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Effect of asarinin on the acute heart transplantation rejection and the expression of adhesion molecule

细辛脂素抗心脏移植急性排斥反应的作用及对黏附分子表达的影响



全 文 :细辛脂素抗心脏移植急性排斥反应的
作用及对黏附分子表达的影响
张丽丽 3 o李述峰 o张 烁 o聂宏刚 o关振中 o杨宝峰
k哈尔滨医科大学 附属第二医院 o黑龙江 哈尔滨 txss{yl
≈摘要  目的 }实验筛选细辛免疫抑制作用的有效成分细辛脂素 o探讨其抗心脏移植急性排斥反应作用及对
黏附分子的影响 ∀方法 }提取细辛中的细辛脂素 o健康雄性 •¬¶·¤µ大鼠k供体l和 ≥⁄大鼠k受体l各 yw只 o建立大鼠
异位心脏移植模型 o将接受心脏移植的 ≥⁄大鼠分成 w组 }阳性对照组 o不给任何处置 ~环孢霉素 „k≤¶„l组 o术前 t §
开始灌服 ≤¶„ ~细辛脂素组 o术前 t §开始灌服细辛脂素 ~混合药物组 o术前 t §开始灌服半量 ≤¶„和半量细辛脂素 ∀
每组各 {只 o术后第 z天处死 o另外 {只用于观察移植物生存天数 ∀移植心常规石蜡包埋 !切片 o显微镜观察并进行
组织病理分级 ~免疫组化染色法检测移植物局部细胞间黏附分子2tkŒ≤„2tl和血管内皮黏附分子2tk∂ ≤„2tl含量 ∀
结果 }移植心存活时间 o≤¶„组 !细辛脂素组和混合药物组均较阳性对照组显著延长k Π s1stl ∀与阳性对照组比
较 o细辛脂素可减轻心肌病理形态学的损伤 ∀ ≤¶„组 !细辛脂素组和混合药物组移植心局部 Œ≤„2t和 ∂ ≤„2t含
量较阳性对照组明显减少 ∀结论 }细辛脂素可延长移植物存活时间并减轻病理形态的损伤 o与 ≤¶„有相似的免疫
抑制作用 ∀Œ≤„2t和 ∂ ≤„2t在发生排斥反应时表达增加 o细辛脂素可抑制二者的表达 ∀
≈关键词  细辛脂素 ~心脏移植 ~黏附分子
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussylsy2sw|w2sw
≈收稿日期  ussx2sx2s{
≈通讯作者   3 张丽丽 oר¯ }kswxtl {y{vu|vt oƒ¤¬}kswxtl
{uvzu|vt o∞2°¤¬¯}½«¤±ª¯¼¯¼ussw ƒ tyv q¦²°
中药的免疫抑制作用已渐被中外学者重视 o随
着对中药研究的不断深入 o发现许多中药具有抗移
植排斥反应的作用 o而中药发挥抗移植排斥反应作
用的多是中药的某种提取物或某种单一成分≈t  o因
此 o本实验提取了中药细辛中的细辛脂素成分 o研究
其抗心脏移植急性排异反应作用以及对黏附分子的
影响 ∀
1 材料与方法
111 动物
受体大鼠 o健康雄性 ≥⁄大鼠 o体重 uxs ∗ vss ª~
供体大鼠 o健康雄性 •¬¶·¤µ系大鼠 o体重 uss ∗ uxs
ª∀由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心
提供 ∀
112 大鼠腹部异位心脏移植动物模型制备
采用大鼠的同种异体心脏移植术 ∀供 !受体均
为无菌手术 ∀将供心的主动脉 !肺动脉分别与受体
的腹主动脉和下腔静脉行端侧吻合 ∀每日腹部触诊
检查移植心状态 ∀将移植存活良好k搏动有力 o心率
t{s ∗ uxs次r分 o心律规整l的大鼠随机进入各实验
组 ∀术后处理和分组全部动物 o共分 w组 ∀阳性对
照组 }供体 •¬¶·¤µ大鼠 o受体 ≥⁄大鼠 o未作任何处
理 ∀环孢霉素k≤¶„l组 }供体 •¬¶·¤µ大鼠 o受体 ≥⁄大
鼠 o术前 t §开始给予 ≤¶„ x °ª#®ªpt#§pt灌服 ∀细
辛脂素组 }供体 •¬¶·¤µ大鼠 o受体 ≥⁄大鼠 o术前 t §
开始给予中药细辛提取物细辛脂素 ux °ª#®ªpt#§pt
灌服 ∀混合药物组 }供体 •¬¶·¤µ大鼠 o受体 ≥⁄大鼠 o
术前 t §开始给予半量 ≤¶„ n半量中药细辛提取物
细辛脂素灌服 ∀术后 z §每组 {只动物处死 o用无
菌注射器经下腔静脉采血 x °o低温离心 v sss µ#
°¬±pt无菌分离血清 o分装后低温冰箱保存备测 ~每
组其余 {只大鼠继续用药并观察生存天数 ∀
113 观察指标与方法
≠移植物生存天数 ∀  移植心常规石蜡包埋 !
切片 o显微镜观察并进行组织病理分级 ∀ ≈ 免疫组
化染色法检测移植物局部细胞间黏附分子2tkŒ≤„2
tl和血管内皮黏附分子2tk∂ ≤„2tl含量 ∀
2 结果
211 移植物生存天数
≤¶„组 !细辛脂素组和混合药物组移植物生存
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第 vt卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ y
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天数明显多于阳性对照组k Π s1stl o结果见表 t ∀
表 t 移植心存活时间kcξ ? σ, ν € {l
组别 剂量r°ª#®ªpt#§pt 存活时间r§
阳性对照组 z q{ ? s qz
≤¶„组 x vs qx ? { qvtl
细辛脂素组 ux ty qx ? w qvtl
≤¶„ n细辛组 tu qx n u qx uy qt ? x qut oul
注 }与阳性对照组比tl Π s1st ~与 ≤¶„组比ul°  s1sx
212 移植物形态学变化
21211 大体观察结果 各实验组发生了不同程度
的排斥反应 ∀大体可见阳性对照组心外膜呈灰白
色 o表面纤维素沉积 o与周围组织粘连明显 o大部分
心脏收缩停止 o切面着色暗红 o心腔内有血栓形成 ∀
而 ≤¶„组 !细辛脂素组和混合药物组可见心外膜呈
鲜红色 o搏动较为有力 o与周围组织粘连较少 o情况
略有差别 ∀长期观察心脏存活者一般在心脏停跳后
当日取材 o可见心脏增大 o心外膜呈苍白或暗红色 o
心脏收缩停止 o与周围组织广泛粘连 o心腔内血栓形
成 ∀
21212 光镜下观察结果 光镜下可见阳性对照组
心肌中层大量淋巴细胞和单核细胞浸润为主 o并伴
有少量中性粒细胞 !成纤维细胞 o在心肌间 !血管周
围有散在的出血点 !坏死灶周围成堆或呈弥漫性分
布 o间质水肿较重 o心肌细胞减少 ∀而细辛脂素组情
况明显较好 o可见心内外膜下 !血管周围及心肌间质
有少量淋巴细胞浸润 o心肌细胞间疏松 ∀ ≤¶„ 组和
混合药物组心肌细胞排列整齐 o无明显水肿和炎细
胞浸润 o散在心肌细胞核肥大 o局灶性心肌细胞变
性 o心肌细胞间炎细胞极少 ∀
213 移植心脏常规病检结果
按 t||s年国际心脏移植学会kŒ≥‹×l急性心脏
排斥反应分级诊断标准分级 ∀结果见表 u ∀
表 u 移植心脏排斥反应分级k ν € {l
分组 动物编号t u v w x y z {
阳性对照组 · · ¶… · ¶… · ¶ „ ·
≤¶„组 ´ „ ´ … µ ´ … ´ … ´ „ µ µ
细辛脂素组 µ ¶ „ µ ´ … µ ´ … ¶ „ ¶ „
混合药物组 ´ … ´ „ µ µ ´ … µ µ ´ „
注 }阳性对照组为 ¶ „ ∗ ·级 ~≤¶„组明显较好为 ´ „ ∗ µ级 ~细
辛脂素组为 ´ … ∗ ¶ „级 ~混合药物组似为 ´ „ ∗ µ级
214 Œ≤„2t和 ∂ ≤„2t检测结果
分类标准 }至少检测 ts个视野 o根据心脏组织
阳性细胞数计分 }p o无阳性细胞 ~• n o散在阳性细
胞 ~n o少量阳性细胞 ~6 o中等数量阳性细胞 ~7 o多
量阳性细胞 ∀
21411 Œ≤„2t Œ≤„2t阳性为胞浆棕黄色染色 ∀
结果表明主要表达在血管内皮细胞 o心肌细胞表达
较少 o而损害较重的心肌细胞则有表达 o坏死区 !活
化的淋巴细胞和炎细胞呈阳性表达 ∀阳性对照组呈
强阳性表达 ~≤¶„组与混合药物组结果相似 o与阳性
对照组相比表达明显减少 ~细辛脂素组表达稍多于
药物对照组 o但明显好于阳性对照组 o呈 • n ∗ n
之间 o说明 Œ≤„2t在心肌细胞的表达与心肌细胞损
害程度有关 ∀ ≠ 阳性对照组呈 6 ∗ 7 表达 ~ ≤¶„
组呈 p表达或 • n表达 ~≈细辛脂素组呈 • n ∗ n
表达 ~…混合药物组ktru≤¶„ n tru细辛脂素l呈 p
表达或 • n表达 ∀
21412 ∂ ≤„2t ∂ ≤„2t阳性为胞浆棕黄色染色 ∀
结果表明 ∂ ≤„2t在心肌上表达较多 o在大血管内
皮及血管平滑肌上表达较多 o活化的淋巴细胞和炎
细胞呈阳性表达 o变性坏死的心肌细胞呈阳性表达 o
收缩的心肌纤维呈阳性颗粒 o浸润细胞及间质纤维
化的部位亦有表达 o为胞浆表达 ∀阳性对照组呈强
阳性表达 ~而 ≤¶„组与混合药物组结果类似 o与阳性
对照组相比表达明显减少 ~细辛脂素组表达多于
≤¶„组 o但明显少于阳性对照组 o呈 • n ∗ n表达 ∀
≠ 阳性对照组呈 6 ∗ 7 表达 ~ ≤¶„组呈 p表达或
• n表达 ~≈ 细辛脂素组呈 • n ∗ n表达 ~…混合
药物组ktru≤¶„ n tru细辛脂素l呈 p 表达或 n 表
达 ∀
以上结果说明 o经过治疗 o移植心脏 Œ≤„2t和
∂ ≤„2t表达减少 o≤¶„ 组和混合药物组减少明显 o
细辛脂素组介于阳性对照组和 ≤¶„组之间 o但明显
好于阳性对照组 ∀
3 讨论
辽细辛产自东北三省 o是常用的中药之一 o具有
祛风散寒 !通窍止痛 !温肺化饮的功效 ∀有关中药细
辛的免疫抑制作用已有报道 o但其抗排斥反应作用
还鲜有报道 ∀本实验采用产自黑龙江的辽细辛作为
研究用药 o探讨其抗心脏移植急性排斥反应的作用 ∀
古代有/细辛不过钱0之说 o认为细辛具有一定毒性 ∀
根据现代对细辛的化学和药理学研究表明细辛的毒
性主要与其所含的挥发油成分有关≈u  o因此本实验
筛选了细辛中的非挥发油成分细辛脂素 o采用常用
的细辛单体成分的提取方法尽量去除其挥发油成
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第 vt卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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分 o以减少毒副作用 o提取出的细辛脂素经过鉴定其
纯度可达 |x h以上 ∀
移植物存活天数是观察抗排斥反应药物的重要
指标之一 o本实验观察到的结果与阳性对照组相比 o
≤¶„组 !细辛脂素组和混合药物组的移植心存活时
间均明显延长k Π s1stl o而混合药物组与 ≤¶„ 组
相比差异无显著意义k Ё s1sxl o提示细辛脂素可
以替代部分环孢霉素作用 ∀
在病理形态学方面 o本实验观察到的结果表明 o
光镜下阳性对照组移植心脏排斥反应较重 o排斥反
应分级均为 ¶ ∗ ·级 ~≤¶„ 组移植心脏在处死时仍
搏动有力 o且表面光滑 o光镜下病变轻微 o有少量炎
细胞和淋巴细胞浸润 o但心肌细胞未有明显的改变 o
排斥反应分级为 ´ „ ∗ µ级 o说明 ≤¶„ 可以减轻排
斥反应 ~细辛脂素组移植心脏表面光滑 o光镜下可见
较少局灶炎细胞和淋巴细胞浸润 !心肌细胞变性和
周围水肿 o但未见心肌细胞的坏死 o排斥反应分级为
´… ∗ ¶„级 ~对心肌损伤也有一定的保护作用 o动
物的一般状态也明显较好 o提示细辛脂素对心脏移
植急性排斥反应的发生和发展有一定的抑制作用 ~
混合药物组移植心的病理观察结果与 ≤¶„组类似 ∀
Œ≤„2t和 ∂ ≤„2t是一类位于细胞膜表面的
糖蛋白分子 o在炎症和免疫反应中起重要作用 ∀正
常时细胞的 Œ≤„2t呈低表达 o在细胞因子和白细胞
介素 tkŒ2tl !肿瘤坏死因子kבƒl作用下 o表达可增
加 ∀Œ≤„2t主要通过与受体淋巴细胞功能相关抗
原2t结合 o使 × 细胞黏附于抗原递呈细胞 !内皮细
胞 !上皮细胞和各种靶细胞 o召募中性粒细胞和嗜酸
性粒细胞至炎症或免疫反应部位≈v  ∀与 Œ≤„2t一
样 o∂ ≤„2t亦是免疫球蛋白超基因家族成员之一 o
正常情况下静止的内皮细胞表面 ∂ ≤„2t表达极微
弱 o∂ ≤„2t主要表达于受细胞因子活化的内皮细
胞及系膜血细胞 !骨髓基质细胞 !组织巨噬细胞 !肾
小管上皮细胞等≈w2x  ∀
本实验结果证明 oŒ≤„2t主要表达在血管内皮
细胞 o心肌细胞表达较少 o而损害较重的心肌细胞则
有表达 o坏死区 !活化的淋巴细胞和炎细胞呈阳性表
达 ∀ ∂ ≤„2t在心肌上表达较多 o在大血管内皮及
血管平滑肌上表达较多 o活化的淋巴细胞和炎细胞
呈阳性表达 o变性坏死的心肌细胞呈阳性表达 o收缩
的心肌纤维呈阳性颗粒 o浸润细胞及间质纤维化的
部位亦有表达 o为胞浆表达 ∀说明黏附分子在心肌
细胞的表达与心肌细胞损害程度呈正相关 ∀在发生
剧烈排斥反应的阳性对照组 oŒ≤„2t和 ∂ ≤„2t呈
强阳性表达 ~而用抗排异反应药物后的 ≤¶„组和混
合药物组其表达明显降低 o说明 ≤¶„抑制了黏附分
子kŒ≤„2t和 ∂ ≤„2tl的表达 o抑制了 × 细胞与相
应的靶细胞结合 o从而抑制了排斥反应的发生 ~而细
辛脂素组表达介于二者之间 o但阳性细胞数明显少
于未用药物的阳性对照组 o证明细辛脂素也在一定
程度上抑制了黏附分子的表达 o从而具有一定的抗
心脏移植急性排斥反应作用 ∀而混合药物组则与
≤¶„组表达结果相似 o说明细辛脂素在一定程度上
可部分取代 ≤¶„的抗排异反应作用 ∀
通过本研究所揭示的结果 o对中药细辛可以得
到以下的认识 }中药细辛具有抗心脏移植急性排斥
反应的作用 o其发挥抗排斥反应作用的有效成分是
细辛脂素 ∀中药细辛药源广泛 !材料价廉 !便于临床
推广 o细辛脂素提纯容易 o因此对中药细辛的进一步
开发如能成功 o有望获得可观的经济效益和社会效
益 o使临床众多器官移植患者受益 ∀
≈参考文献 
≈t  高崎 _ Ι ­ q小青龙汤中细辛的抗促癌作用 q国外医学#中医
中药分册 ot||{ ouskxl }x| q
≈u  Œ¶«¬§² ‘o ¤·¶∏²®¤o ¤·¶∏±² × o ετ αλqŒ±§∏¦·¬²± ²©§²±²µ2¶³¨¦¬©¬¦
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≈w  马利军 q细胞粘附分子 ) ) ) 基础与临床 q国外医学#泌尿系统
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≈x  Œ¶«¬®∏µ¤ ‹ oפ®¤«¤¶«¬≤ oŽ¤±¤ª¤º¤ Žo ετ αλq≤¼·²®¬±¨ µ¨ª∏¯¤·¬²± ²©
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Εφφεχτ οφ ασαρινιν ον τηε αχυτε ηεαρτ τρανσπλαντατιον ρεϕεχτιον
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中 国 中 药 杂 志
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ·¨¶··«¨ ©¨©¨¦·²©¤¶¤µ¬±¬±o·«¨ ¬¨·µ¤¦·²© ‹ µ¨¥¤ „¶¤µ¬o²±·«¨ ¤¦∏·¨ «¨ ¤µ··µ¤±¶³¯¤±·¤·¬²±µ¨­¨¦·¬²± ¤±§·«¨ ¬¨2
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³µ¨¶¶¬²± ¯¨ √¨¯ q „¶¤µ¬±¬± ¦¤± §¨¦µ¨¤¶¨ ·«¨ §²¶¤ª¨ ²© ≤¶„ q
[ Κεψ ωορδσ] ¤¶¤µ¬±¬±~«¨ ¤µ··µ¤±¶³¯¤±·¤·¬²±~¤§«¨¶¬²± °²¯ ¦¨∏¯¨
≈责任编辑 方文贤 
≈收稿日期  ussx2sy2sv
≈通讯作者  3孙立新 oר¯ }ksuwluv|{yvyx oƒ¤¬}ksuwluv|txwu{ o
∞2°¤¬¯}≥÷sw ƒ tyv1¦²°
白英乙醇提取物抗肿瘤作用初步研究
任 靖 o冯国楠 o王敏伟 o孙立新 3
k沈阳药科大学 药学院 o辽宁 沈阳 ttsstxl
≈摘要  目的 }研究白英乙醇提取物体内外抗肿瘤作用 ∀方法 }采用 ××法观察白英乙醇提取物体外对人肝
癌 …∞2zwsu细胞及人胃腺癌 ≥Š≤2z|st细胞的增殖抑制作用 ~以小鼠 ≥t{s肉瘤及 ‹uu肝癌为模型 o观察白英乙醇提
取物在体内对肿瘤生长的抑制作用 ∀结果 }白英乙醇提取物对人肝癌 …∞2zwsu细胞及人胃腺癌 ≥Š≤2z|st细胞有
增殖抑制作用 o且均呈现良好的浓度2效应依赖关系 o作用 w{ «的 Œ≤xs值分别为ku{z1ws ? x1{wl oktzy1tw ? x1t{l Λª#
°pt ~白英乙醇提取物在体内对小鼠 ≥t{s肉瘤和 ‹uu肝癌肿瘤的生长均有显著的抑制作用 o且呈现良好的剂量2
效应关系 o高剂量组的抑瘤率分别达到kwt1tx ? w1xwl h和kwx1ss ? z1vzl h ∀结论 }白英乙醇提取物具有抗肿瘤作
用 ∀
≈关键词  白英 ~抗肿瘤 ~小鼠 ≥t{s肉瘤 ~小鼠 ‹uu肝癌
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussylsy2sw|z2sw
茄科植物白英 Σολανυµ λψρατυµ ׫∏±¥1 又名白
毛藤 o主产于江苏 !浙江 !江西 o具有清热解毒 o祛风
利湿 o化瘀等作用 ∀临床常用于治疗感冒发热 o胆囊
炎 o胆石病 o癌症 o子宫颈糜烂 o白带等病症≈t  ∀白英
与红枣以 tΒt混合制成的煎剂 !糖浆剂对小鼠艾氏
腹水癌及梭形细胞肉瘤的实体型及腹水型有抑制作
用 o临床上对子宫癌有效≈u  ∀有研究表明白英水提
物能抑制 ‹2ys细胞的增殖≈v  o脂溶性提取物能诱
导肝癌细胞的凋亡≈w  ∀白英乙醇提取物的系统研究
未见报道 ∀前期研究结果表明 o白英乙醇提取物对
‹ ¨¤等体外培养的多种肿瘤细胞系具有良好的细
胞增殖抑制作用≈x  o本研究进一步对白英乙醇提取
物体内外抗肿瘤作用进行研究 ∀
1 材料
111 药材 白英饮片购于上海徐汇中药饮片厂 o
由沈阳药科大学孙启时教授鉴定为 Σ . λψρατυµ
׫∏±¥1取白英全草干品适量 o用 |x h乙醇适量浸泡
过夜后 o回流提取 v次 o每次 t «o自然冷却 o过滤去
#z|w#
第 vt卷第 y期
ussy年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ y
¤µ¦«oussy