全 文 ：可信性和科学性，并可结合现代微生物学、分子生物
学、临床等学科进行研究［６］。
本实验采用血清药理学的方法，考察了三七及
其超细粉对 ＶＳＭＣ在高脂血清刺激下增殖的影响。
结果表明，含三七的高脂血清对 ＶＳＭＣ增殖的抑制
作用较模型组相比具有显著差异，且呈现一定的剂
量依赖性。因此可能从一个侧面反映了三七的降血
脂作用。同等剂量的不同粉碎度的三七相比，超细
粉的抑制作用强于普通三七粉，但只在高剂量组有
显著性差异。总之含三七的高脂血清对 ＶＳＭＣ的增
殖有抑制作用，说明三七具有降血脂、预防动脉粥样
硬化的作用，为后期进一步开展药效学及药物作用
机制研究提供了依据。
［参考文献］
［１］ ＭｏｓｍａｎｎＴ．Ｒａｐｉｄｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃａｓｓａｙｆｏｒｃｅｌｕｌａｒｇｒｏｗｔｈａｎｄｓｕｒｖｉｖａｌ：
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ｇｅｎｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ａｎｅｗｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｔｅｓｔｉｎｇ
ｍｅｔｈｏｄ．ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，１９８７，２１（１）：４５．
ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｆＰａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇｏｎｔｈｅＶＳＭＣｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａｓｅｒｕｍ
ＷＡＮＧＪｉｎｇ，ＨＵＪｉｎｈｏｎｇ
（ＣｈａｎｇｈａｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３３，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆＰ．ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇｏｎｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ（ＶＳＭＣ）ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｙ
ｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａｓｅｒｕｍ．Ｍｅｔｎｏｄ：ＭＴＴｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａｓｅｒｕｍａｎｄｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａｐｌｕｓＰ．ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ
ｏｎＶＳＭＣｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＨｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａｓｅｒｕｍｃｏｕｌｄｐｒｏｍｏｔｅＶＳＭＣｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜
００５），ｗｈｉｌｅｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａｐｌｕｓＰ．ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇｃｏｕｌｄｗｅａｋｅｎｔｈｉｓｅｆｅｃｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜００５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｐ．ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇｃａｎｓｉｇｎｉｆｉ
ｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅＶＳＭＣｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａｓｅｒｕｍ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ；ＭＴＴ；ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｓ；ｓｅｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００５１０１５
［基金项目］ 国家中医药管理局面上项目（０４０５ＺＰ７０）
［通讯作者］ 赵艳玲，Ｔｅｌ：（０１０）６６９３３３２４
生物热力学法观察板蓝根不同提取部位
对小鼠淋巴细胞的影响
赵艳玲１，２，肖小河１，廖庆文１，王伽伯１，马永刚１，鄢 丹１，金 城１
（１解放军３０２医院 中药研究所，北京 １０００３９；
２军事医学科学院，北京 １００８５０）
［摘要］ 目的：观察板蓝根不同提取部位对小鼠淋巴细胞增殖作用的影响。方法：分离培养小鼠淋巴细胞，以
生物热动力学方法观察板蓝根不同提取部位的免疫活性，并以常规离体细胞培养法进行药效学验证。结果：板蓝
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根水提部位、萃后部位具有明显的淋巴细胞增殖作用。有机溶剂萃取部位均具有一定的淋巴细胞增殖作用，但其
活性不显著。生物热力学方法与常规药效学方法结果基本一致。结论：板蓝根不同提取部位对淋巴细胞的作用
为：萃后部位＞水提部位＞正丁醇部位＞醋酸乙酯部位＞氯仿部位＞石油醚部位。
［关键词］ 板蓝根；小鼠淋巴细胞；生物热力学
［中图分类号］Ｒ２８５５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００６）０７０５９００４
板蓝根为十字花科植物菘蓝 Ｉｓａｔｉｓｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ
Ｆｏｒｔ的干燥根，具有清热解毒、凉血利咽的功效，临
床上主要用于防治流行性腮腺炎、流行性乙型脑炎、
流行性感冒、病毒性传染病、乙肝等病毒性疾病及细
菌性感染疾病。研究表明其抗菌抗病毒作用与其免
疫活性密切相关［１］，然而板蓝根的药效物质基础尚
不完全明确，活性指标成分存在争议。常规的免疫
学筛选方法相对费时费力，不能监测药物的时效关
系，为此作者试图建立一种基于生物热动力学表达
的中药免疫活性筛选方法，该方法具有实时、在线、
客观、灵敏的优点，适合高通量筛选。同时，还可以
连续记录药物与免疫细胞间的相互作用，从而可对
活细胞代谢过程进行研究，得到整个代谢过程的热
活性信息，为中药免疫活性筛选提供新的研究手段。
１ 材料与仪器
１１ 药品与试剂
噻 唑 蓝 ［３（４，５ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ２ｙｌ） ２，５
ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ，ＭＴＴ］；刀豆蛋白 Ａ（ｃｏｎ
ｃａｎａｖａｌｉｎＡ，ＣｏｎＡ）；ＲＰＭＩ１６４０培养基为Ｓｉｇｍａ公司
产品。胎 牛 血 清 为 Ｈｙｃｌｏｎｅ公 司 产 品，批 号
ＣＰＢ００８２。９６孔培养板、０２２μｍ滤器为美国 Ｃｏｒｎｉｎｇ
公司产品。
１２ 仪器
ＴＡＭＡｉｒ生物活性检测仪，瑞典产，可同时独立
测定８个样品，热稳定性好，恒温工作范围为５～６０
℃。热功率最小检测极限为 ２μＷ。其他有关仪器
结构原理及操作详见文献［２］。实验时系统控制温
度为３７℃。ＺＳ－３板式酶标仪为毓新公司产品。
二 氧 化 碳 孵 箱 为 美 国 ＮＡＰＣＯ 公 司 生 产。
ＳＥＮＣＯＲ５０２Ｂ型转蒸发仪，上海申生科技有限公司生
产。
１３ 药材及其提取物的制备
板蓝根采自安徽亳州，经解放军 ３０２医院中药
研究所肖小河研究员鉴定为十字花科植物菘蓝 Ｉ
ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ的干燥根。取板蓝根粗粉５００ｇ，水煎煮２
次，合并煎煮液并浓缩成浸膏，得水煎液总提取物
（Ⅰ部位，１５６６ｇ），并以不同极性溶剂萃取，分别得
到石油醚提取物（Ⅱ部位，０１９ｇ）、醋酸乙酯提取物
（Ⅲ部位，０４９ｇ）、氯仿提取物（Ⅳ部位，０５５ｇ）、正
丁醇提取物（Ⅴ部位，５１２ｇ）及萃取后物质（Ⅵ部
位，１１６２５ｇ）等不同极性部位。体外细胞试验时，
Ⅱ～Ⅴ提取部位分别以二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）溶解后
以ＤＭＥＭ配制为不同含量的溶液，Ⅰ，Ⅵ部位以
ＤＭＥＭ溶液溶解，０２２μｍ滤器推滤除菌。
１４ 动物
ＢＡＬＢ／ｃ纯系小鼠，雄性，６～８周，体重（２０±２）
ｇ，由中国药品生物制品检定所动物中心提供。动物
合格证号ＳＣＸＫ１１００００１０。
２ 方法
２１ 不同提取部位对小鼠脾淋巴细胞毒性试验［３］
以常规方法取小鼠脾脏制备小鼠脾细胞悬液，
调整细胞含量为５×１０６·ｍＬ－１。将新分离的小鼠脾
淋巴细胞加入 ９６孔培养板 １００μＬ／孔，然后加入等
量的２倍稀释含有不同剂量板蓝根不同提取部位的
ＲＰＭＩ１６４０培养液，每个样品设 ６个平行孔并设阴
性对照孔（只加等体积 ＲＰＭＩ１６４０培养液），置 ３７
℃，５％ＣＯ２孵箱中培养７２ｈ，以观察细胞病变为指
标，显微镜下观察细胞病变（ＣＰＥ）情况。
细胞病变完全破坏为 ４；７５％为 ３；５０％为 ２；
２５％为１；无病变为０。计算每批实验每剂量药液平
均细胞病变程度。按 ＲｅｅｄＭｕｅｎｃｈ法计算半数有毒
浓度（ＴＣ５０）和最大无毒浓度（ＴＣ０）。
ＴＣ５０＝ａｎｔｉｌｏｇ（Ｂ＋
５０－Ｂ
Ａ－Ｂ×Ｃ）
Ａ＝ｌｏｇ（＞５０％药物含量）；Ｂ＝ｌｏｇ（＜５０％药物含量）；Ｃ
＝ｌｏｇ（稀释倍数）
２２ 体外对小鼠淋巴细胞增殖反应的影响［４］
取６只健康成年雄性小鼠脾脏，常规方法制备
单细胞悬液，用含２０％胎牛血清的１６４０液稀释细胞
至５×１０６·ｍＬ－１，于９６孔细胞培养板每孔加细胞悬
液１００μＬ，同含量的药物１００μＬ，对照孔加等体积的
１６４０液，每样品均设 １０个复孔，置 ３７℃、饱和湿度
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和５％ＣＯ２孵温箱中培养７２ｈ，在培养结束前４ｈ每
孔加入２０μＬＭＴＴ液，继续培养４ｈ后，离心，吸去上
清，每孔加入１００μＬ酸化异丙醇，使结晶全溶后，置
酶标仪５７０ｎｍ波长处测定吸光度（Ａ）。
２３ 小鼠淋巴细胞代谢的生物热力学检测
采用安瓿法。在制备小鼠淋巴细胞后，加 １６４０
培养基使细胞终含量为 ４×１０５·ｍＬ－１。无菌条件
下，每个安瓿瓶精确加入５ｍＬ含小鼠淋巴细胞培养
液。各瓶加入等体积药液，加盖瓶塞，密封，放入微
量量热仪中跟踪记录细胞生长热谱曲线［（热功率
时间（Ｐｔ）曲线］。
在小鼠淋巴细胞的指数生长期内，产热功率 Ｐｔ
与速率常数之间有［５］：
Ｐｔ＝Ｐ０ｅｘｐ（ｋｔ）或 ｌｎＰｔ＝ｌｎＰ０＋ｋｔ
将热功率输出曲线上指数生长期的 Ｐｔ，ｔ值代
入式（１）中，用计算机进行线形拟合可得到小鼠淋巴
细胞在不同部位作用下生长速率常数（ｋ）。Ｐｔ对ｔ
作图，由直线斜率可得生长速率常数。同时，传代时
间 ｔＧ＝（ｌｎ２）／ｋ。
３ 结果
３１ 不同提取部位的细胞毒性分析
板蓝根不同提取部位在 ０～８ｍｇ·ｍＬ－１内 ９个
剂量对小鼠脾淋巴细胞进行细胞毒性实验。结果显
示，Ⅰ～Ⅵ部位对小鼠脾淋巴细胞产生５０％破坏程
度的剂量分别为：５６６，５０９，４１３，４９４，４３２，９３８
ｍｇ·ｍＬ－１。水煎液与萃取后部位的最大无毒剂量为
４ｍｇ·ｍＬ－１。醋酸乙酯、正丁醇、氯仿、石油醚对小
鼠淋巴细胞的最大无毒剂量为２ｍｇ·ｍＬ－１（见表１）。
表１ 板蓝根不同提取部位对小鼠脾淋巴细胞毒性作用（ｎ＝６）
提取部位剂量
／ｍｇ·ｍＬ－１
对细胞破坏程度／％
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
８ ８３３３ ８３３３ ７０８３ ７９１７ ４５８３ ６２５
４ ５４１７ ４５８３ ３７５０ ４１６７ ０ ０
２ ０ ０ ０ ０ ０ ０
１ ０ ０ ０ ０ ０ ０
０５ ０ ０ ０ ０ ０ ０
０２５ ０ ０ ０ ０ ０ ０
０１２５ ０ ０ ０ ０ ０ ０
００６３ ０ ０ ０ ０ ０ ０
０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
３２ 不同提取部位对小鼠淋巴细胞的作用
试验结果表明，在最大无毒剂量范围内，板蓝根
水煎液部位及萃取后部位可明显促进小鼠淋巴细胞
增殖。正丁醇、醋酸乙酯、氯仿、石油醚部位亦均
可促进小鼠淋巴细胞生长，但增殖率较低。但随着
药物含量增加，淋巴细胞增殖率亦增加（见表２）。
表２ 板蓝根不同提取部位对小鼠淋巴细胞增殖（Ａ）的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
提取部位
药物含量／ｍｇ·ｍＬ－１
０１２５ ０２５ ０５ １ ２ ４ 对照
Ⅰ ０３１７±０３１０２） ０３４２±００３４２） ０３９８±０６３２） ０４２９±００３５２） ０４８２±００８８２） ０２１１±００７３
Ⅱ ０２２２±００１２ ０２２３±００６６ ０２２８±００５３ ０２３４±００６２１） ０２４０±００４５１） ０２１６±００４１
Ⅲ ０２１８±００４９ ０２２９±００１１１） ０２３４±００３８１） ０２４２±００５２２） ０２６４±００３３２） ０２０９±００４７
Ⅳ ０２２６±００４６１） ０２３３±００６５１） ０２４０±００１８２） ０２５８±００２２２） ０２７３±００３６２） ０２１８±００５２
Ⅴ ０２３０±００５１２） ０２４０±００３３２） ０２６８±００４６２） ０２８２±００３８２） ０３０４±００２６２） ０２１２±００５３
Ⅵ ０３６５±００２７２） ０３８０±００４２２） ０４１６±００５１２） ０４６５±００２９２） ０５５２±００６３２） ０２１５±００４４
注：与空白对照组比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
３３ 不同提取部位对小鼠淋巴细胞作用的检测
将小鼠淋巴细胞对照组的热功率输出曲线与在
板蓝根不同提取部位作用下的热功率曲线进行比
较，可以看出，小鼠淋巴细胞在水煎及萃后部位药物
作用下，传代时间缩短，生长热曲线上的停滞期缩
短，生长峰前移，生长期的最大发热功率增大。说明
水煎部位及萃后部位对小鼠淋巴细胞生长具有促进
作用。正丁醇、醋酸乙酯、氯仿、石油醚部位可使小
鼠淋巴细胞的指数生长曲线斜率增加，最大发热功
率也比正常对照组增加，说明有机溶剂萃取部位也
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具有促进小鼠淋巴细胞生长作用，但作用程度较水
煎及萃后部位明显偏低（图１）。此结果与体外筛选
药效学实验结果一致（表２）。试验结果显示不仅水
煎部位及萃后部位含有的多糖具有免疫增强作用，
存在于正丁醇、醋酸乙酯、氯仿、石油醚部位的化学
成分也具有一定的免疫增强作用，但活性不明显。
图１ 板蓝根不同提取部位对小鼠淋巴
细胞作用的热谱图
４ 讨论
本实验采用直观、在线的生物热力学方法分析
了板蓝根不同提取部位对小鼠淋巴细胞的作用。板
蓝根不同提取部位对小鼠淋巴细胞作用的热谱图显
示，小鼠淋巴细胞在正常代谢和药物作用下的热功
率时间曲线的形状大体相同，而生长期的斜率不
同，即生长速率常数不同，反映出淋巴细胞在板蓝根
不同提取部位的作用下代谢的快慢程度。与正丁
醇、醋酸乙酯、氯仿、石油醚等提取部位相比，水煎液
及萃取后部位可使热谱曲线斜率明显增加，最大发
热功率提高。表明水煎液及萃取后部位可明显促进
小鼠淋巴细胞增殖，显示其具有良好的免疫增强活
性。与常规体外淋巴细胞增殖实验结果一致。
微量量热法是通过测量化学反应过程中吸收或
释放的微量热量，研究反应的速度和程度的科学，应
用于生命系统的研究，可对生物系统进行动态连续
测定，热分析则可进行动态跟踪扫描，为生命科学的
理论及应用研究提供了另一视角［６］。由于化学反应
过程中吸收和释放的热量与反应的速度呈正比，因
此微量量热法可以应用于药物与微生物及细胞的相
互作用，连续准确地监测和记录一个化学反应的量
热曲线。这些量热曲线不仅提供了热力学信息，而
且还可以动态的观点来研究反应过程，为反应机制
的确定提供证据。
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国科学基金，２０００，１２（４）：２０１
ＥｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓｏｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ
ｏｆｍｉｃｅｂｙｂｉｏｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃｓ
ＺＨＡＯＹａｎｌｉｎｇ１，２，ＸＩＡＯＸｉａｏｈｅ１，ＬＩＡＯＱｉｎｇｗｅｎ１，ＷＡＮＧＪｉａｂｏ１，ＭＡＹｏｎｇｇａｎｇ１，ＹＡＮＤａｎ１，ＪＩＮＣｈｅｎｇ１
（１ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ，３０２ＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＰＬＡ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００３９，Ｃｈｉｎａ；
２ＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８５０，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓｏｎｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓＭｅｔｈｏｄ：Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ
ｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃｓａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅ
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ｅｆｅｃｔｓｗｈｉｌｅｏｒｇａｎｉｃｓｏｌｖｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｈａｄｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｔｏｓｏｍｅｅｘｔｅｎｔＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙａｍｏｎｇｔｈｅｅｘ
ｔｒａｃｔｓｆｒｏｍＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓｗｅｒｅａｓｆｏｌｏｗｓ：ｒｅｓｉｄｕｅａｆｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ＞ｇｅｎｅｒａｌｅｘｔｒａｃｔ＞ｎＢｕＯＨｅｘｔｒａｃｔ＞ＥｔＯＡｃｅｘｔｒａｃｔ＞ＣＨＣｌ３ｅｘｔｒａｃｔ＞ＰＥｅｘｔｒａｃｔ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓ；ｌｙｍｐｈａｃｙｔｅｓｏｆｍｉｃｅ；ｂｉｏｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃｓ
［责任编辑 古云侠］
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