy鼻腔给药小剂量组及大剂量组 ;给药后
30 min眼眶采血并迅速取脑组织 (去除小脑及脑
干 )。所采血液肝素抗凝 ,以 1 500 r /min离心 8min,
取血浆 ,用生理盐水 1∶ 9稀释 ,制成待测样品 ,参照
AchE测定试剂盒说明进行测定 ,测定波长为 412
nm。所取脑组织立即称重 ,加入 0. 1 mol /L磷酸缓
冲液 ( pH= 7. 0)低温匀浆 ,用生理盐水稀释成 10. 0
ml ,并计算待测样品湿脑组织含量 ( mg /m l) ,参照
AchE测定试剂盒说明进行测定。
1. 5 统计学处理　实验数据均用 x-± s表示 ,用方
差分析法进行统计分析。
2　结果
2. 1 对小鼠迷宫实验成绩的影响　小鼠每天给
phy后进行水迷宫训练连续 6 d,逐日延长游泳距
离 ,结果自 d 4起鼻腔 Phy组小鼠迷宫时间明显小
于 Scop组 ,灌胃 Phy组自 d 5起迷宫时间也明显小
于 Scop组 ,说明 Phy鼻腔及灌胃给药均能对抗
Scop引起的学习记忆障碍 (表 1)。
2. 2 对跳台及避暗试验成绩的影响　在跳台及避
暗试验中 , Phy鼻腔及灌胃给药均能对抗 Scop引起
的学习记忆障碍 ,使潜伏期明显延长 , 5 min内错误
次数明显减少 (表 2)。
表 1　鼻腔给 Phy对小鼠迷宫实验成绩的影响
　　　 Tab 1　 Inf luence of physostigmine intranasal administration on water maze time in mice (n= 12, x-± s)
Group
Drug (mg /kg)
ph ysostigmine scopolamine
Water maze t ime ( s )
d 4 d 5 d 6
Normal saline ( N S) N S NS 133. 8± 81. 2 148. 2± 101. 5 130. 3± 87. 6
Scopolamine N S 0. 5 184. 9± 108. 2 258. 9± 132. 1b 216. 7± 104. 4b
Ph ysost igmin e 0. 3 0. 5 129. 2± 102. 7 152. 9± 112. 0e 114. 0± 47. 4f
High d ose physostigmine 0. 3 0. 5 78. 8± 48. 1f 132. 3± 108. 1e 89. 8± 20. 0f
Low dose ph ysos tigmine 0. 15 0. 5 147. 8± 112. 9 172. 4± 101. 4 116. 2± 68. 3e
　　 bP < 0. 05 compared w ith NS; eP < 0. 05, fP < 0. 01 compared wi th scopolamin e
表 2　鼻腔给 Phy对跳台及避暗试验成绩的影响
Tab 3　 Inf luence of Phy intranasal adminstration on passive avoidance responses test ( step-down test and step-though test) in
mice (n= 12, x-± s)
Group
Drug ( mg /kg)
phys ost igmine scoplamine
Step-dow n tes t
Latency /s No. of error
Step-th rought tes t
Latency /s No. of error
Normal saline (N S) N S N S 112. 7± 92. 9 3. 4± 1. 9 140. 6± 113. 1 1. 1± 1. 2
Scopolamine N S 0. 5 41. 9± 28. 3b 5. 4± 2. 4b 62. 7± 50. 4b 4. 2± 1. 9c
Ph ysos tigmine 0. 3 0. 5 130. 0± 94. 4f 2. 5± 1. 2f 160. 9± 120. 6e 2. 0± 1. 4f
High do se physo stigm ine 0. 3 0. 5 152. 5± 110. 3f 2. 2± 1. 3f 171. 8± 121. 1f 2. 0± 1. 4f
Low dose physostigmine 0. 15 0. 5 110. 0± 88. 6e 3. 5± 1. 8e 140. 6± 107. 5e 2. 2± 1. 7e
　　 bP < 0. 05, cP < 0. 01 compared wi th N S; eP < 0. 05, f P < 0. 01 com pared wi th scopolamine
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2. 3 对小鼠脑及血浆中 AchE活性的影响　给药
后 30 min取血及脑组织分别测定 AchE活性 ,结果
显示鼻腔及灌胃 Phy均能明显降低血及脑组织中
AchE的活性 ,此作用可使脑内胆碱能神经功能增
强 ,对抗 Scop所致的学习记忆障碍。另外 ,相同剂量
的 Phy ,鼻腔给药对脑内 AchE活性的抑制强于灌
胃 (表 3)。
表 3　鼻腔给 Phy后对小鼠脑及血浆中 AchE活性的影响
Tab 3　 Influence of physostigmine intranasal administra-
tion on the AchE activity of the plasma and brain
in mice (n= 10, x-± s)
Group
Drug
( mg /kg )
AchE activity /
mois t brain
(μm ol /mg)
AchE activi ty /
plasma
(μmol /mg)
Normal saline
normal
saline
0. 84± 0. 08 74. 2± 10. 0
ph ysos tig mine 0. 3 0. 75± 0. 06c 57. 2± 13. 5c
High do se physo s-
tigmine intranasal
0. 3 0. 69± 0. 06ce 54. 6± 15. 7c
Low dose physos-
tigmine intranasal
0. 15 0. 76± 0. 07b 63. 1± 11. 8b
　　 bP < 0. 05, cP < 0. 01 com pared wi th normal saline; eP < 0. 05,
compared w ith physos tigmine
3　讨论
鼻腔属于上呼吸道 ,其黏膜的上皮细胞下有许
多大而多孔的毛细血管 ,能使药物迅速吸收进入血
液 ,同时鼻黏膜有许多微绒毛 ,可大大增加药物有效
吸收面积 ,药物通常吸收较迅速 [4 ]。药物由鼻腔给药
后直接经过鼻黏膜吸收入血 ,一方面避免了胃肠道
对药物的破坏作用及通过门静脉、肝脏时的首过效
应 ,可提高药物的生物利用度 ;另一方面药物从外鼻
孔向后滴入到达颅腔及鼻腔之间的筛状隔膜 ,此处
组织屏障作用最弱 [5 ] ,有利于难以透过血脑屏障的
药物如头孢氨苄直接进入大脑 [6 ]。本研究结果表明:
Phy可通过鼻腔黏膜吸收 ,使脑内及血液中的 AchE
受到抑制 ,进而对抗 Scop所致的学习记忆障碍。另外
还观察到相同剂量的 Phy ,鼻腔给药对 AchE活性的
抑制强于灌胃 ,但在水迷宫及被动回避性条件反应试
验中未观察到鼻腔给药与灌胃有差别。 Phy对抗
Scop所致学习记忆障碍的作用是在脑内产生的 ,鼻
腔给 Phy后有多少药物能进入脑内以及生物利用度
是否高于口服给药 ,有待今后进一步研究。
【参考文献】
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生出版社 , 1991: 662～ 663
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学技术出版社 , 1995: 263～ 269
[6 ] Toshiyasu S. Transport of cephalexin to th e cerebrospinal f luid
direct ly f rom th e nasal cavi ty. J Pharm Ph armacol, 1991, 43:
449
( 2000-10-31收稿 )
国产盐酸阿夫唑嗪片人体生物利用度
胡玉钦1　姜　楠1　柴爱军 2　赵春丽 1　刘会臣 1　侯艳宁 1　 ( 1白求恩国际和平医院临床药理室　石家庄
050082; 2石家庄市人民医院药剂科　石家庄 050092)
【摘要】　目的: 比较国产和进口阿夫唑嗪片的人体生物利用度。 方法: 20名男性健康受试者自身交叉口服单剂量国产和进口
盐酸阿夫唑嗪片 5 mg ,用高效液相色谱法测定人血清中盐酸阿夫唑嗪的浓度 ,计算药物动力学参数 ,以方差分析与双向单侧 t
检验进行统计学分析。结果 :国产和进口盐酸阿夫唑嗪片的 cmax分别为 ( 31. 02± 10. 83)μg /L和 ( 32. 98± 10. 48)μg /L; tmax分别
为 ( 1. 4± 0. 6) h和 ( 1. 6± 1. 0) h; AUC0-t分别为 ( 205. 15± 65. 42) μg /L· h和 ( 225. 20± 53. 63)μg /L· h。 两药各药物动力学
参数间均无统计学差异。国产盐酸阿夫唑嗪片的相对生物利用度为 ( 90. 31± 12. 79)%。结论: 国产和进口阿夫唑嗪片具有生物
等效性。
【关键词】　盐酸阿夫唑嗪 ;　生物利用度 ;　高效液相色谱法
·167·　中国临床药学杂志　 CHINESE JOU RN AL OF CLIN ICAL PHARM ACY　 2001年第 10卷第 3期