全 文 ：３．４ 不同生长期狗枣猕猴桃叶中狗枣猕猴桃黄酮
Ｃ的含量发生变化，在６月中旬含量最高，６月末到
７月中旬含量有所下降，但降幅不大。７月末至８月
中旬含量明显降低，约降至 ６月中旬含量的一半。
因此，６月中旬为狗枣猕猴桃叶的最佳采收期。
［参考文献］
［１］ 严仲铠，李万林．中国长白山药用植物彩色图志［Ｍ］．北京：人
民卫生出版社，１９９６：２８５．
ＳｔｕｄｙｏｎｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆａｃｔｉｎｏｓｉｄｅＣｉｎｌｅａｖｅｓｏｆＡｃｔｉｎｉｄｉａｋｏｌｏｍｉｋｔａ
ｗｉｔｈｄｉｆｅｒｅｎｔｇｒｏｗｔｈｐｅｒｉｏｄｓｂｙＲＰＨＰＬＣ
ＪＩＮＹｏｎｇｒｉ，ＧＵＩＭｉｎｇｙｕ，ＬＵＪｕａｎ，ＬＩＸｕｗｅｎ，ＸＵＪｉｑｉｎｇ
（ＣｈｅｍｉｓｔｒｙＣｏｌｅｇｅｏｆＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００１２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅａｃｔｉｎｏｓｉｄｅＣｉｎｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆＡｃｔｉｎｉｄｉａｋｏｌｏｍｉｋｔａｗｉｔｈｄｉｆｅｒｅｎｔｇｒｏｗｔｈｐｅｒｉｏｄｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：
Ｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄａｔ２５℃ ｏｎＺＯＲＢＡＸＥｘｔｅｎｄＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），ｕｓｉｎｇａｍｉｘｔｕｒｅｏｆｍｅｔｈａｎｏｌａｎｄ
ｗａｔｅｒ（５１∶４９）ａｓａｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１２ｍＬ·ｍｉｎ－１，ａｎｄｔｈｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｆｏｒｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｗａｓ２６７ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅ
ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆａｃｔｉｎｏｓｉｄｅＣｉｎｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆＡ．ｋｏｌｏｍｉｋｔａｗｅｒｅｖａｒｉｅｔｙｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｇｒｏｗｔｈｐｅｒｉｏｄｓ．ＡｃｔｉｎｏｓｉｄｅＣ
ｃｏｕｌｄｒｅａｃｈｉｔｓｈｉｇｈｅｓｔｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅｔｅｎｄａｙｓｏｆＪｕｎｅ，ｔｈｅｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｗｏｕｌｄｄｅｃｒｅａｓｅｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅｔｅｎｄａｙｓｏｆＪｕｌｙｓｌｉｇｈｔｌｙ，
ｉｔｃｏｕｌｄｒｅａｃｈｔｈｅｉｒｌｏｗｅｓｔｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅｔｅｎｄａｙｓｏｆＡｕｇｕｓｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｌｅｃｔｉｖｅｄａｔｅｆｏｒＡ．ｋｏｌｏｍｉｋｔａａｒｅｉｎ
ｔｈｅｍｉｄｄｌｅｔｅｎｄａｙｓｏｆＪｕｎｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ａｃｔｉｎｉｄｉａｋｏｌｏｍｉｋｔａ；ａｃｔｉｎｏｓｉｄｅＣ；ＲＰＨＰＬＣ；ｃｏｎｔｅｎｔ
［责任编辑 牛泽宇］
［收稿日期］ ２００６１１２２
［通讯作者］ 毕开顺，Ｔｅｌ：（０２４）２３９８６２９６，Ｅｍａｉｌ：ｂｉｋａｉｓｈｕｎ
＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ
ＲＰＨＰＬＣ测定白土茯苓中甲基氧化偶氮甲醇
樱草糖苷的含量
乔 蕾，陈晓辉，毕开顺
（沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 １１００１６）
［摘要］ 目的：建立白土茯苓中甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷的 ＲＰＨＰＬＣ定量分析方法。方法：采用 Ｃｅｎｔｕｒｙ
Ｃ１８ＡＱ色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），以甲醇水（４∶９６）为流动相，流速为１０ｍＬ·ｍｉｎ
－１，检测波长为２１５ｎｍ，
柱温３５℃。结果：甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷在１９１２～３８２４μｇ·ｍＬ－１线性关系良好（ｒ＝０９９９８），方法回收率
为９９５％，ＲＳＤ为２１％（ｎ＝９）。结论：该方法可用于白土茯苓的质量控制。
［关键词］ 白土茯苓；甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷；ＲＰＨＰＬＣ
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１８１９０００３
白土茯苓ＲｈｉｚｏｍａＨｅｔｅｒｏｓｍｉｌａｃｉｓＪａｐｏｎｉｃａｅ为百
合科肖菝葜属植物肖菝葜 Ｈ．ｊａｐｏｎｉｃａＫｕｎｔｈ．、短柱
肖菝葜 Ｈ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓＧａｇｎｅｐ．、华肖菝葜 Ｈ．
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＷａｎｇ．的干燥块茎。春、秋二季采挖，除去
须根及泥沙，洗净，趁鲜切片，晒干。主要分布于陕
西、甘肃、安徽、浙江、江西、福建、台湾、湖南、广东、
四川、云南等地。收载于四川、贵州、湖南省中药材
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第３２卷第１８期
２００７年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １８
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００７
标准［１］。白土茯苓味甘、淡，性平。主治小便淋涩，
白浊，带下，痈肿疮毒。临床多用于治疗阳梅毒疱，
筋骨挛痛，瘰疬痈肿，钩端螺旋体病。据文献报道，
甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷为一种强致癌物质，能
引起豚鼠神经中毒［２］。作者采用正交试验设计考
察了白土茯苓中的甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷的提
取工艺，建立了白土茯苓中的甲基氧化偶氮甲醇樱
草糖苷的ＲＰＨＰＬＣ定量分析方法，可以控制白土茯
苓药材中毒性成分的含量，从而更好地控制其质量。
１ 仪器与试药
ＬＣ１０Ａ岛津高效液相色谱仪，ＳＰＤ１０Ａ岛津紫外
检测器，ＣｈｒｏｍＴｅｋＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ色谱工作站，ＨＢ２３０Ａ柱
温箱（汉邦科技公司）；ＲＥ５２Ａ型旋转蒸发仪（上海亚
荣生化仪器厂）；ＡＢ１３５Ｓ电子天平（ＭＥＴＴＬＥＲＴＯＬＥ
ＤＯ仪器有限公司）。甲醇（色谱纯，山东禹王实业有限
公司禹城化工厂），其他试剂为分析纯。
白土茯苓药材共１２批，由沈阳药科大学孙启时
教授鉴定。来源见表１。
表１ 样品甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷的测定
产地 含量／％
云南文山州 ０２５２
广西河池 ００２４７
贵州紫云县 １０１８４
贵州紫云县 ２０１３３
贵州关峰县 ０１２５
四川１ ００６５７
四川２ ０１１１
四川宜宾县 ０１５２
贵州镇平县 ００４９５
安徽大别山 ０３４３
广西临桂县 ００３２１
贵州黄平县 ０１４２
对照品为本实验室自制，经 ＵＶ，ＩＲ，ＮＭＲ，ＭＳ
鉴定为甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷，经面积归一化
法测定纯度为９９８％。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＣｅｎｔｕｒｙＣ１８ＡＱ色谱柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相甲醇水（４∶９６）；流速 １
ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长 ２１５ｎｍ；柱温 ３５℃；进样量
１０μＬ。
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取甲基氧化偶氮
甲醇樱草糖苷对照品适量，置２５ｍＬ量瓶中，用流动
相溶解并定容至刻度，摇匀，制成质量浓度为 ９５６
μｇ·ｍＬ－１的甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷对照品溶
液。
２．３ 供试品溶液的制备 取白土茯苓药材粉末约
１ｇ，精密称定，加入８０％甲醇１５ｍＬ，８０℃水浴回流
提取３次，每次１ｈ，合并提取液并过滤，回收溶剂后
用流动相溶解并转移至１０ｍＬ量瓶中，定容至刻度，
摇匀，经微孔滤膜（０４５μｍ）滤过，作为供试品溶
液。
２．４ 系统适用性试验 在上述色谱条件下，甲基氧
化偶氮甲醇樱草糖苷与相邻峰的分离度均大于１５，
拖尾因子介于０９５～１０５，理论塔板数以甲基氧化偶
氮甲醇樱草糖苷计算不低于１万。色谱图见图１。
图１ 白土茯苓药材的ＨＰＬＣ图
Ａ．对照品；Ｂ．样品；１．甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷
２．５ 线性关系考察 分别吸取对照品溶液 ０２，
０４，０８，１６，３０，４０ｍＬ，分别置于１０ｍＬ量瓶中，
用流动相定容至刻度，摇匀，制成质量浓度依次为
１９１２，３８２４，７６４８，１５３０，２８６８，３８２４μｇ·ｍＬ－１
的标准系列溶液。按上述色谱条件测定。以对照品
溶液质量浓度Ｘ（μｇ·ｍＬ－１）对峰面积 Ｙ进行线性
回归，回归方程为 Ｙ＝２１８×１０４Ｘ－６９７×１０３（ｒ＝
０９９９８）。甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷在１９１２～
３８２４μｇ·ｍＬ－１线性关系良好。
２．６ 精密度试验 精密吸取对照品溶液１０μＬ，进
样分析，重复进样６次，测得甲基氧化偶氮甲醇樱草
糖苷峰面积的ＲＳＤ１２％。
２．７ 重复性试验 精密称取同一产地（贵州黄平
县）的白土茯苓药材粉末１０ｇ，按供试品溶液制备
项下制备６分样品溶液，按上述色谱条件测定，测得
甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷的含量的ＲＳＤ１６％。
２．８ 加样回收率试验 精密称取已测得含量的白
土茯苓药材粉末（贵州黄平县）９分，各０５ｇ。每３
分分别加入高、中、低３个不同质量浓度的甲基氧化
偶氮甲醇樱草糖苷对照品溶液，按供试品溶液的制
备项下制备样品溶液，按上述色谱条件测定，结果平
均回收率为９９５％（ｎ＝９，ＲＳＤ２１％）。
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第３２卷第１８期
２００７年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １８
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００７
２．９ 稳定性试验 精密称取白土茯苓药材，按供试
品溶液的制备项下制备成供试品溶液，并分别于０，
２，４，８，１２，２４ｈ按上述色谱条件测定，结果甲基氧化
偶氮甲醇樱草糖苷峰面积的 ＲＳＤ２０％，表明样品
溶液在２４ｈ内稳定性较好。
２．１０ 样品测定 精密吸取供试品溶液１０μＬ，注
入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定，采用外标一
点法计算样品中甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷的浓
度，结果见表１，图１。
３ 讨论
在对含量测定的提取工艺进行考察时，考察了回
流提取，超声提取和冷浸３种提取方法与甲醇、９５％
乙醇和水３种提取溶剂，结果表明甲醇回流提取效率
较高。同时又考察了体积分数分别为 ３０％，５０％，
８０％的甲醇为提取溶剂，结果表明８０％的甲醇提取效
率最高，确定为８０％的甲醇为提取溶剂。在此基础
上，用正交试验设计对白土茯苓的含量测定时的提取
工艺进行优化，考察了溶剂量、提取时间和提取次数，
经过直观分析和方差分析，确定最佳提取工艺为１５
倍量８０％的甲醇回流提取３次，每次１ｈ。
据文献报道甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷对人、
羊、猪和豚鼠都有毒性，有关甲基氧化偶氮甲醇樱草
糖苷对人体的中毒剂量尚未有文献报道，而豚鼠口
服灌胃给予甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷１ｇ·ｋｇ－１，
１２～１８ｈ后死亡。所以建议在白土茯苓用药时应
注意控制其中甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷的含
量［３］。
［参考文献］
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学杂志，２００５，４０（１）：１９．
［２］ ＬｏｕｗＷｅｒｎｅｒＫＡ，ＯｅｌｏｆｓｅｎＷｉｌｅｍ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃａｎｄｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｔｈｅｃｙｃａｄＥｎｃｅｐｈａｌａｒｔｏｓａｌｔｅｎｓｔｅｉｎｉＬｅｈｍ．（ｆａｍｉｌｙ
ｚａｍｉａｃｅａｅ）［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｎ，１９７５，１３（６）：４４７．
［３］ ＣｏｏｐｅｒＪｏｙｃｅＭ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆａｔｏｘｉｃｐｒｉｎｃｉｐｌｅｆｒｏｍｔｈｅｓｅｅｄｓｏｆ
Ｍａｃｒｏｚａｍｉａｓｐｉｒａｌｉｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌａｎｄＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＲｏｙａｌＳｏ
ｃｉｅｔｙｏｆＮｅｗＳｏｕｔｈＷａｌｅｓ，１９４１，７４：４５０．
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍａｃｒｏｚａｍｉｎｉｎＲｈｉｚｏｍａＨｅｔｅｒｏｓｍｉｌａｃｉｓ
ＪａｐｏｎｉｃａｅｂｙＲＰＨＰＬＣ
ＱＩＡＯＬｅｉ，ＣＨＥＮＸｉａｏｈｕｉ，ＢＩＫａｉｓｈｕｎ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａＲＰＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｍａｃｒｏｚａｍｉｎｉｎＲｈｉｚｏｍａＨｅｔｅｒｏｓ
ｍｉｌａｃｉｓＪａｐｏｎｉｃａｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＡＣｅｎｔｕｒｙＣ１８ＡＱｃｏｌｕｍｎ（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｗａｓｕｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆｗａｔｅｒ
（４∶９６）．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１０ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ２１５ｎｍ，ａｎｄｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ３５℃．
Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｗａｓｌｉｎｅａｒ（ｒ＝０９９９８）ｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ１９１２～３８２４μｇ·ｍＬ－１ｆｏｒｍａｃｒｏｚａｍｉｎ，ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｏｆｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓ９９５％，ｗｉｔｈＲＳＤ２１％ （ｎ＝９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｉｓｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｓｔｕｄｙｏｆＲｈｉｚｏｍａＨｅｔｅｒｏｓ
ｍｉｌａｃｉｓＪａｐｏｎｉｃａｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＲｈｉｚｏｍａＨｅｔｅｒｏｓｍｉｌａｃｉｓＪａｐｏｎｉｃａｅ；ｍａｃｒｏｚａｍｉｎ；ＲＰＨＰＬＣ
［责任编辑 牛泽宇］
·２０９１·
第３２卷第１８期
２００７年９月
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ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
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