全 文 ：2010 年 4 月第 17 卷第 4 期 中国中医药信息杂志 ·49·
HPLC 法测定白土茯苓中β-谷甾醇的含量
支文星,程玉钏,李先荣
(山西省中医药研究院,山西 太原 030012)
摘要：目的 建立白土茯苓中β-谷甾醇的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为 sinachrom
ODS-BP(4.6 mm×250 mm,5 µm),甲醇-0.1%磷酸(98∶2)为流动相,检测波长为 210 nm,流速为 1.0 mL/min。结果 β-
谷甾醇在 0.22～8.8 µg 范围内线性关系良好,r＝1.000 0；平均回收率为 96.5%,RSD＝1.15%。结论 本方法简便准
确,重复性好,可作为白土茯苓药材质量控制的有效方法。
关键词：β-谷甾醇；白土茯苓；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2010)04-0049-02
Determination of β-sitosterol in Rhizoma Heterosmilacis Japonicae by HPLC ZHI Wen-xing,
CHENG Yu-chuan, LI Xian-rong (Shanxi Academy of Traditional Chinese Medicine and Pharmacology, Taiyuan 030012,
China)
Abstract：Objective To establish the method to determine the content of β-sitosterol in Rhizoma
Heterosmilacis Japonicae. Method β-sitosterol in Rhizoma Heterosmilacis Japonicae was determined by
HPLC. Chromatographic column was sinachrom ODS-BP 5 µm column (4.6 mm×250 mm). Mobile phase
was methanol-0.1% H3PO4 liquor. Detection wavelength was 210 nm. Flow rate was 1.0 mL/min. Result
β-sitosterol showed a good linear curve in the range of 0.22～8.8 µg (r＝1.000 0). The average recovery was
96.5% with RSD of 1.15%. Conclusion The method was accurate and reproducible, and can be used to
control the quality of Rhizoma Heterosmilacis Japonicae.
Key words：β-sitosterol；Rhizoma Heterosmilacis Japonicae；HPLC；content determination
白土茯苓为百合科肖菝葜属植物肖菝葜、短柱肖菝葜、华
肖菝葜的干燥块茎。春、秋二季采挖,除去须根及泥沙,洗净,
趁鲜切片,晒干。其主要分布于湖南、四川、云南和贵州等地。
白土茯苓味甘、淡,性平,主治小便淋涩、白浊、带下、痈肿疮
毒。临床多用于治疗筋骨挛痛、瘰疬痈肿、梅毒、钩端螺旋体
病。
国内外有关白土茯苓的研究较少。20 世纪 70 年代,曾从白
土茯苓中分离得到β-谷甾醇(β-sitosterol)、棕榈酸
(palmaiticacid)和硬脂酸(stearic acid)等[1-4]。药理实验表
明,β-谷甾醇具有明显的降胆固醇、止咳、抗癌、抗炎等药理
作用[5]。目前报道的分析方法有薄层扫描法、气相色谱法、高
效液相色谱-紫外检测法、高效液相色谱-ELSD 法等[6-8]。本试
验对白土茯苓中β-谷甾醇含量进行测定。在选定的色谱条件
下,供试溶液中β-谷甾醇与相邻组分分离度良好。经方法学考
察,方法的重复性、稳定性、精密度、加样回收率均符合有关
规定,可用于该药材的质量控制。
1 仪器与试药
Aglient 1100高效液相色谱仪：AglientG四元泵(Quatpump),
Aglient G1322A 真空在线脱气机(Degrasser),Aglient G1313A
自动进样器(ALS),Aglient G1315 DAD 二极管阵列检测器,
Aglient chimstation system(安捷伦化学工作站)；电子天平
(德国赛多利斯,BP-211D 型)；超声波清洗器(KQ3200DB 型,昆
山市超声仪器有限公司)。

通讯作者：李先荣,Tel：0351-4668028
三氯甲烷(天津市申泰化学试剂有限公司)；无水乙醇(北
京化工厂)；甲醇(色谱纯,天津科密欧公司)；磷酸(北京红星
化工厂)。β-谷甾醇对照品(中国药品生物制品检定所,批号
11085-200504)；白土茯苓(山西振东药业提供,来源为贵州省
安顺市多个县区,经本院李先荣教授鉴定为百合科肖菝葜属植
物短柱肖菝葜)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：sinachrom ODS-BP(5 µm,4.6 mm×250 mm)；检测
波长210 nm；流动相：甲醇-0.1%磷酸(98∶2)；流速：1.0 mL/min。
理论塔板数均大于 3 000。色谱图见图 1。




A






B
注：A.β-谷甾醇对照品；B.白土茯苓供试品
图 1 白土茯苓 HPLC 图谱
0 5 10 15 20 25
0 5 10 15 20 25 t/min
·50· Chinese Journal of Information on TCM Apr.2010 Vol.17 No.4
2.2 对照品溶液的制备
精密称取β-谷甾醇对照品 4.4 mg,置 10 mL 容量瓶中,加
无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取白土茯苓粉末约 5 g,精密称定,置于锥形瓶中,加三氯
甲烷 100 mL,浸泡 1 h,超声处理(功率 150 W,频率 40 Hz)1 h,
滤过,蒸干,残渣加无水乙醇使溶解并转移置 25 mL 量瓶中,加
无水乙醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 µm)滤过,即得供试
品溶液。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取 0.5、1、2、5、10、20 µL 的对照品溶液,
注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定色谱峰面积。以峰面
积为纵坐标,对照品质量为横坐标,绘制标准曲线,回归方程
为：Y＝29.621X＋2.180 7,r＝1.000 0。结果显示,进样量在
0.22～8.8 µg 范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
取对照品溶液 10 µL,在上述色谱条件下重复进样 5次,分
别测得β-谷甾醇峰面积,结果β-谷甾醇峰面积 RSD＝1.03%,
表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
取同一份样品供试液,分别于配置后 0、2、5、9、12 h
进样测定,测得β-谷甾醇含量的 RSD＝1.80%,表明供试品溶
液在 12 h 内稳定。
2.7 重复性试验
取同一批样品粉末约 5 g,共 5 份,精密称定,分别按“2.3”
项下方法制备供试品溶液,各取 20 µL 分别进样测定,结果β-
谷甾醇含量平均值为 0.073%,RSD＝0.91%。
2.8 加样回收率试验
取样品 5份,每份取粉末约 2.5 g,精密称定,准确加入β-
谷甾醇对照品一定量,按“2.3”项下方法制备,测定含量,计算
回收率,结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
样品称样量 样品含量 对照品加入量 实测总量 回收率 平均值 RSD
(g) (mg) (mg) (%) (%) (%) (%)
2.465 75 1.80 2.2 3.95 97.7
2.698 63 1.97 2.2 4.11 97.3
2.479 45 1.81 2.2 3.92 96.8
2.493 15 1.82 2.2 3.94 96.4
96.5 1.15
2.424 66 1.77 2.2 3.89 96.4
2.671 23 1.95 2.2 4.03 94.5
2.9 样品含量测定
取 3批白土茯苓药材样品,按“2.3”项下方法制备供试品
溶液。分别精密吸取 10 µL,按上述色谱条件测定,结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果
序号 β-谷甾醇含量(%) RSD(%)
1 0.074
2 0.075 1.77
3 0.072
3 讨论
本试验采用 HPLC 法测定白土茯苓中β-谷甾醇的含量,操
作在常温下进行,方法灵敏度高,操作简便、快速,为白土茯苓
中β-谷甾醇的含量测定提供了可靠的依据。
在选择提取溶剂时,对氯仿、甲醇、乙醇进行了比较,结果
表明,氯仿不仅提取效率高,而且杂质少。
在选择提取方法时,对索氏提取法[9]和超声提取法进行了
比较,结果表明,超声提取法时间短、效率高、成本低,优于索
氏提取法。
流动相采用甲醇-水(98∶2)时,峰的对称性不好,经改用
甲醇-0.1%磷酸流动相系统后峰形状得到了改善,而且分离效
果得到了提高。
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(收稿日期：2009-09-22,编辑：陈静)

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另外,通过中药蒸汽在治疗寻常痤疮中改变 SER 和抑制痤
疮丙酸杆菌这两个重要环节的作用,进行了皮脂重量直接测定
法和取面部皮损分泌物做厌氧菌(痤疮丙酸杆菌)培养后行中西
药药敏试验等研究,验证了中药蒸汽熏蒸治疗痤疮的疗效,进一
步阐明了中药煎剂治疗痤疮的机理。
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(收稿日期：2009-10-14,编辑：陈静)